导读:本文包含了组分转移论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:结直肠癌,代谢综合征,转移,复发
组分转移论文文献综述
陈秀清,杨立勇,沈喜妹,刘东晖,吴佩文[1]（2019）在《代谢综合征及其组分与结直肠癌根治术后转移复发的相关性》一文中研究指出目的探讨代谢综合征(MS)及其组分与结直肠癌(CRC)患者术后转移复发的相关性。方法 CRC患者498例,采用Kaplan-Meier法计算不同代谢情况下CRC转移复发率,采用COX回归分析MS及其组分与转移复发的相关性。结果结肠癌中,MS组与非MS组相比,术前体重指数(BMI)、收缩压(SBP)、叁酰甘油(TG)、空腹血糖(FPG)、年龄较高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较低(P<0.05);直肠癌中,MS组与非MS组相比,术前BMI、SBP、舒张压(DBP)、TG、FPG、年龄较高,而HDL较低(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示结肠癌和直肠癌中,高血糖组转移复发率显着高于血糖正常组(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,结肠癌转移复发与血糖、TNM分期、是否化疗呈正相关(P<0.05);直肠癌转移复发与血糖、TNM分期、神经周围侵犯呈正相关(P<0.05)。结论 MS组分之一糖代谢异常与CRC转移复发呈正相关。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2019年16期）
郭滢[2]（2018）在《理冲生髓饮有效组分调控卵巢癌侵袭转移及其微环境因子的实验研究》一文中研究指出第一部分目的:本实验观察理冲生髓饮(LCSSY)有效组分对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中微环境相关因子的改变,探讨LCSSY有效组分对卵巢癌侵袭转移的抑制作用及相关分子机制,探索LCSSY对卵巢癌多信号靶点的作用机制。方法:建立Balb/C裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、贝伐单抗组、LCSSY有效组分低剂量组、LCSSY有效组分中剂量组、LCSSY有效组分高剂量组。观察药物作用后裸鼠的肿瘤生长情况,各组给药干预18天,其中每隔两天测量瘤体体积,绘制生长趋势,于最后一次给药后处死裸鼠,将瘤体称重,采用RT-PCR检测瘤体中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达情况;免疫组化法检测瘤体中人毛细血管内皮细胞(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)、IL-1、低氧诱导因子-1(HIF-1)表达;WesrernBlot法检测转化生长因子-β相关激酶(Tak1)、去磷酸化转化生长因子-β相关激酶(p-Tak1)、核因子κB抑制蛋白激酶(IKKα)、去磷酸化核因子κB抑制蛋白激酶(p-IKKα)、核因子κB抑制蛋白(IKBα)、MMP9、TNF-α、IL1p表达的差异。结果:1.与模型组相比,LCSSY有效组分不同剂量组均可抑制卵巢癌肿瘤生长(P<0.05)。2.与模型组相比,LCSSY有效组不同剂量组均能够降低肿瘤组织中TNF-α、IL-1p的mRNA表达,抑制效果呈量-效相关性(P<0.05),其中LCSSY高剂量组和贝伐单抗组中IL-1β mRNA表达未见明显差异(P>0.05)。3.与模型组比较,LCSSY有效组分不同剂量组均能够降低卵巢癌组织VEGF、MMP9、IL-1、HIF-1蛋白的表达,且差异显着(P<0.05)。4.与模型组比较,LCSSY有效组分不同剂量和贝伐单抗对Tak1、p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、TNFα、IL1β、MMP9 均有下调作用,其中LCSSY有效组分不同剂量和贝伐单抗对p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、TNFα、IL1β、MMP9的下调作用有显着差异(P<0.05),LCSSY不同剂量呈量-效相关;但LCSSY不同剂量和贝伐单抗组对Tak1的表达未见明显差异(P>0.05)。结论:1.LCSSY有效组分能够抑制卵巢癌的生长。2.LCSSY有效组分可能是抑制基质金属蛋白酶(MMP9)、炎性相关因子(TNF-α、IL-1、IL-6)、缺氧诱导因子(HIF-1)调控卵巢癌侵袭转移微环境。3.LCSSY有效组分可能激活相关通路激活因子(p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα)的表达,多通路、多靶点的抑制卵巢癌新生血管生长因子(VEGF)的表达,抑制卵巢癌的侵袭和转移。第二部分目的:观察理冲生髓饮有效组分不同剂量作用卵巢癌SIC0V3细胞增殖与凋亡、侵袭与转移和血管生成的改变,验证理冲生髓饮有效组分抑制卵巢癌SK0V3细胞的侵袭和转移能力,探索其相关机制。方法:体外培养卵巢癌SK0V3细胞,并且制备LCSSY有效组分含药血清,分为LCSSY有效组分高、中、低剂量组;培养鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,随机分为LCSSY含药血清高、中、低药物组以及贝伐单抗组和空白组,观察各组药物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的形态学改变;MMT法检测卵巢癌SK0V3细胞在不同剂量LCSSY含药血清作用后24h和48h的增殖抑制率;应用划痕实验、Transwell小室方法观察各组药物对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响;应用Elisa法检测不同剂量LCSSY有效组分含药血清和贝伐单抗作用后卵巢癌SKOV3细胞上清液中VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-tx的表达。结果:1.LCSSY有效组分作用后,新生血管中的1、2级血管数目均有不同程度减少,具有统计学意义(P<0.05);LCSSY有效组分不同剂量抑制血管生成效果仍低于贝伐单抗组(P<0.05);LCSSY有效组分中剂量组1、2级血管较LCSSY有效组分低、高剂量组相比数显着减少(P<0.05)。2.LCSSY有效组分不同剂量对卵巢癌SKOV3细胞作用24h和48h后细胞增殖抑制率,结果显示：随治疗时间延长,细胞的存活率和药物剂量呈负相关,具有时间的依赖性(P<0.05)。3.各组药物作用24h后,空白组划痕几乎完全愈合,LCSSY有效组分高剂量组和贝伐单抗组的细胞划痕愈合能力降低,随时间的增加,划痕面积未见明显减少(P<0.05)。4.Transwell小室结果显示空白组卵巢癌SKOV3细胞被染色面积大,迁移细胞数目显着增多,LCSSY有效组分各剂量组和贝伐单抗组卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移作用显着降低(P<0.05);其中迁移抑制能力贝伐单抗组>LCSSY有效组分高剂量组>LCSSY有效组分中剂量组>LCSSY有效组分低剂量组。5.与空白组比较,LCSSY有效组分各剂量组和贝伐单抗组细胞上清液VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-a的表达均明显下调,其中VEGF、IL-6、IL-1、TNF-a表达水平与药物剂量呈正相关(户<0.05);MMP-9在各组剂量中比较未见明显差异(P>0.05)。结论:1.LCSSY有效组分能够抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和转移的能力。2.LCSSY有效组分对卵巢癌SK0V3细胞的抑制作用呈现浓度和时间的依赖性。3.其机制可能与相关炎性因子(如IL-6、IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-a)的改变有关,进一步抑制血管生长因子VEGF的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。(本文来源于《黑龙江中医药大学》期刊2018-06-01）
许良飞[3]（2018）在《金葡菌杀白细胞素S组分通过甲基转移酶SET8抑制白血病细胞增殖和侵袭机制研究》一文中研究指出目的:急性髓系白血病(AML)是成人最常见的白血病类型,死亡率较高。在之前的研究中,我们报道了LukS-PV可以在体外促进AML细胞株HL-60、THP-1凋亡,具有抗白血病的作用,但表观遗传修饰改变是否在其中发挥作用尚不清楚。赖氨酸甲基化转移酶SET8在多种肿瘤细胞中高表达,促进肿瘤细胞增殖及侵袭,但在AML的形成、发展等过程中的作用尚鲜有报道。本课题首先研究SET8是否在AML患者外周血中的表达,进而探究Luks-PV是否可通过下调SET8发挥抗白血病效应。方法:(1)为研究临床AML患者外周血白细胞中set8基因表达情况,我们收集临床AML初发患者及正常人外周血,分离白细胞,提取RNA,采用qRT-PCR检测set8基因表达量。(2)为研究Lusk-PV是否可下调SET8。我们使用不同浓度的Luks-PV(0,0.25,0.5,0.75,1.0μM)分别与AML细胞株THP-1、Hl-60细胞共同孵育24h,采用qRT-PCR和western blot技术检测Luks-PV刺激后,THP-1和HL-60细胞中SET8基因和蛋白水平的变化。通过western blot技术检测Luks-PV处理后组蛋白H4第20赖氨酸残基单甲基化水平(3)为探究赖氨酸甲基化转移酶SET8下调是否具有抗白血病效应,我们构建了set8抑制表达慢病毒载体及阴性对照慢病毒载体,分别转染AML细胞株THP-1、HL-60细胞中,荧光显微镜、qRT-PCR、western blot等技术验证SET8表达被抑制的效果,嘌呤霉素筛选稳定细胞株。采用CCK8试验、流式细胞术、Transwell体外侵袭转移实验和Western blot等技术分别检测SET8抑制表达对细胞增殖、细胞凋亡、细胞侵袭转移能力和H4K20me1表达水平的影响。结果:(1)与正常人相比,临床AML初发患者外周血白细胞中set8表达水平显着增高,差异有统计学意义(P<0.01);(2)使用Luks-PV刺激24h后,随着Luks-PV浓度的增加,THP-1及HL-60细胞株set-8 mRNA及蛋白水平表达降低,呈浓度依赖性,且变化有统计学意义(P<0.05);同对照组相比,Luks-PV刺激组细胞H4K20me1水平显着降低;(3)使用set8抑制表达慢病毒载体转染THP-1和HL-60细胞株,与慢病毒阴性对照组相比,抑制SET8表达后,THP-1和HL-60细胞凋亡率均明显增加,分别为(19.57±2.56%VS 6.98±0.95%)和(18.26±2.34%VS 4.9±0.33%),差异有统计学意义(P<0.01);(4)SET8抑制表达后,THP-1及HL-60细胞增殖均受到明显抑制,并且在72h差异最为明显(P<0.05);(5)SET8抑制表达后,THP-1和HL-60细胞侵袭至下室的细胞数明显减少,分别为(20000±4330 VS40000±5000)(P=0.0346)和(17500±2500 VS 40833±5204)(P<0.0339);(6)SET8抑制表达后,THP-1和HL-60细胞株的H4K20me1的表达水平均降低。结论:(1)抑制SET8的表达,可以抑制AML细胞株THP-1、HL-60的增殖和侵袭,促进细胞凋亡。(2)Luks-PV可能通过下调SET8表达,降低H4K20单甲基化水平,发挥抗白血病效应。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-03-01）
Ahmed,Musa,Hago,Bakheet[4]（2017）在《Annexin7调控对体内外小鼠淋巴道转移肝癌细胞及其亚细胞组分Ezrin表达改变的影响》一文中研究指出背景:肿瘤转移是肿瘤细胞从原生肿瘤位点(也称为原生肿瘤)向次生肿瘤位点转移的过程。肿瘤转移机制非常复杂,有多重因素可以导致肿瘤转移。粘附,扩散,转移是肿瘤转移的主要叁个步骤,不同基因和蛋白通路在肿瘤转移过程中的影响也不同。淋巴癌转移是一种更为复杂的过程,包含了多种影响因素,都可导致癌细胞转移至淋巴系统。所有淋巴转移的肿瘤都是恶性的,并且淋巴癌转移常常是高致死率的诱因。肝癌(HCC)作为一种全球高致死率的疾病,位列世界恶性肿瘤排行第二位,全球已有746,000位患者因肝癌而去世。HCC流行病和地方病区域集中在东亚,北非和西非,以及欧洲和美洲的一些区域。HCC最大的挑战是与高度血管瘤及显性异质多细胞系疾病相互作用,导致了传统的化疗药物无效。HCC患者的早期诊断对于提高患者的生存率及生活质量非常关键。Ezrin和Annexin7(A7)在癌症转移中起到重要的作用。然而,Ezrin和A7在淋巴癌转移和肝癌转移中的研究工作并不充分。为了完善这部分工作,我们实验室致力于找到一种新型标志物,这将帮助我们在早期诊断或治疗肝癌、淋巴癌转移的疾病中提供新的靶点,这项研究也应用于评价Ezrin作为疾病诊断、预防LNMHCC的一种生物标志物。Subcellular fraction是一种改变最多、最为高效的生物技术手段,帮助找到疾病的细胞基因和蛋白质的功能位点也有助于帮助研究这些细胞基因和蛋白的实际作用以及他们之间的相互联系。此外,Subcellular fraction也有助于寻找到低复制数目的蛋白质及分辨蛋白质的功能,并且确定它们的生物活性核酸合成过程氧化还原酶蛋白质细胞骨架信号转导通路细胞结构和核苷流动性局部粘贴等等。本研究旨在研究Ezrin表达在高淋巴癌转移细胞系(Hca-F>70%)及低淋巴转移细胞系(Hca-P<30%),HCC细胞线性的表达及A7对Ezrin表达效果的影响。目的:1、了解Ezrin在淋巴道转移肝癌(LNM-HCC)在体内和体外细胞和组织中的表达规律。2、研究A7对Ezrin在不同水平上的影响及在LNM-HCC体内、体外细胞功能的影响。3、比较Ezrin在不同类型的LNM-HCC亚细胞组分中的表达。4、评价Ezrin的在体内、体外肿瘤组织中的表达能否作为诊断和预防LNM-HCC的生物标志物。方法:利用同种基因型实验鼠,高淋巴癌转移肝癌细胞系(Hca-F<70%转移)和低淋巴癌转移肝癌细胞系(Hca-P>30%转移),近亲繁殖的615鼠,分别作为体内、体外模型。Hca-F和Hca-P两种细胞株用液氮复苏,并且用无菌PBS洗涤叁次,将10%无菌FBS加入无菌1460细胞培养液中培养24小时,5%CO2连续通气24小时,保持温度为37℃。在Hca-F细胞株中上调A7表达(A7-c DNA-Hca-F),并且在Hca-P设计A7基因沉默细胞株(A7-sh RNA-Hca-P)。Geneticin 418(G 418)药物400μg/μl(在细胞培养液中)使用叁周,来筛选稳定转染的细胞。q RT-PCR及western blot用于证明A7基因和蛋白表达的稳定性。此外,q RT-PCR、western blot、免疫细胞组织化学、免疫荧光等技术也用来检测Ezrin和Annexin 7基因和蛋白质在母系细胞系上转换的表达。另外,迁徙和入侵实验也可应用于研究我们感兴趣的蛋白质对肿瘤转移现象所起的作用。将不同组细胞以2 x 106细胞/鼠注射到每组615鼠的足垫。将处理过的鼠饲养5周,在第五周后采集原生肿瘤和次生肿瘤组织加入苏木精伊红后研究组织形态学改变,Ezrin表达用免疫组化的方法,利用q RT-PCR和western blot对原生肿瘤和次生肿瘤进行评价,另外,血浆中的Ezrin表达用酶联免疫反应(ELISA)进行测定。结果:体内实验:结果表明,q RT-PCR和western blot结果显示A7稳转后,成功构建上调Hca-F细胞系(高淋巴道转移)和下调Hca-P细胞系(低淋巴道转移)。用于动物模型所构建的细胞在第10天加入A7。亚细胞成功分离后,采用哺乳动物蛋白质提取方法来提取五种亚细胞组分:细胞质、细胞膜、细胞核核膜、核仁和组蛋白带、细胞骨架。在淋巴道转移性肝癌的表达中,我们发现,Ezrin表达与癌细胞转移相关Ezrin和A7在不同HCC细胞株中表现出显着差异的蛋白表达,但是,不同的亚细胞位置Ezrin和A7相关淋巴道转移水平不同;可以解释Ezrin和A7在不同的细胞中生物活性及细胞转移能力相关联。此外,增加Ezrin的表达在A7下调细胞与Ezrin表达减少与A 7上调细胞呈显着相关。这些发现可以确认A 7基因具有肿瘤抑制作用。此外,Ezrin表达与HCC肿瘤转移相关联、Ezrin与A7呈正相关(P<0.05)。不同转移水平的淋巴转移肝癌细胞株免疫印迹分析显示Ezrin表达在HcaP(低淋巴道转移)均高于Hca-F(高淋巴转移),差异显着(p=0.0046)。细胞分离分析显示Ezrin的表达高度存在于细胞质、细胞核及Hca-F的细胞骨架。然而,在细胞膜、细胞核和Hca-P细胞骨架中A7上调抑制Ezrin的表达(p=0.0248)并增加迁移和入侵的能力,而Ezrin主要定位于细胞质和细胞核中。Hca-P中A7下调细胞Ezrin表达增强(p<0.0001)。Ezrin表达主要集中于细胞质和细胞核,并且抑制肿瘤细胞的迁移及侵袭。体外实验︰培养淋巴道转移肝癌细胞两周,将细胞注射在小鼠左足垫后五周收集每组原发性和继发性肿瘤。我们发现原发肿瘤和淋巴结转移肿瘤中的节点数Hca-F组小鼠大于Hca-P组小鼠。此外,A7组原发肿瘤和淋巴结转移肿瘤节点数Hca-P低于Hca-F,Hca-P中A7下调基因后、原发肿瘤明显大于Hca-P,淋巴结转移肿瘤中的节点数无差异。苏木精和伊红染色应用于评价组织异常。结果显示,正常对照组小鼠淋巴结无组织学异常。但组织坏死见于Hca-F组小鼠和Hca-P组小鼠A7调控组,A7上调Hca F组织异常。A7下调控Hca-P组,原发性肿瘤的组织学损伤高,但与淋巴转移组织无差异。Ezrin的表达在体内实验验证体外研究结果,Ezrin表达与肝癌产生呈正相关,与A7表达呈负相关。western blot和RT-PCR结果显示肿瘤不同群体Ezrin表达具有差异显着(p=0.0001)以及A7表达差异显着(p=0.021)。免疫组化结果显示,Ezrin高表达的Hca-P中,A7在原发性肿瘤下调,而低Ezrin表达的Hca-F中A7在继发性肿瘤上调(P=0.004).ELISA结果说明Ezrin表达在各组间差异显着(P=0.0005)。此外,Hca-P中血清Ezrin表达高于Hca-f(p=0.0090)而血清Ezrin表达在Hca-F高于Hca-P,A7上调被抑制(P=0.0010),Ezrin在Hca-P中A7下调组表达增强。(P=0.0510)。结论:1、Ezrin和A7蛋白质的亚细胞位置通过淋巴道转移水平的改变而改变,也就是说,Ezrin表达和位置的确定能够帮助确定淋巴道转移肝癌的水平,这是因为Ezrin能够与这种疾病的转移和发生有关。2、Ezrin可能在淋巴道转移肝癌的发生中起到很重要的作用,并且能够与A7表达相关联。3、Ezrin表达能够影响A7在淋巴道转移肝细胞癌的表达。4、Ezrin表达在LNM-HCC次细胞系转化中对淋巴道转移在体内和体外模型的程度直接相关。5、Ezrin水平能够快速,简便,敏感的评价组织和血浆样品。6、Ezrin水平能够提供一个清楚的预测,帮助决定这种处置并且选择一种适合的处理方法。7、Ezrin水平能够作为一种不同的诊断和预防的生物标志物,用于评价LNMHCC的水平,并且能够有利于HCC疾病的早期诊断。8、在高水平转移细胞里,Ezrin相对来说具有高度浓缩的细胞骨架成分表达。然而,在Hca-P细胞里,大部分位于细胞膜和细胞核中。9、在高转移性细胞中Ezrin高度集中在细胞骨架。然而,在Hca-P细胞中,大部分位于细胞膜和细胞核。而较高的核定位再加上低转移细胞骨架Ezrin表达。细胞骨架依赖长丝的大小、灵活性、浓度和交联的特点,是必要的细胞外观和细胞间的相互作用。这就是在细胞骨架中Ezrin可能扮演的角色,调节肌动蛋白细胞骨架交联和细胞活动细胞迁移和侵袭。10、Ezrin对于淋巴道肿瘤转移机制起重要作用。11、A7与细胞支架Ezrin表达的关系是呈负相关,影响细胞迁徙和入侵,够成为对于HCC的淋巴道转移重要的因素。12、A7能够抑制Ezrin表达,有可能具有肿瘤抑制行为,并且能够直接或者间接影响治疗。(本文来源于《大连医科大学》期刊2017-03-26）
刘曙光,温思萌,尚芝群,牛远杰[5]（2016）在《骨髓各细胞组分对前列腺癌骨转移的影响》一文中研究指出目的:骨骼是前列腺癌转移最常见的靶器官,它的发生可能涉及到多种因素。本研究通过细胞实验,明确骨髓中各细胞组分对前列腺癌细胞增殖及分化能力的影响。方法:1、提取骨髓各细胞组分并获取细胞条件培养基,即骨髓间充质干细胞条件培养基与骨髓造血干细胞条件培养基。2、用划痕实验、球形成实验分别观察各组分条件培养基对前列腺癌细胞增殖及分化能力的影响。结果:划痕实验发现,骨髓造血干细胞条件培养基处理组划痕愈合的能力强;成球实验观察(本文来源于《中国中西医结合学会泌尿外科专业委员会第十四次全国学术会议暨2016年广东省中西医结合学会泌尿外科专业委员会学术年会论文集》期刊2016-09-09）
邱建华,张展,李国政,宋金勇,周浩[6]（2016）在《口含烟中重金属组分向唾液转移的模拟测定方法》一文中研究指出为研究口含烟食用过程中重金属向唾液转移的情况,利用人工模拟唾液作为提取液,在超声条件下对口含烟样品进行提取,并利用微波消解–电感耦合等离子体质谱(ICP–MS)测定重金属含量,建立了口含烟中6种重金属(Cd、Pb、Cr、Ni、As和Se)向唾液转移的模拟测定方法。对人工唾液提取液体积、提取时间进行了优化;绘制了口含烟6种重金属元素标准曲线,在考察浓度范围内各组分线性关系良好,相关系数均在0.999 7以上,检出限和定量限低于0.1 ng/m L,测定口含烟样品中重金属加标回收率为93.8%~101.8%。运用所建立的方法分别测定7个口含烟样品在人工唾液提取液中的6种重金属Cr、Ni、Cd、Se、As、Pb的转移率分别为2.52%~16.62%、7.97%~22.51%、8.44%~31.40%、10.71%~38.70%、18.94%~40.84%、10.71%~43.60%。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2016年03期）
刘乙祥[7]（2015）在《细菌双组分信号转导系统蛋白质复合体结构和磷酸转移机制的研究》一文中研究指出双组分信号转导系统(Two-component signal transduction system, TCS)是细菌体内最重要的信号转导系统,调控着细菌的大部分生命活动。其机制高度保守,是理想的新型抗菌药物靶标。在细菌的双组分信号转导系统中,通常由组氨酸激酶(Histidine kinase, HK)和应答调节蛋白(response regulator, RR)两个蛋白组成,它们之间通过磷酸基团的传递实现信号的转导,磷酸化后的应答调节蛋白可以调控一些特殊基因的表达。相对于真核细胞的信号转导机制,TCS具有不同的转导方式,主要表现在组氨酸激酶(HK)具有双功能,既能磷酸化下游的应答调节蛋白(RR),也能作为磷酸酶催化磷酸化态RR的去磷酸化。HK的去磷酸化功能在细菌体内极为重要,是控制信号基线水平、调节细菌生命活动有序进行的重要保障。在该体系的研究中,RR蛋白的活化过程以及HK行使磷酸酶功能的具体机制尚不清楚,存在较大的争议。由于HK具有双功能容易造成无效的磷酸传递,因此了解HK如何降低无效传递是理解细菌信号转导机制的最基础的问题之一。针对以上的问题,本文采用核磁共振技术和X射线晶体衍射技术,对细菌双组分信号转导系统HisKA亚家族中源于Thermotoga maritima功能未知的HK853和RR468蛋白质及其复合体进行结构和机制的研究。磷酸化态的RR468半衰期较短,不利于研究信号转导系统的磷酸转移机制。我们运用小分子探针叁氟化铍BeF3-模拟磷酸基团,并将其应用到双组分信号转导机制的研究中来。首先,我们系统地研究了氟化铍体系在溶液中的复杂交换网络和性质,通过19F NMR发现其分布规律和动力学性质,并且发现二价镁离子能够提高不同种类氟化铍之间的交换速率,提出了离子对模型机制用于解释二价镁离子对氟化铍系统的影响机制。通过运用磷酸基团类似物BeF3-和同位素标记,我们可以研究溶液中RR.468非磷酸化的自由态(apo)和类磷酸化态(holo)的性质。研究结果发现RR468在溶液中的二级结构呈现典型的p5-a5组合构象。我们运用15N弛豫机制研究apo RR468皮秒到纳秒(ps-ns)时间尺度的动态特征,并且运用CPMG Relaxation Dispersion实验研究apo和holo RR468在溶液中微秒到毫秒(μs-ms)时间尺度的动态变构。结果发现溶液中自由态的RR468动态过程是分级的,较快时间尺度的运动有利于瞬态氢键的形成从而降低构象转变的能垒,而较慢时间尺度的动态则很可能和磷酸转移催化过程相互关联,以及用于稳定蛋白质的构象。通过运用该氟化铍体系,我们实现了稳定类磷酸化态RR468的制备,运用19F NMR等核磁共振方法,我们成功地观测了磷酸基团类似物BeF3-在RR468活性中心以弱化学键方式与蛋白质氨基酸侧链形成的相互作用网络。以BeF3--RR468为底物,我们运用19F NMR以及动力学研究,揭示了HK853行使磷酸酶功能的具体分子机制,发现在HisKA家族中,主要是DHp结构域参与相互作用,我们鉴定出Dnp结构域中的HxxxT模体是起催化作用最主要的残基,并提出了HK催化P-RR去磷酸化详细机制的假说。通过共结晶方法,我们成功获得了HK853-BeF3--RR468蛋白质复合体单晶,运用X射线晶体衍射,解析了2.9A高分辨的蛋白质复合体结构。我们获得了磷酸化产物RR处于受保护的构象,结合NMR数据,揭示了TCS系统防止无效磷酸传递的机制：HK853的DHp结构域与底物相互作用时具有两种构象的分布,且受pH调控；CA结构域与底物具有疏水相互作用从而保护活性位点,用于阻隔水分子的进入和防止磷酸基团的脱落。基于本文所发现的机制,我们运用基因定点突变的方法设计了具有不同催化能力的HK蛋白。综上所述,我们系统地研究了磷酸基团类似物氟化铍交换网络和分布规律以及二价镁离子对其动力学性质的影响,并将其应用到蛋白质的磷酸传递研究中。本文提出细菌双组分信号转导系统应答调节蛋白RR构象转变的动态过程是分级的且和功能相关。本文尝试从结构、动态和功能之间的联系出发揭示生物大分子的机制,解析了蛋白质复合体的高分辨晶体结构,发现了HK行使磷酸酶功能的关键模体单元,阐述了TCS系统HK蛋白在行使磷酸酶功能和信号保护功能之间切换的分子机制。我们的研究结果对细菌双组分信号转导机制的研究具有重要的参考价值,有助于打开新型抗菌药物的设计思路,同时本文建立的研究方法可以为类似蛋白质体系的研究提供可借鉴的经验,有助于揭示更多重要的生命活动机理。(本文来源于《中国科学院研究生院(武汉物理与数学研究所)》期刊2015-10-01）
平晓丽[8]（2015）在《RNA N~6-甲基腺嘌呤(m~6A)甲基转移酶新组分的鉴定及功能研究》一文中研究指出M6A (N6-甲基腺嘌呤)是真核生物mRNA中含量最为丰富的甲基化修饰形式,约占所有甲基化修饰形式的80%。M6A去甲基化酶FTO (Fat mass and obesity associated) 和 ALKBH5 (α-ketoglutarate-dependent dioxygenase alkB homolog 5)的发现,证明了RNA上m6A甲基化修饰同DNA上的甲基化修饰一样是动态可逆的,因此,m6A逐渐被认定为表观遗传学的标记分子。m6A的形成具有序列特异性,主要发生于保守基序RRm6ACH([G/A][G> A]m6AC[U>A>C]),但是并非所有的此序列中的腺苷酸都能被甲基化,因此,必然存在着其他未知的机制对m6A的位点进行选择,而m6A甲基转移酶全酶复合物的鉴定将为m6A位点的选择性和特异性提供依据。已有研究发现m6A的形成是由一个组成尚不明确的蛋白酶复合体来催化的,METTL3是其中唯一已被鉴定的蛋白组分。本博士论文重点研究m6A甲基转移酶复合物的新组分及其调控mRNA代谢的分子机制。通过蛋白免疫沉淀技术结合质谱分析,鉴定了m6A甲基转移酶复合物的两个新组分WTAP (Wilms'tumor 1-associating protein) 和 METTL14 (Methyltransferase like 14)。其中,METTL14是METTL3的同家族蛋白,都含有SAM结合结构域和催化结构域。利用体内免疫共沉淀和体外GST-pull down技术,证明了METTL3 、METTL14 和 WTAP之间相互作用且不依赖于RNA和m6A修饰,而WTAP的N端结构域对其与METTL3 和 METTL14之间的相互作用起重要作用。进一步利用免疫荧光技术研究METTL3、METTL14 和 WTAP的细胞内定位,结果表明METTL3、METTL14 和 WTAP均定位于细胞核剪接因子富集的亚细胞结构核小斑,且METTL3 和 METTL14的核小斑定位受WTAP的影响；光活性增强的核糖核苷酸交联和免疫共沉淀技术(PAR-CLIP)实验也表明WTAP基因敲低的细胞中与METTL3结合的RNA明显降低,揭示了WTAP作为调节亚基招募METTL3-METTL14复合物结合到mRNA上通过PAR-CLIP技术结合二代高通量测序技术发现WTAP-METTL3-METTL14 (WMM)复合物在细胞内的主要作用底物是mRNA,且主要结合于mRNA的编码区以及3’UTR区域,与m6A的分布一致,其结合序列与m6A的保守序列也具有一致性,进一步表明WTAP在甲基转移酶复合物中起到重要的调节作用；对WTAP和METTL3共同调节的基因进行功能聚类分析,发现其中有很大一部分与RNA加工与代谢相关。另外,在斑马鱼胚胎中敲低WTAP和METTL3会导致胚胎发育异常和细胞凋亡增加,过表达外源的WTAP蛋白N端结构域能够回补因WTAP基因敲低造成的凋亡增加的表型,这与WTAP的N端结构域对其与METTL3-METTL14互作中的重要作用一致。这些新发现证明了WTAP作为调节亚基招募METTL3-METTL14催化亚基到mRNA上催化m6A的形成,并在RNA代谢的表观遗传调控中起重要的作用。综上所述,本研究发现了催化m6A形成的WMM甲基转移酶复合物,对后续深入研究m6A修饰的动态变化及调控RNA代谢的分子机制具有重要的生物学意义。(本文来源于《中国科学院北京基因组研究所》期刊2015-05-01）
刘晓芬,刘云,张萃,吴强,肖笑荣[9]（2015）在《一种新型抗体导向核酸转移系统关键组分的制备及鉴定》一文中研究指出目的制备并鉴定葡萄球菌A蛋白-多聚赖氨酸交联物(SPA-PLL交联物),以此交联物为"接头",构建一种新型的抗体导向核酸转移系统。方法采用SPDP化学偶联法制备SPA-PLL交联物;采用SDSPAGE电泳法测定SPA-PLL交联物的纯度;采用酶联法或DNA凝胶阻滞实验分别测定SPA-PLL交联物与IgG或DNA片段的结合;将SPA-PLL交联物与Tfr抗体和p EGFP-C1质粒以适宜的质量比混合即可组装成Tfr抗体导向pEGFP-C1质粒转移系统;将该抗体导向的pEGFP-C1质粒转染人肝癌HepG2细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达。结果 SPA-PLL交联物纯度较高,能良好地结合多种Ig G抗体,同时也能较好地结合pEGFP-C1质粒、中和其负电荷;Tfr抗体导向pEGFP-C1质粒转移系统能特异性地转染Hep G2细胞,并使pEGFP-C1质粒在细胞中有效表达。结论 SPA-PLL交联物能与核酸片段和IgG抗体非共价结合,并具有良好通用性;以此制备抗体导向核酸转移系统的过程简单方便。(本文来源于《广东药学院学报》期刊2015年03期）
黄亿,李廷轩,张锡洲,戢林,吴沂珀[10]（2015）在《氮高效利用基因型大麦氮素转移及氮形态组分特征》一文中研究指出【目的】揭示氮高效利用基因型大麦生育后期氮素分配转运的生理机制,为大麦高效氮肥管理和高产栽培提供理论依据。【方法】采用土培盆栽试验,利用前期筛选出的氮高效利用基因型大麦(DH61、DH121+)和低效利用基因型大麦(DH80)为试验材料,分析其在不施氮、低氮(125 mg N·kg-1土)、正常氮(250 mg N·kg-1土)和高氮(375 mg N·kg-1土)4个氮素处理下籽粒产量、生物量及生育后期地上部营养体氮素转移特性和植株氮形态组分构成特征。【结果】(1)随施氮量的减少,不同氮效率基因型大麦籽粒产量和地上部生物量均减少。同一施氮处理,高效基因型大麦籽粒产量和地上部生物量高于低效基因型。不施氮处理下,高效型大麦DH61和DH121+籽粒产量分别是低效型DH80的1.96、2.03倍;低氮处理下分别是低效型DH80的2.10、2.37倍。扬花期和灌浆期,不施氮和低氮处理下两类基因型大麦植株氮浓度无明显差异,氮高效基因型大麦干物质形成能力较强。(2)高效基因型大麦植株能够积累较多的氮素,扬花前高效基因型氮素积累量占大麦生育期氮积累量的比例高于低效基因型。低氮(125 mg N·kg-1土)、正常氮(250 mg N·kg-1土)、高氮处理(375 mg N·kg-1土)下,高效基因花前氮素积累量是低效基因型的1.31、1.38、1.49倍,充足的氮素积累为后期灌浆结实奠定了物质基础。(3)随着氮素用量的增加,氮素转运量呈单峰曲线变化,氮素转移率和氮素转运量对籽粒的贡献率则逐渐下降,过高的氮肥施用不利于氮素向籽粒的转运。高效基因型DH61和DH121+籽粒氮素来源更多依赖于前期地上部营养体的氮素转移,不施氮和低氮氮素转运量对籽粒的贡献率分别为35.06%、40.06%和76.37%、81.72%。而低效基因型DH80籽粒的氮素来源则以后期根系氮素的吸收和转移为主,氮素吸收量对籽粒的贡献率为68.20%和34.84%。(4)相同氮素处理下,扬花至灌浆期大麦茎秆和叶片中营养性氮含量增加,功能性氮含量变化平稳,而结构性氮含量则降低;籽粒营养性氮含量逐渐增加,结构性氮含量缓慢下降。且较低效基因型,高效基因型大麦茎秆和叶片结构性氮含量的降低幅度大,氮素转运能力强。低氮处理下,高效基因型扬花期至灌浆期茎秆和叶片结构性氮含量分别降低49.57%、62.58%;灌浆至成熟期分别降低64.47%、28.11%。【结论】氮高效利用基因型大麦籽粒氮含量受花后茎秆和叶片中结构性氮的分解转化决定,营养器官中结构性氮的再利用有利于氮素利用效率的提高。(本文来源于《中国农业科学》期刊2015年06期）
组分转移论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分目的:本实验观察理冲生髓饮(LCSSY)有效组分对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中微环境相关因子的改变,探讨LCSSY有效组分对卵巢癌侵袭转移的抑制作用及相关分子机制,探索LCSSY对卵巢癌多信号靶点的作用机制。方法:建立Balb/C裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、贝伐单抗组、LCSSY有效组分低剂量组、LCSSY有效组分中剂量组、LCSSY有效组分高剂量组。观察药物作用后裸鼠的肿瘤生长情况,各组给药干预18天,其中每隔两天测量瘤体体积,绘制生长趋势,于最后一次给药后处死裸鼠,将瘤体称重,采用RT-PCR检测瘤体中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达情况;免疫组化法检测瘤体中人毛细血管内皮细胞(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)、IL-1、低氧诱导因子-1(HIF-1)表达;WesrernBlot法检测转化生长因子-β相关激酶(Tak1)、去磷酸化转化生长因子-β相关激酶(p-Tak1)、核因子κB抑制蛋白激酶(IKKα)、去磷酸化核因子κB抑制蛋白激酶(p-IKKα)、核因子κB抑制蛋白(IKBα)、MMP9、TNF-α、IL1p表达的差异。结果:1.与模型组相比,LCSSY有效组分不同剂量组均可抑制卵巢癌肿瘤生长(P<0.05)。2.与模型组相比,LCSSY有效组不同剂量组均能够降低肿瘤组织中TNF-α、IL-1p的mRNA表达,抑制效果呈量-效相关性(P<0.05),其中LCSSY高剂量组和贝伐单抗组中IL-1β mRNA表达未见明显差异(P>0.05)。3.与模型组比较,LCSSY有效组分不同剂量组均能够降低卵巢癌组织VEGF、MMP9、IL-1、HIF-1蛋白的表达,且差异显着(P<0.05)。4.与模型组比较,LCSSY有效组分不同剂量和贝伐单抗对Tak1、p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、TNFα、IL1β、MMP9 均有下调作用,其中LCSSY有效组分不同剂量和贝伐单抗对p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、TNFα、IL1β、MMP9的下调作用有显着差异(P<0.05),LCSSY不同剂量呈量-效相关;但LCSSY不同剂量和贝伐单抗组对Tak1的表达未见明显差异(P>0.05)。结论:1.LCSSY有效组分能够抑制卵巢癌的生长。2.LCSSY有效组分可能是抑制基质金属蛋白酶(MMP9)、炎性相关因子(TNF-α、IL-1、IL-6)、缺氧诱导因子(HIF-1)调控卵巢癌侵袭转移微环境。3.LCSSY有效组分可能激活相关通路激活因子(p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα)的表达,多通路、多靶点的抑制卵巢癌新生血管生长因子(VEGF)的表达,抑制卵巢癌的侵袭和转移。第二部分目的:观察理冲生髓饮有效组分不同剂量作用卵巢癌SIC0V3细胞增殖与凋亡、侵袭与转移和血管生成的改变,验证理冲生髓饮有效组分抑制卵巢癌SK0V3细胞的侵袭和转移能力,探索其相关机制。方法:体外培养卵巢癌SK0V3细胞,并且制备LCSSY有效组分含药血清,分为LCSSY有效组分高、中、低剂量组;培养鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,随机分为LCSSY含药血清高、中、低药物组以及贝伐单抗组和空白组,观察各组药物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的形态学改变;MMT法检测卵巢癌SK0V3细胞在不同剂量LCSSY含药血清作用后24h和48h的增殖抑制率;应用划痕实验、Transwell小室方法观察各组药物对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响;应用Elisa法检测不同剂量LCSSY有效组分含药血清和贝伐单抗作用后卵巢癌SKOV3细胞上清液中VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-tx的表达。结果:1.LCSSY有效组分作用后,新生血管中的1、2级血管数目均有不同程度减少,具有统计学意义(P<0.05);LCSSY有效组分不同剂量抑制血管生成效果仍低于贝伐单抗组(P<0.05);LCSSY有效组分中剂量组1、2级血管较LCSSY有效组分低、高剂量组相比数显着减少(P<0.05)。2.LCSSY有效组分不同剂量对卵巢癌SKOV3细胞作用24h和48h后细胞增殖抑制率,结果显示：随治疗时间延长,细胞的存活率和药物剂量呈负相关,具有时间的依赖性(P<0.05)。3.各组药物作用24h后,空白组划痕几乎完全愈合,LCSSY有效组分高剂量组和贝伐单抗组的细胞划痕愈合能力降低,随时间的增加,划痕面积未见明显减少(P<0.05)。4.Transwell小室结果显示空白组卵巢癌SKOV3细胞被染色面积大,迁移细胞数目显着增多,LCSSY有效组分各剂量组和贝伐单抗组卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移作用显着降低(P<0.05);其中迁移抑制能力贝伐单抗组>LCSSY有效组分高剂量组>LCSSY有效组分中剂量组>LCSSY有效组分低剂量组。5.与空白组比较,LCSSY有效组分各剂量组和贝伐单抗组细胞上清液VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-a的表达均明显下调,其中VEGF、IL-6、IL-1、TNF-a表达水平与药物剂量呈正相关(户<0.05);MMP-9在各组剂量中比较未见明显差异(P>0.05)。结论:1.LCSSY有效组分能够抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和转移的能力。2.LCSSY有效组分对卵巢癌SK0V3细胞的抑制作用呈现浓度和时间的依赖性。3.其机制可能与相关炎性因子(如IL-6、IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-a)的改变有关,进一步抑制血管生长因子VEGF的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
组分转移论文参考文献
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