导读:本文包含了质粒复合体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:复合体,质粒,蛋白,因子,沙眼,衣原体,纳米。
质粒复合体论文文献综述
李慧[1]（2016）在《壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体的生物相容性及促犬牙槽骨再生的研究》一文中研究指出目的:本项目拟制备壳聚糖-甘油磷酸温敏水凝胶(CS/α,β-GP)及负载含有骨形态蛋白2质粒DNA(p DNA-BMP2)的壳聚糖纳米粒CSn(p DNA-BMP2),二者复合,构建CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP复合修复体系。研究该体系的组织相容性,以及该体系在比格犬牙槽骨再生中的作用。方法:一、包载p DNA-BMP2的复合修复体系CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP及不包载p DNA-BMP2的纳米温敏水凝胶复合支架(CS/CSn-GP)的制备及性质检测:采用离子交联法制备CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP及CS/CSn-GP复合修复体系;采用扫描电镜观察其形态;试管倒置法测定其温敏性。二、CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性的测定:将1ml CS/CSn-GP复合修复体系注入18只SD大鼠左、右后肢大腿肌袋内,于3天及1、2、4、6、9周分批处死,取注射部位组织,进行HE染色,并观察其炎症反应。叁、CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在非炎症性骨缺损中的修复作用测定:SD大鼠颅骨左右两侧,各做5mm圆形缺损,随机分为两组:CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP组(包载质粒组)和CS/CSn-GP组(无质粒组)。两组大鼠均于颅骨左侧分别注入CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP或CS/CSn-GP复合体系,右侧不置入任何材料做空白对照。于第4周和第8周,两组分批处死等量SD大鼠,实验部位颅骨HE染色,观察其成骨差异性。四、CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在炎症性骨缺损中的修复作用测定:比格犬第2、3前磨牙,建立牙周炎模型,将32颗实验牙齿随机分为叁组:(1)CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP组(包载质粒组);(2)CS/CSn-GP组(无质粒组);(3)空白组。每组注入相应材料,8周后处死。(1)Masson叁染色观察牙周炎部位牙槽骨再生的情况;(2)钙钴法染色观察骨缺损部位碱性磷酸酶(ALP)表达情况。结果:一:CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系的制备及性质检测:(1)扫描电镜显示复合体系为多孔的交联网状结构且CSn(p DNA-BMP2)能均匀分散于水凝胶支架的叁维网状结构中;(2)试管倒置法显示:复合体系均可在37°C下3 min内由可流动的溶胶状态转变为不可流动的凝胶状态。二:CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性的测定:HE切片显示,复合体注入肌袋后,未见明显炎症反应。叁、CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在非炎症性骨缺损中的修复作用测定:HE染色显示,两组相对于空白对照,均有不同程度的新骨修复,包载质粒组较无质粒组新骨生成量多且成熟度高。四、CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在牙周炎症性骨缺损中的修复作用测定:(1)Masson叁染色显示包载质粒组与无质粒组,均有不同程度的牙槽骨再生,包载质粒组再生显着;(2)钙钴法显示包载质粒组ALP强阳性,无质粒组ALP弱阳性,空白对照组为阴性。结论:一:CS/CSn-GP复合修复体系具有良好的组织相容性及温敏性,是一种良好的组织工程支架。二:CS/CSn-GP复合修复体系有利于牙槽骨再生,包载p DNA-BMP2后促牙槽骨再生作用更为显着。(本文来源于《青岛大学》期刊2016-05-27）
曹文娟,戴文婷,杨晓玉,粟盛梅,龚思露[2]（2015）在《沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18》一文中研究指出目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显着低于对照组(P<0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2015年05期）
曹文娟[3]（2014）在《沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18》一文中研究指出目的：沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）是导致沙眼、性传播疾病的重要病原微生物。炎症反应是Ct致病的基础，但其具体机制尚不明确。pORF5是由沙眼衣原体质粒基因编码、唯一一种分泌性质粒蛋白。NALP3炎性复合体是一类位于细胞核内多蛋白复合物，激活NALP3炎性复合体后可诱发产生炎症因子。本实验探讨pORF5质粒蛋白是否通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β、IL-18炎症因子，以及p38MAPK信号通路与NALP3炎性复合体之间的关系。方法：将pGEX-6p-1/pORF5原核表达载体转化XL1-blue菌，0.2mM IPTG诱导表达pORF5融合蛋白。pORF5融合蛋白通过Glutathione Sepharose4B纯化和PreScission Protease切除制备没有GST标签的pORF5质粒蛋白。BCA法测量pORF5质粒蛋白浓度，SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定pORF5质粒蛋白。用3～36μg/mL的pORF5质粒蛋白刺激经PMA处理的THP-1细胞，并于0h、8h、16h、24h、36h收集上清及细胞，ELISA检测IL-1β、IL-18的含量；Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体和IL-1β的mRNA表达水平；Western blotting检测p38的磷酸化情况。利用RNA干扰技术沉默NALP3、ASC基因的表达，观察NALP3和ASC的mRNA表达、IL-1β和IL-18的表达水平及对p38MAPK信号通路的影响。用Caspase-1特异性抑制剂（Z-YVAD-FMK）和p38抑制剂（SB202190）预处理THP-1细胞30min后，再用24μg/mL的pORF5质粒蛋白分别刺激THP-1细胞30min和24h，ELISA分析其对IL-1β和IL-18产生的影响，Realtime-PCR分析其对NALP3炎性复合的mRNA的影响。结果:（1）pGEX-6p-1/pORF5原核表达载体转化XL1-blue菌后，IPTG诱导表达54KD大小的pORF5融合蛋白，经PreScission Protease切除后得到不含有GST标签的大小约28KD的pORF5质粒蛋白。（2） pORF5质粒蛋白能以剂量和时间依赖性方式刺激THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。用24μg/mL的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞，IL-1β蛋白表达水平在24h达到最高，IL-18在16h达到最高。（3） Realtime-PCR结果发现，pORF5质粒蛋白能刺激NALP3炎性复合体mRNA的表达；Western blotting结果发现，pORF5质粒蛋白能促进p38发生磷酸化。（4）NALP3-siRNA、ASC-siRNA转染THP-1细胞后，NALP3、ASC mRNA的表达水平分别降低31.5%、48%。NALP3-siRNA组IL-1β mRNA表达降低23%、ASC-siRNA组降低了39%。ELISA结果显示NALP3-siRNA组IL-1β和IL-18的表达分别减少27.7%、21%，ASC-siRNA组IL-1β和IL-18的表达分别减少44.1%、40.1%。Western blotting结果发现p38磷酸化水平与对照组无明显差异。（5） Caspase-1抑制剂能降低IL-1β、IL-18的表达，分别降低41.9%和37.2%；p38抑制剂使IL-1β、IL-18表达降低，分别降低29.6%和37.8%，NALP3、ASC、Caspase-1及IL-1β的mRNA表达分别减少23%、31%、13%和23%。结论:（1）pORF5质粒蛋白可通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-18。（2）pORF5质粒蛋白激活的p38MAPK信号通路能够影响NALP3炎性复合体的激活。(本文来源于《南华大学》期刊2014-05-01）
李世轶[4]（2014）在《壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒纳米复合体构建及转染MG63细胞效率研究》一文中研究指出背景：在口腔医学领域,种植义齿具有传统义齿不可媲美的优点,是当前牙列缺损、缺失优选修复方案。种植义齿成功关键在于种植体早期稳定性和形成良好的骨结合。骨结合是种植体表面与骨表面间形成直接有序的结构和功能连接。因此,种植体表面处理一直是学界研究热点。以往,种植体表面处理主要集中在种植体表面物理化学处理,而基因水平的生物化学处理鲜有报道[1]。在种植体表面引入纳米尺寸的基因载体,通过载体系统内的基因激活作用,直接加强加快成骨信号的启动和转导,从而加快成骨与骨整合的研究在国内外尚属空白。人骨形成蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)具有独特的诱导成骨活性,在修复骨质缺损方面发挥着重要的作用[2-4]。目前发现的BMP家族有21个成员,即BMP1～BMP21.在已经被克隆的7个hBMP成员基因中,hBMP2的诱导骨形成活性最强[5]。hBMP2是一种低分子量糖蛋白,属于TGF超家族成员,它作为一种具有骨诱导活性的蛋白,可以促进Ca、P在钛金属表面沉积,从而提高种植体一骨界面结合率,加快骨结合进程[6]。因此含hBMP2的表达型质粒是种植体基因活性表面设计的优选。完成基因选择后,建立一个安全有效的载体系统也极其重要。传统基因治疗中,慢病毒载体及脂质体类载体已被广泛研究,但由于其生物安全性不确定,尚未应用于临床[7-8]。壳聚糖[9]是存在于自然界中唯一一种带阳离子、能生物降解的纳米级载体材料,其取材广泛,价格便宜,具有良好的生物相容性、可降解性和黏膜粘附性。在弱酸性溶液中,壳聚糖因分子中的葡萄糖氨基质子化而带正电荷,能够与带负电荷的质粒DNA通过静电作用凝聚成多聚复合物,从而使质粒DNA压缩成结构相对致密的纳米级颗粒,因此适合包载蛋白质、多肽、疫苗和基因等生物活性大分子,可以代替脂质体及病毒类等物质作为药物、蛋白、基因等的载体[10-12]。因此,本研究将利用基因重组技术在体外构建人BMP2基因的真核表达重组质粒,并采用去溶剂法合成壳聚糖/质粒纳米复合体,检验其在人骨肉瘤细胞(MG63)中的转染率,为后续种植体表面生物处理奠定物质基础。第一章：pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒的构建、扩增、纯化及测定目的：构建能在真核细胞内表达EGFP和hBMP2-His基因的共表达质粒pIRES2-EGFP-hBMP2-His,完成其扩增、纯化及测定,为进一步应用该表达质粒与壳聚糖进行纳米复合体构建及转染MG63细胞提供物质基础。方法：通过PCR方法扩增目的基因片段hBMP2-His,在引物中引入BamHI和EcoRI酶切位点,分别回收质粒pIRES2-EGFP酶切大片段和目的基因hBMP2-His酶切产物后,将质粒pIRES2-EGFP回收大片段与目的基因片段hBMP2-His连接在一起。将连接后的产物转化入感受态菌DH5α,以摇菌法扩增质粒,用质粒提取试剂盒提取并纯化质粒,并进行质粒酶切鉴定及测序。结果：成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-Hi s质粒,并成功扩增。大量提取后获得高纯度目的质粒。BamH I和EcoR I双酶切结果正确,测序结果正确。可供后续研究使用。第二章：壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒纳米复合体构建目的：探讨弱酸性条件下5种不同分子量及脱乙酰度的壳聚糖在不同N/P比下与质粒复合后形成的纳米粒径,测定其包封率,并检测其粒径大小及表面ζ电位,从5组壳聚糖中筛选出介导转染的最佳条件。方法：凝胶渗透色谱法测定五种壳聚糖分子量范围为17KDa～379KDa,酸碱滴定法测定其脱乙酰度范围为79%～97.37%。按不同分子量和脱乙酰度将壳聚糖分为A、B、C、D、E五组,采用去溶剂法在不同N/P比(壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比)下构建壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体,琼脂糖凝胶电泳分析不同N/P比值情况下壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒包裹情况,荧光分光光度计测定其包封率,ζ电位仪及粒度仪检测纳米复合体表面ζ电位及粒径大小,原子力显微镜观察纳米复合体形态。结果：1.0.6%琼脂糖凝胶阻滞电泳实验证实了壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有一定包裹作用,当N/P=1时,壳聚糖不能完全包裹基因,而N/P≥3时,壳聚糖对基因完全包裹。2.荧光分光光度计法测定C组壳聚糖在N/P为5时,对质粒DNA平均包裹率达(96.03±0.25)%(X±S,n=3)。3.合成的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体平均粒径大小为111.7nm～3214.2nm、平均表面ζ电位4.93mV～16.79mV,粒径大小随N/P比增大呈减小趋势,纳米复合体表面ζ电位随N/P比增大而呈增大且稳定趋势,原子力显微镜镜下可观察到球形纳米复合体。4.在纳米复合体粒径检测中发现,每组粒径分布几乎都会出现双峰,其中主峰粒径较小,数量较多；随着N/P比增大,双峰出现几率也随之增大,第二峰中大粒径复合体数量相应增多。5.根据纳米复合体的粒径和电位检测结果显示：C组壳聚糖N/P=5时,与目的质粒复合形成的纳米复合体最适合转染,并可能取得较高的转染效率。第叁章;壳聚糖介导的pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒在MG63细胞内转染率分析目的：探讨不同N/P比对于壳聚糖介导质粒基因转染MG63细胞的转染率影响。方法：将MG63细胞复苏传代培养,分别接种于细胞培养板中,选取前期试验中C组壳聚糖(分子量77.8KDa,脱乙酰度97.37%)为实验组,按照N/P比(壳聚糖中胺基/质粒DNA中磷酸基之比)=3,5,7,10制成壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-Hi s纳米复合体,并对MG63细胞进行细胞转染,48h后上流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白的阳性细胞百分比,测得其转染率。同期设置脂质体阳性对照组和空白对照组。结果：1.在实验组不同N/P比的转染孔中,均出现转染阳性细胞,荧光倒置显微镜下能观察到表达绿色荧光蛋白的MG63细胞；但随着N/P比增加,转染率并未持续随之上升,相反,在N/P=5细胞转染孔中,其平均转染率最高,达(12.31±0.76)%(X±S,n=3),N/P>5后转染率随着N/P比增大而减小。2.在仅加入空白质粒的对照组中,转染48h后荧光显微镜下基本观察不到绿色荧光表达细胞,流式细胞仪检测结果显示其转染率基本为0,经LSD-t检验,结果显示与实验组相比有统计学差异(P<0.05)。3.脂质体对照组中,其转染48h后荧光显微镜下可观察到明显的阳性细胞,流式细胞仪检测结果显示其平均转染率为(30.36±3.32)%(X±S,n=3)。结论：通过去溶剂法,壳聚糖能够成功包裹目的基因,并将pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒压缩,形成适合转染MG63细胞的直径为数百纳米的微粒。N/P比是影响壳聚糖介导基因转染的重要因素,这可能和纳米复合体的胞吞及入胞后基因的释放有关。壳聚糖介导的基因转染效率显着低于脂质体,其原因是,相比脂质体通过细胞膜表面脂蛋白受体识别系统而言,壳聚糖介导的基因入胞过程需要细胞内吞作用。壳聚糖水溶性较差,需要在酸性环境下溶解,该环境对细胞生理代谢有一定影响,进而影响质粒表达。(本文来源于《南方医科大学》期刊2014-04-30）
程龙,刘成圭,张凯伦,胡志伟,李源[5]（2013）在《携带质粒的PLGA纳米粒-超声微泡复合体的构建及细胞相容性研究》一文中研究指出目的构建携带tPA基因质粒的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒-超声微泡复合体,检测其理化性质、体外缓释方式、细胞相容性。方法应用双次乳化法制备携有tPA基因质粒的PLGA纳米粒;应用薄膜水化超声法制备阳离子超声微泡;两者通过静电吸附作用,形成质粒-纳米粒-超声微泡复合体(plasmid encapsulated nanoparticle-mi-crobubble complex,PENMC)。检测PLGA纳米粒的质粒载量,该复合体PENMC的质粒载量;检测PLGA纳米粒及复合体体外缓释质粒的情况;CCK-8法检测纳米粒及复合体PENMC的细胞毒性。结果检测携带质粒的纳米粒粒径为(217.2±2.2)nm,zeta电位为(-15.24±0.83)mV。微泡平均大小为(3.2±1.5)μm,zeta电位为(13.66±2.05)mV。微泡浓度为(4.3±1.1)×108/mL。PENMC平均直径为(4.6±1.7)μm,zeta电位为(2.23±1.45)mV。浓度为(3.0±1.3)×108/mL。1mg PLGA纳米粒载有质粒(42.3±2.1)μg。1mL PENMC中带有质粒(20.5±2.7)μg。PLGA纳米粒及复合体PENMC前7d累计释放量均为(57±3)%。起始段短时间内快速释放,后呈现稳定、缓慢释放。体外细胞毒实验证实PLGA纳米粒及复合体PENMC均未见明显细胞毒性效应。结论所构建的纳米粒-超声微泡复合体显示出较好的缓释效果,较低的细胞毒性,为后续将其应用于基因治疗奠定了实验基础。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2013年04期）
王瑞斌,郭新秋,李慧琴,何琳[6]（2012）在《阳离子聚合物/质粒DNA形成的纳米复合体粒径测量》一文中研究指出利用TEM、AFM和动态光散射对阳离子聚合物/DNA复合体的粒径进行了测量比对。结果表明,当阳离子聚合物将DNA完全压缩成纳米结构后,形成了单分散的纳米颗粒,动态光散射的结果偏大,AFM和TEM的结果比较接近,但是每种方法都有利弊。为此,综合测量纳米复合体的颗粒大小,对进一步研究阳离子基因载体运输治疗基因的突破细胞屏障的机理具有重要意义。(本文来源于《实验室研究与探索》期刊2012年10期）
赵秀玲,张梅,何金生,付远辉[7]（2012）在《人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT。设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P。同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L。用重组质粒转染BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达。结论获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2012年08期）
李生伟,甘霖,龚建平,彭勇,丁雄[8]（2005）在《TIMP-3质粒脂质复合体防止移植物慢性排斥反应的实验研究》一文中研究指出目的防止移植物慢性排斥反应(CR),提高移植物存活时间,通过对CR模型转染TIMP3质粒,探讨其防止CR发生的作用。方法Wistar大鼠120只,5D系大鼠60只,分成A、B、C3组,A、B组为异系(SD Wistar)移植组,C组为同系(Wistar Wistar)移植组。对原位大鼠腹主动脉移植模型不同时点,通过形态学观察、免疫组织化学SP染色法测定移植段腹主动脉内MMP2、TIMP2,3及Fas的表达,TUNEL法测定凋亡指数(AI),Northern杂交定量分析MMP2表达,酶图分析术后MMP2的活性,判断TIMP3质粒在防止CR的作用。结果①移植段腹主动脉内膜厚度增生程度由强到弱依次为A、B、C组。②同系移植组MMP2较低,MMP2、TIMP2峰值均出现于术后第4w;B组MMP2表达显着增加,峰值出现于术后第2周;A组与术后1、2wTIMP3表达(1.7±1.1和0.9±0.4)较B、C组明显增强(P<0.05)。③A组术后2w时内膜和中膜出现较多Fas染色阳性细胞(2.7±0.8和1.8±0.9),与B组及C组比较,均有显着差异(P<0.05),同期A组内膜层的凋亡指数(AI)值为14.9%±6.8%,与B、C组比较也有显着差异(P<0.05)。结论CR发生的早期阶段导入外源性TIMP3基因,既可干预MMPS/TIMPS间的平衡,抑制MMPS对基质的降解,阻碍SMC向内膜层迁移,又促进了增殖的内膜层细胞凋亡,可能是减缓CR发生的有效途径。(本文来源于《中国现代普通外科进展》期刊2005年03期）
质粒复合体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显着低于对照组(P<0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
质粒复合体论文参考文献
[1].李慧.壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体的生物相容性及促犬牙槽骨再生的研究[D].青岛大学.2016
[2].曹文娟,戴文婷,杨晓玉,粟盛梅,龚思露.沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18[J].中国免疫学杂志.2015
[3].曹文娟.沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18[D].南华大学.2014
[4].李世轶.壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒纳米复合体构建及转染MG63细胞效率研究[D].南方医科大学.2014
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