黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化

论文摘要

[目的]克隆黄瓜Cu/Zn-SOD基因,并利用大肠杆菌进行可溶性表达、纯化及活性测定。[方法]采用Trizol法提取黄瓜表皮的总RNA,然后设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆获得黄瓜Cu/Zn-SOD基因。该基因与p GEX2T载体相连后,转化大肠杆菌BL21（DE3）,摸索可溶性表达方法。利用GST亲和层析方法纯化目标蛋白,SOD酶活性测定采用邻苯三酚法。[结果]成功地克隆了全长为459 bp的黄瓜Cu/Zn-SOD基因,编码152个氨基酸。Protein Blast分析表明其结构域中分别包含Cu2+、Zn2+结合位点,为典型的Cu/Zn-SOD酶。目标蛋白可溶性表达条件是16℃、0. 1 mmol/L IPTG诱导20 h。SDS-PAGE分析表明GST亲和层析成功地获得重组黄瓜Cu/Zn-SOD。活性测定表明两次纯化的蛋白样品SOD酶活力分别为2 328. 9 U/m L、2 144. 7 U/m L。[结论]从黄瓜表皮中克隆获得Cu/Zn-SOD基因,该基因在大肠杆菌系统中获得可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有较高的SOD酶活力。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈梦瑶,冯超越,南天豪,陈星辉,冯雨彤,朱振洪

关键词: 锌超氧化物歧化酶,基因克隆,可溶性表达,纯化

来源: 生物技术 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,园艺

单位: 浙江中医药大学生命科学学院

分类号: S642.2;Q943.2

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.02.0020

页码: 111-115

总页数: 5

文件大小: 199K

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标签：锌超氧化物歧化酶论文;  基因克隆论文;  可溶性表达论文;  纯化论文;