含H6N2型禽流感病毒HA蛋白的VSV假病毒制备

论文摘要

目的H6N2型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIVs）属于低致病性禽流感,未引起人类关注,但随着H6N2亚型AIVs分离率越来越高,该亚型AIVs将对人类健康构成威胁。本研究构建含有H6N2型禽流感病毒的HA蛋白的疱疹性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）,以对禽流感受体、中和表位等方面的进一步研究提供技术支持。方法从禽流感病毒 A/green peafowl/Qinghuandao/55/12（H6N2）（GP/QHD/55）中提取病毒RNA,逆转录出全长cDNA模板,选取HA基因序列,设计引物,扩增目的基因,引入酶切位点,与载体pcDNA3.1+连接,转化DH5α感受态细胞,制备pcDNA3.1+HA重组质粒并进行酶切测序鉴定;将鉴定阳性的重组质粒转染293T细胞通过Western blot验证HA的体外表达;将转染HA质粒的293T细胞感染VSV△G*-G病毒,制备VSV△G*-HA假病毒,通过荧光显微镜观察假病毒是否包装成功;血凝实验检测假病毒的血凝活性。结果1、以禽流感病毒 A/green peafowl/Qinghuandao/55/12（H6N2）（GP/QHD/55）为模板,成功构建pcDNA3.1+HA重组质粒。2、通过Western blot证实HA蛋白表达于293T细胞,荧光显微镜证实VSV△G*-HA假病毒包装成功。3、病毒血凝活性实验验证VSV△G*-HA假病毒具有与禽流感病毒相似的血凝活性。结论以VSV△G*-G病毒系统作为工具,成功构建了以H6N2型禽流感病毒HA蛋白为包膜的假病毒,且该假病毒中的HA蛋白具有与野生型禽流感病毒相似的生物学活性。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 赖天莹

导师: 单颖

关键词: 型禽流感病毒,重组基因,包膜蛋白,假病毒,血凝实验

来源: 锦州医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 锦州医科大学

分类号: R373

DOI: 10.27812/d.cnki.glnyx.2019.000250

总页数: 55

文件大小: 4655K

下载量: 131

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