导读:本文包含了配伍配比研究论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:麻黄,丹参,黄芪,泻心汤,内毒素,赤芍,氧化氮。
配伍配比研究论文文献综述
程江雪,唐志书,郭东艳,史亚军,邹俊波[1]（2019）在《不同配伍配比对赤芍-当归药对中10个成分溶出量的影响研究》一文中研究指出目的:建立赤芍-当归药对中没食子酸、氧化芍药苷、香草酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、藁本内酯10个成分的含量测定方法,考察不同配伍比例及配伍方式对赤芍-当归药对中10个主要活性成分溶出量的影响。方法:采用Wonda Cract ODS-2色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min~(-1),柱温25℃,变换波长检测赤芍-当归药对中10个成分,检测波长为210、230、260、274、275、325、350 nm。进一步测定赤芍-当归药对的单煎液、单煎合并液(1∶1)以及不同配比的合煎液(1∶1,1∶2,1∶3,2∶1,3∶1)中上述10个主要活性成分的含量。结果:没食子酸、氧化芍药苷、香草酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、藁本内酯质量浓度分别在1.49～74.50μg·m L~(-1)(r=0.996 0)、2.88～144.00μg·m L~(-1)(r=0.996 4)、2.96～147.99μg·m L~(-1)(r=0.997 6)、2.94～147.00μg·m L~(-1)(r=0.997 9)、2.99～149.50μg·m L~(-1)(r=0.998 1)、2.24～111.99μg·m L~(-1)(r=0.997 8)、3.01～150.50μg·m L~(-1)(r=0.997 8)、2.98～148.99μg·m L~(-1)(r=0.998 4)、2.79～139.50(r=0.997 3)、6.00～300.00(r=0.998 2)μg·m L~(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系。精密度良好,RSD小于2.0%;回收率良好,3个加样浓度的平均回收率(n=9)为83.7%～100.4%,RSD为2.5%～7.2%。当赤芍-当归比例为2∶1时,各成分含量明显大于单煎液中含量,且多种成分在该比例中含量最高。当赤芍-当归比例为1∶1时,合煎液中含量较高的5个成分的溶出量明显多于单煎合并液。结论:本研究所建立的测定方法,结果可靠准确,操作简便,可用于赤芍-当归药对中10个成分的含量测定;赤芍-当归(2∶1)的配伍比例以及合煎的配伍方式有利于10个成分在水中的溶出。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2019年09期）
张静[2]（2017）在《丹参有效成份配伍配比对血管外膜成纤维细胞和自发性高血压大鼠模型的作用及其机制研究》一文中研究指出第一部分均匀设计与正交设计联用筛选丹参有效成份抑制成纤维细胞增值的最佳配伍配比目的:丹参是我国用于治疗心脑血管疾病的传统中药,包含4种主要水溶性成份:丹参素(DSS,S)、丹酚酸A(Sal-A,A)、丹酚酸B(Sal-B,B)和原儿茶醛(PAL,P),我们简称为(SABP)。大量的研究已经证实,每种成份都可通过不同的作用机理起到心血管保护作用。血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblast,AF)作为一个生物学处理中心从外向内(outside-in)调节血管的结构和功能,血管在应答应激和损伤的过程中,AF首先被快速激活,通过本身改编而显示不同功能和结构的行为,被视为血管应答的始动因素。目前中药有效成份配伍研究已经成为中药创新研究的一种新模式。因此,我们设想运用均匀设计和正交设计联合应用的方法,通过观察其对AF增殖的作用,找出丹参4种主要水溶性成份的最佳配伍配比关系。方法:本实验选用成年Sprague Dawley(SD)大鼠,培养其胸主动脉外膜成纤维细胞,运用MTT方法,观察药物对其增殖的抑制作用,应用酶标仪读取结果并计算抑制率。筛选步骤如下:1、初步筛选注射用丹参(冻干)粉(salvia miltiorrhiza lyophilized powder,SMLP)及丹参的四种有效成份各自的有效应用剂量范围。2、采用均匀设计和正交设计联用的方法,进行成份剂量和配伍的筛选。3、把实验得到的最优组合再次排列组合进行验证。结果:1药物浓度初筛结果:每种药物对AF的抑制率最显着的有效浓度范围是:Sal-A,Sal-B,DSS的有效浓度范围都是(10-3 mol/L,10-4 mol/L,10-5 mol/L),PAL的有效浓度范围是(10-2 mol/L,10-3 mol/L,10-4 mol/L),但是SMLP对血管外膜成纤维细胞无明显的抑制作用,且各浓度之间没有统计学差异;2均匀设计实验结果:结合初筛药物浓度实验得到的结果,四个成份各选取有效剂量范围内6个不同浓度,然后按照均匀设计表,即4因素6水平均匀表u6(64)安排实验,结果显示第3组是最有效的配伍组合,抑制作用最显着,有统计学差异。即:s3(10-4mol/l),a6(10-6mol/l),b2(5×10-4mol/l),p4(5×10-4mol/l);3正交设计实验结果:结合均匀设计实验得到的结果,在最优的处理中,根据各成份对应剂量相距较近的范围内,再次选择低、中、高3个不同剂量,对dss、sal-a、sal-b、pal四个成份的有效剂量低、中、高进行正交设计实验研究,选择l9(34)正交表,结果显示第6组是抑制作用最显着的配伍组合,具有统计学差异。即:s2(1.5×10-4mol/l),a3(7×10-6mol/l),b1(3×10-4mol/l),p2(5×10-4mol/l);4将丹参4种成份再次进行排列组合,进一步验证最佳配伍配比。根据均匀设计和正交设计的结果,为各成份确定一个最适宜有效剂量,对dss、sal-a、sal-b、pal四个成份再次排列组合:s、a、b、p,sa、sb、sp、ab、ap、bp、sab、sap、sbp、abp、sabp共15个,再次考察各种配伍组合对af增殖的影响,结果显示sabp组的抑制率最大,为最佳配伍配比组合。结论:本实验运用均匀设计和正交设计联合应用的实验方法,筛选出丹参的四种主要水溶性成份(dss、sal-a、sal-b、pal),抑制血管外膜成纤维细胞增殖的最佳配伍配比关系和浓度,即s(1.5×10-4mol/l),a(7×10-6mol/l),b(3×10-4mol/l),p(5×10-4mol/l),比例为(150︰7︰300︰500),且四种成份之间还存在一定的协同作用。第二部分丹参有效成份的最佳配伍配比对自发性高血压大鼠血管重构的保护作用目的:血管重构(vascularremodeling,vr)是高血压病心、脑、肾等靶器官损害的共同病理基础,主要表现有血管壁中层平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,vsmc)肥大、增生及细胞外基质(extracellularmatrixc,ecm)增多,外膜增厚不规则,导致管壁增厚变硬、顺应性下降等,随即导致血管功能的异常。血管紧张素Ⅱ(angiotensin,ang-ii)和内皮素(endothelin,et)是主要的缩血管因子,α-sma是vsmc和af转化成肌成纤维细胞(migratorymyofibroblasts,mf)的标志物,Ⅰ型胶原蛋白(collagentypeⅠ,col-Ⅰ)是ecm的主要成份,它们都与血管结构改变密切相关。本实验选用与人类高血压发病机制相似的自发性高血压大鼠为模型(spontaneouslyhypertensiverats,shr),观察sabp对其血压的影响以及血管重构的作用。方法:实验动物随机分为5组:(1)正常对照组(wky);(2)模型组(shr);(3)西药培哚普利(pd)组(shr);(4)注射用丹参(冻干)粉组(salviamiltiorrhizalyophilizedpowder,smlp)组(shr);(5)丹参四成份最佳配伍配比(sabp)组(shr)。每天腹腔注射给药:smlp(1g/kg/d);pd(0.4mg/kg/d);sabp(dss:5mg/kg/d,sal-a:0.233mg/kg/d,sal-b:10mg/kg/d,pal:17mg/kg/day);shr和wky对照组给予等量的生理盐水。给药前及给药期间,每2w测量一次动物尾动脉血压。给药8w后,留取每只动物的血浆及胸主动脉,用于酶联免疫吸附剂测定(elisa)、常规he染色、免疫组织化学染色、r-tpcr和westernblot实验。结果:1sabp可显着降低shr收缩压,但最终并没有降至正常水平。sabp组与pd组在整个给药过程中,都使血压稳步下降。两组相比降压效果无明显差别。smlp无明显降压效果,其与shr组相比无明显差别,无统计学意义;2sabp可显着降低shr血浆中ang-ii和et-1的含量。pd组ang-ii、et-1下降效应与sabp组类似。smlp组血浆中ang-ii和et-1含量与正常shr组无明显变化,无统计学差异;3sabp可显着改善shr胸主动脉重构。he染色观察显示:shr组胸主动脉内皮细胞偶有脱落,vsmc肥大增生明显,外膜及管壁显着增厚;sabp组胸主动脉内皮细胞未脱落,无血细胞粘附,vsmc增生不明显,管壁无明显增厚;pd组血管病理形态观察与sabp组和wky组相似。smlp组与shr组相似;sabp组较shr主动脉管壁厚度(mediathickness,mt)、管壁厚度/半径(vesselwallthickness/radius,vt/va)、外膜厚度(adventitiathicknessofthethoracicaorta,at)均显着降低,此效应与pd组相似。而smlp组对动脉结构的作用相比shr组无明显变化;4免疫组化观察显示:sabp组较shr组col-i和et-1的表达显着降低,与wky组相比较,col-i和et-1表达无明显变化。但是smlp组col-i和et-1较shr组比较,变化无统计学差异;5sabp可明显降低shr胸主动脉上col-i、et-1和α-sma的mrna的表达,sabp的这一效应与西药培哚普利和wky组无显着差异;6sabp可显着降低shr胸主动脉上col-i、et-1和α-sma蛋白的表达。结论:sabp可明显降低shr收缩压,降低血浆中ang-ii和et-1水平,显着改善胸主动脉的血管重构,减少血管壁α-sma、col-Ⅰ和et-1的表达,从而减少血管壁厚度和外膜的厚度。其具有明显的降压和血管重构的保护作用。第叁部分丹参有效成份的最佳配伍配比减缓自发性高血压大鼠血管重构的作用机制目的:氧化应激是导致高血压的重要因素之一,是由于体内蓄积过量的活性氧(reactiveoxygenspecies,ros)而触发细胞损伤,从而导致血管重构。nadph氧化酶(nox)是心血管系统产生ros的主要来源,且主要集中在血管外膜上。研究表明nox4在血管壁全层都有表达。超氧化物歧化酶(sod)是体内主要的抗氧化酶,主要用来反映机体内的抗氧化能力;丙二醛(mda)通常用来表示机体总的脂质过氧化水平。转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-beta,tgf-β)是调节af/mf以及col-i的最重要的因子之一。tgf-β/smad是其经典的信号转导通路,smad7是这一通路中重要的负向调节因子。本研究选用shr和sd大鼠af为模型,探讨sabp对其氧化应激的影响,并观察其对胸主动脉上nox4、tgf-β1和smad7表达的影响。方法:实验动物随机分为5组:(1)正常对照组(wky);(2)模型组(shr);(3)pd组(shr);(4)smlp组(shr);(5)sabp组(shr)。每天腹腔注射给药:smlp(1g/kg/d);pd(0.4mg/kg/d);sabp(dss:5mg/kg/d,sal-a:0.233mg/kg/d,sal-b:10mg/kg/d,pal:17mg/kg/day);shr和wky对照组给予等量的生理盐水。给药8w后,留取每只动物的血浆及胸主动脉,用于elisa、免疫组织化学染色、r-tpcr和westernblot实验。培养SD大鼠胸主动脉外膜AF,并分为四组:(1)Ang-Ⅱ(10-6 mol/L)组;(2)荧光剂对照组,荧光剂为DCFH-DA(10-5 mol/L);(3)Ang-Ⅱ+SABP组,Ang-Ⅱ药物浓度同上,SABP(DSS:1.5×10-4 mol/L,Sal-A:7×10-6 mol/L,Sal-B:3×10-4 mol/L,PAL:5×10-4 mol/L)组。(4)SABP组(药物浓度同上)。每组均加用荧光剂。用荧光酶标仪在502nm处检测荧光值,并用荧光显微镜拍照。结果:1 SABP可显着降低SHR血浆中MDA和TGF-β1的含量,并显着升高SOD的含量;2免疫组化染色显示:SABP可显着降低SHR组胸主动脉上NOX4和TGF-β1的表达,且与WKY组相比较,NOX4和TGF-β1表达无明显变化,差异无统计学意义。这一效应与PD组相似;3 SABP可明显降低SHR胸主动脉上NOX4的mRNA水平及蛋白表达。与西药培哚普利和WKY组的NOX4的表达效应相似;4 SABP可显着降低用Ang-Ⅱ刺激的SD大鼠AF中ROS含量。SABP组和Ang-Ⅱ+SABP组与空白对照组相比均无明显差别,没有统计学意义;5 SABP可明显降低SHR胸主动脉上TGF-β1mRNA水平及蛋白表达,且显着升高Smad7的mRNA及蛋白的表达。结论:SABP既可显着降低SHR体内的氧化应激水平,降低血浆中MDA水平,升高SOD水平;降低胸主动脉NOX4表达;也可降低Ang-Ⅱ刺激的SD大鼠AF中ROS含量;而且SABP还可降低TGF-β1表达,升高Smad7蛋白表达。SABP通过抑制氧化应激和TGF-β1的表达,升高Smad7蛋白表达,进而抑制高血压大鼠的血管重构。(本文来源于《河北医科大学》期刊2017-04-01）
邢学锋,马钦海,牛波,陈飞龙,罗佳波[3]（2015）在《不同配伍配比对麻黄-白术药对有效成分含量的影响》一文中研究指出目的:研究麻黄-白术药对不同配伍、配比下水煎液中有效成分含量的变化,探求麻黄-白术药对的化学变化规律。方法:采用GC-MS考察麻黄水煎液及麻黄-白术药对不同配比共煎液中麻黄类生物碱(麻黄碱、伪麻黄碱、去甲基麻黄碱、去甲基伪麻黄碱和甲基麻黄碱)含量的变化情况;采用HPLC考察白术水煎液及麻黄-白术药对不同配比共煎液中白术内酯Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ的含量变化情况。结果:与麻黄单煎液相比,麻黄-白术(3∶2,3∶4,3∶8)3种比例配伍后,随着白术的配伍比例增大,水煎液中5种麻黄类生物碱含量均有所下降(P<0.05)。与白术单煎液相比,麻黄-白术配伍后,麻黄-白术(3∶2,3∶4,3∶8)3个配比组水煎液中白术内I,Ⅱ,Ⅲ的含量均显着降低(P<0.01)。结论:麻黄与白术配伍后,对彼此有效成分的溶出有一定的抑制作用。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2015年09期）
徐文杰,赵杰,周慧芳,罗佳波[4]（2012）在《不同配伍配比对麻黄甘草药对有效成分含量及抗炎活性的影响》一文中研究指出目的:研究麻黄甘草不同比例配伍前后水煎液中有效成分含量及其抗炎作用的变化,探讨两药的配伍规律。方法:采用GC-MS测定各水煎液中盐酸去甲基伪麻黄碱、盐酸去甲基麻黄碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱的煎出量;采用HPLC测定各水煎液中甘草苷和甘草酸的煎出量。通过对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响,来观察麻黄、甘草药对不同配伍配比水煎液的抗炎作用。结果:与单煎液相比,麻黄与甘草配伍后,随着配伍药材比例增大,水煎液中有效成分的含量均有不同程度的降低。与空白组比较,各给药组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有不同程度地抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);与单味麻黄或甘草组比较,麻黄甘草(12:3)组和阳性对照组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),其余各配伍组均无统计学意义。结论:麻黄甘草配伍后,对彼此有效成分的溶出有一定的抑制作用。推断二药配伍后,甘草中有机酸和麻黄中生物碱之间可能发生了化学反应,生成难溶于水的生物碱有机酸复盐,导致配伍后水煎液中有效成分含量降低。麻黄甘草配伍组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显着的抑制作用,随着甘草配伍比例的增加,抑制作用降低,推断是水煎液中有效成分含量降低所致。(本文来源于《四川中医》期刊2012年10期）
徐文杰,陈飞龙,谢颖,罗佳波[5]（2012）在《不同配伍配比对麻黄-桂枝药对有效成分含量的影响》一文中研究指出目的:研究麻黄-桂枝不同比例配伍前后水煎液中有效成分含量的变化,探讨两药的配伍规律。方法:采用GC-MS测定水煎液中盐酸去甲基伪麻黄碱(NMP)、盐酸去甲基麻黄碱(NME)、盐酸麻黄碱(E)、盐酸伪麻黄碱(PE)、盐酸甲基麻黄碱(ME)的煎出量;采用HPLC测定水煎液中香豆素、桂皮醇和桂皮醛的煎出量。结果:与单煎液相比,麻黄与桂枝配伍后,随着配伍药材比例增大,水煎液中以上各有效成分含量均有不同程度的降低,5种麻黄生物碱含量下降幅度在15%～42%,香豆素、桂皮醇、桂皮醛的含量下降幅度在16%～57%。结论:麻黄-桂枝不同比例配伍后,对彼此有效成分的溶出有一定的抑制作用。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2012年10期）
汪珊珊[6]（2012）在《基于正交设计的中药复方叁拗汤配伍配比研究及效应评价》一文中研究指出目的运用正交设计研究叁拗汤配伍关系,筛选出最优配伍配比并对最优配伍配比叁拗汤进行效应评价。研究方法建立卵蛋白致敏并激发的变应性哮喘小鼠模型,采用正交设计方法,以气道反应性、血及支气管肺泡灌洗液细胞学检查、肺组织病理学检查等为评价指标,通过对效应指标的综合评价,确定叁拗汤最佳配伍配比并探讨该配比组合的叁拗汤对卵蛋白致敏并激发的变应性哮喘小鼠模型剂量-效应关系。结果1.正交实验结果：根据Ach激发后Re的增加值、肺组织病理评分、气管组织病理评分、BALF中嗜酸性粒细胞数、血中嗜酸性粒细胞数、BALF中白细胞数等指标对各组叁拗汤疗效进行综合评分。综合评分数据的极差大小显示各因素作用主次为麻黄>杏仁>甘草。方差分析结果表明,因素麻黄对疗效的影响具有极显着意义,因素杏仁、甘草对疗效的影响具有显着意义。综合直观分析与方差分析的结果确定叁拗汤最佳配伍配比为麻黄6g,杏仁9g,甘草3g。2.对叁拗汤(麻黄6g,杏仁9g,甘草3g)高(2倍临床等效量)、中(临床等效量)、低(0.5倍临床等效量)剂量进行效应评价发现,叁拗汤中剂量疗效最显着。与模型组比较,气道反应性、血液中嗜酸性粒细胞计数,BALF中炎细胞计数均表现出一定差异(P<0.01、P,0.05),同时抑制OVA致敏哮喘小鼠肺及气管组织病理改变。结论1.基于正交设计对叁拗汤最佳配伍配进行筛选,综合分析各指标,初步认定的最优配比与临床常用配比相近,试验所得主次关系与叁拗汤组方原则相符。2.对叁拗汤(麻黄6g,杏仁9g,甘草3g)高(2倍临床等效量)、中(临床等效量)、低(0.5倍临床等效量)剂量进行效应评价发现,叁拗汤中剂量疗效最显着。(本文来源于《南京中医药大学》期刊2012-04-06）
梁晓萍,陈曦,王义明,梁琼麟,伍军[7]（2011）在《双龙方配伍配比对大鼠急性心肌缺血模型的影响》一文中研究指出目的:验证中药双龙方配伍的合理性和科学性。方法:通过盐酸异丙肾上腺素造成大鼠的急性心肌缺血模型,从生理层面(心电图)、病理层面(心肌梗死面积)和细胞分子层面(细胞酶学指标CK,LDH,SOD,MDA含量变化),观察单方以及双龙方不同配比预防给药对心肌缺血的拮抗作用。结果:各给药组均能改善心电图缺血指标、降低血清中CK,LDH,SOD,MDA含量及减少心肌梗死面积,但双龙方配伍高剂量组比其他组具有更好的效果,其中以3∶7高剂量组效果最优。结论:药效学筛选结果表明,按照双龙方配比3∶7高剂量对防治大鼠急性心肌梗死效果最优。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2011年22期）
张军会,李平[8]（2007）在《左金丸不同配伍配比的临床应用》一文中研究指出目的:通过对左金丸不同配伍配比的临床应用,扩大其临床治疗范围。方法:在中医辨证论治前提下,根据病人不同疾病,不同体质来调整黄连、吴茱萸的不同配伍配比。结论:左金丸在不同配伍配比下适用于治疗临床多种病证。(本文来源于《云南中医学院学报》期刊2007年04期）
熊玉霞,孟宪丽,杨娜,张艺,何毓敏[9]（2007）在《泻心汤有效组分及其配伍配比对大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响》一文中研究指出目的:观察泻心汤有效组分对巨噬细胞释放NO的影响,并对有效组分进行最佳配伍配比研究。方法:采用MTT法观察有效组分对巨噬细胞生长的影响,采用G riess法观察有效组分及其配伍配比对LPS诱导巨噬细胞产生NO的影响。结果:各组分在0.01~0.1 mg/ml剂量能明显抑制NO分泌,在LPS刺激细胞前1 h加入有效组分对NO的抑制作用弱于同时加药和LPS刺激后1 h加药;有效组分配伍后对NO分泌的抑制作用增强。结论:有效组分及其配伍配比均能抑制LPS诱导的巨噬细胞释放NO,且有效组分配伍后具有协同增效的特点。(本文来源于《中药材》期刊2007年01期）
柳润辉,苏娟,徐希科,张川,张卫东[10]（2006）在《药对“丹参-黄芪”有效组分的最佳配伍配比研究》一文中研究指出目的确定药对“丹参-黄芪”有效组分丹参总酚酸和黄芪总皂苷的最佳组方配比。方法以麻醉犬心肌氧摄取率及其变化率作为考察指标。根据权重配比法初步实验设不同配比组方6组,由结果分析得出最佳理论配比。在此基础上进一步做确证性实验考察两组分的协同作用。结果丹参总酚酸-黄芪总皂苷间有较好的协同作用,两者比例在5∶2时,可非常显着地降低麻醉犬心肌氧摄取率。结论丹参总酚酸-黄芪总皂苷的最佳组方配比为5∶2。(本文来源于《中国药学杂志》期刊2006年11期）
配伍配比研究论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分均匀设计与正交设计联用筛选丹参有效成份抑制成纤维细胞增值的最佳配伍配比目的:丹参是我国用于治疗心脑血管疾病的传统中药,包含4种主要水溶性成份:丹参素(DSS,S)、丹酚酸A(Sal-A,A)、丹酚酸B(Sal-B,B)和原儿茶醛(PAL,P),我们简称为(SABP)。大量的研究已经证实,每种成份都可通过不同的作用机理起到心血管保护作用。血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblast,AF)作为一个生物学处理中心从外向内(outside-in)调节血管的结构和功能,血管在应答应激和损伤的过程中,AF首先被快速激活,通过本身改编而显示不同功能和结构的行为,被视为血管应答的始动因素。目前中药有效成份配伍研究已经成为中药创新研究的一种新模式。因此,我们设想运用均匀设计和正交设计联合应用的方法,通过观察其对AF增殖的作用,找出丹参4种主要水溶性成份的最佳配伍配比关系。方法:本实验选用成年Sprague Dawley(SD)大鼠,培养其胸主动脉外膜成纤维细胞,运用MTT方法,观察药物对其增殖的抑制作用,应用酶标仪读取结果并计算抑制率。筛选步骤如下:1、初步筛选注射用丹参(冻干)粉(salvia miltiorrhiza lyophilized powder,SMLP)及丹参的四种有效成份各自的有效应用剂量范围。2、采用均匀设计和正交设计联用的方法,进行成份剂量和配伍的筛选。3、把实验得到的最优组合再次排列组合进行验证。结果:1药物浓度初筛结果:每种药物对AF的抑制率最显着的有效浓度范围是:Sal-A,Sal-B,DSS的有效浓度范围都是(10-3 mol/L,10-4 mol/L,10-5 mol/L),PAL的有效浓度范围是(10-2 mol/L,10-3 mol/L,10-4 mol/L),但是SMLP对血管外膜成纤维细胞无明显的抑制作用,且各浓度之间没有统计学差异;2均匀设计实验结果:结合初筛药物浓度实验得到的结果,四个成份各选取有效剂量范围内6个不同浓度,然后按照均匀设计表,即4因素6水平均匀表u6(64)安排实验,结果显示第3组是最有效的配伍组合,抑制作用最显着,有统计学差异。即:s3(10-4mol/l),a6(10-6mol/l),b2(5×10-4mol/l),p4(5×10-4mol/l);3正交设计实验结果:结合均匀设计实验得到的结果,在最优的处理中,根据各成份对应剂量相距较近的范围内,再次选择低、中、高3个不同剂量,对dss、sal-a、sal-b、pal四个成份的有效剂量低、中、高进行正交设计实验研究,选择l9(34)正交表,结果显示第6组是抑制作用最显着的配伍组合,具有统计学差异。即:s2(1.5×10-4mol/l),a3(7×10-6mol/l),b1(3×10-4mol/l),p2(5×10-4mol/l);4将丹参4种成份再次进行排列组合,进一步验证最佳配伍配比。根据均匀设计和正交设计的结果,为各成份确定一个最适宜有效剂量,对dss、sal-a、sal-b、pal四个成份再次排列组合:s、a、b、p,sa、sb、sp、ab、ap、bp、sab、sap、sbp、abp、sabp共15个,再次考察各种配伍组合对af增殖的影响,结果显示sabp组的抑制率最大,为最佳配伍配比组合。结论:本实验运用均匀设计和正交设计联合应用的实验方法,筛选出丹参的四种主要水溶性成份(dss、sal-a、sal-b、pal),抑制血管外膜成纤维细胞增殖的最佳配伍配比关系和浓度,即s(1.5×10-4mol/l),a(7×10-6mol/l),b(3×10-4mol/l),p(5×10-4mol/l),比例为(150︰7︰300︰500),且四种成份之间还存在一定的协同作用。第二部分丹参有效成份的最佳配伍配比对自发性高血压大鼠血管重构的保护作用目的:血管重构(vascularremodeling,vr)是高血压病心、脑、肾等靶器官损害的共同病理基础,主要表现有血管壁中层平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,vsmc)肥大、增生及细胞外基质(extracellularmatrixc,ecm)增多,外膜增厚不规则,导致管壁增厚变硬、顺应性下降等,随即导致血管功能的异常。血管紧张素Ⅱ(angiotensin,ang-ii)和内皮素(endothelin,et)是主要的缩血管因子,α-sma是vsmc和af转化成肌成纤维细胞(migratorymyofibroblasts,mf)的标志物,Ⅰ型胶原蛋白(collagentypeⅠ,col-Ⅰ)是ecm的主要成份,它们都与血管结构改变密切相关。本实验选用与人类高血压发病机制相似的自发性高血压大鼠为模型(spontaneouslyhypertensiverats,shr),观察sabp对其血压的影响以及血管重构的作用。方法:实验动物随机分为5组:(1)正常对照组(wky);(2)模型组(shr);(3)西药培哚普利(pd)组(shr);(4)注射用丹参(冻干)粉组(salviamiltiorrhizalyophilizedpowder,smlp)组(shr);(5)丹参四成份最佳配伍配比(sabp)组(shr)。每天腹腔注射给药:smlp(1g/kg/d);pd(0.4mg/kg/d);sabp(dss:5mg/kg/d,sal-a:0.233mg/kg/d,sal-b:10mg/kg/d,pal:17mg/kg/day);shr和wky对照组给予等量的生理盐水。给药前及给药期间,每2w测量一次动物尾动脉血压。给药8w后,留取每只动物的血浆及胸主动脉,用于酶联免疫吸附剂测定(elisa)、常规he染色、免疫组织化学染色、r-tpcr和westernblot实验。结果:1sabp可显着降低shr收缩压,但最终并没有降至正常水平。sabp组与pd组在整个给药过程中,都使血压稳步下降。两组相比降压效果无明显差别。smlp无明显降压效果,其与shr组相比无明显差别,无统计学意义;2sabp可显着降低shr血浆中ang-ii和et-1的含量。pd组ang-ii、et-1下降效应与sabp组类似。smlp组血浆中ang-ii和et-1含量与正常shr组无明显变化,无统计学差异;3sabp可显着改善shr胸主动脉重构。he染色观察显示:shr组胸主动脉内皮细胞偶有脱落,vsmc肥大增生明显,外膜及管壁显着增厚;sabp组胸主动脉内皮细胞未脱落,无血细胞粘附,vsmc增生不明显,管壁无明显增厚;pd组血管病理形态观察与sabp组和wky组相似。smlp组与shr组相似;sabp组较shr主动脉管壁厚度(mediathickness,mt)、管壁厚度/半径(vesselwallthickness/radius,vt/va)、外膜厚度(adventitiathicknessofthethoracicaorta,at)均显着降低,此效应与pd组相似。而smlp组对动脉结构的作用相比shr组无明显变化;4免疫组化观察显示:sabp组较shr组col-i和et-1的表达显着降低,与wky组相比较,col-i和et-1表达无明显变化。但是smlp组col-i和et-1较shr组比较,变化无统计学差异;5sabp可明显降低shr胸主动脉上col-i、et-1和α-sma的mrna的表达,sabp的这一效应与西药培哚普利和wky组无显着差异;6sabp可显着降低shr胸主动脉上col-i、et-1和α-sma蛋白的表达。结论:sabp可明显降低shr收缩压,降低血浆中ang-ii和et-1水平,显着改善胸主动脉的血管重构,减少血管壁α-sma、col-Ⅰ和et-1的表达,从而减少血管壁厚度和外膜的厚度。其具有明显的降压和血管重构的保护作用。第叁部分丹参有效成份的最佳配伍配比减缓自发性高血压大鼠血管重构的作用机制目的:氧化应激是导致高血压的重要因素之一,是由于体内蓄积过量的活性氧(reactiveoxygenspecies,ros)而触发细胞损伤,从而导致血管重构。nadph氧化酶(nox)是心血管系统产生ros的主要来源,且主要集中在血管外膜上。研究表明nox4在血管壁全层都有表达。超氧化物歧化酶(sod)是体内主要的抗氧化酶,主要用来反映机体内的抗氧化能力;丙二醛(mda)通常用来表示机体总的脂质过氧化水平。转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-beta,tgf-β)是调节af/mf以及col-i的最重要的因子之一。tgf-β/smad是其经典的信号转导通路,smad7是这一通路中重要的负向调节因子。本研究选用shr和sd大鼠af为模型,探讨sabp对其氧化应激的影响,并观察其对胸主动脉上nox4、tgf-β1和smad7表达的影响。方法:实验动物随机分为5组:(1)正常对照组(wky);(2)模型组(shr);(3)pd组(shr);(4)smlp组(shr);(5)sabp组(shr)。每天腹腔注射给药:smlp(1g/kg/d);pd(0.4mg/kg/d);sabp(dss:5mg/kg/d,sal-a:0.233mg/kg/d,sal-b:10mg/kg/d,pal:17mg/kg/day);shr和wky对照组给予等量的生理盐水。给药8w后,留取每只动物的血浆及胸主动脉,用于elisa、免疫组织化学染色、r-tpcr和westernblot实验。培养SD大鼠胸主动脉外膜AF,并分为四组:(1)Ang-Ⅱ(10-6 mol/L)组;(2)荧光剂对照组,荧光剂为DCFH-DA(10-5 mol/L);(3)Ang-Ⅱ+SABP组,Ang-Ⅱ药物浓度同上,SABP(DSS:1.5×10-4 mol/L,Sal-A:7×10-6 mol/L,Sal-B:3×10-4 mol/L,PAL:5×10-4 mol/L)组。(4)SABP组(药物浓度同上)。每组均加用荧光剂。用荧光酶标仪在502nm处检测荧光值,并用荧光显微镜拍照。结果:1 SABP可显着降低SHR血浆中MDA和TGF-β1的含量,并显着升高SOD的含量;2免疫组化染色显示:SABP可显着降低SHR组胸主动脉上NOX4和TGF-β1的表达,且与WKY组相比较,NOX4和TGF-β1表达无明显变化,差异无统计学意义。这一效应与PD组相似;3 SABP可明显降低SHR胸主动脉上NOX4的mRNA水平及蛋白表达。与西药培哚普利和WKY组的NOX4的表达效应相似;4 SABP可显着降低用Ang-Ⅱ刺激的SD大鼠AF中ROS含量。SABP组和Ang-Ⅱ+SABP组与空白对照组相比均无明显差别,没有统计学意义;5 SABP可明显降低SHR胸主动脉上TGF-β1mRNA水平及蛋白表达,且显着升高Smad7的mRNA及蛋白的表达。结论:SABP既可显着降低SHR体内的氧化应激水平,降低血浆中MDA水平,升高SOD水平;降低胸主动脉NOX4表达;也可降低Ang-Ⅱ刺激的SD大鼠AF中ROS含量;而且SABP还可降低TGF-β1表达,升高Smad7蛋白表达。SABP通过抑制氧化应激和TGF-β1的表达,升高Smad7蛋白表达,进而抑制高血压大鼠的血管重构。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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