拟南芥微丝结合蛋白VLN1调节根毛生长作用机制的研究

拟南芥微丝结合蛋白VLN1调节根毛生长作用机制的研究

论文摘要

根毛的形成增加了根的表面积,加快了根从外界环境中对水分和营养物质的吸收,根毛的生长发育对植株的生长有较大的影响,同时根毛作为单细胞,也为植物细胞分化和伸长的研究提供了一个模型系统。根毛生长的终止能够准确地控制根毛的长度以及成熟时间。然而,目前关于根毛生长终止分子机制的研究较少。基于在根毛细胞顶端和亚顶端区域的粗肌动蛋白束在根毛生长终止中的功能,本研究揭示了微丝成束蛋白VLN1通过捆绑肌动蛋白丝在终止拟南芥根毛细胞伸长中的作用。具体研究结果如下:(1)通过GUS和GFP信号分析发现,VLN1在长根毛和短根毛细胞中均高度表达,包括其顶端及亚顶端区域,同时,药理学实验表明VLN1能够特异性地定位于根毛的微丝骨架;(2)通过遗传学方法分析发现,VLN1功能的缺失导致根毛生长停止延迟,从而导致较长根毛的产生,其过表达材料则显示出相反的结果,其根毛明显变短,生长停止时间与野生型相比提前近3 h,而回复突变植株的根毛长度及生长过程则与野生型相接近;(3)VLN1功能的丧失导致在拟南芥根毛的顶端及亚顶端区域中微丝捆绑成束的频率显著降低,粗肌动蛋白束的显着减少,微丝的切割频率和解聚频率显著增加,根毛顶端及亚顶端区域中最大微丝长度和最大微丝寿命显著降低。(4)调节根毛生长的重要的转录因子GL2基因突变体的根毛较野生型更长,生长停止时间推迟近2 h,且其过表达显示出完全相反的结果,表明在根毛终止生长过程中GL2显示出与VLN1相似的功能;(5)ChIP试验结果证明,VLN1是转录因子GL2的靶基因;(6)RT-qPCR和GUS染色分析显示,在gl2突变体植株中VLN1的表达量相对于野生型显著降低,而其过表达材料中VLN1的表达量则明显升高;(7)在根毛生长终止阶段,gl2突变体根毛顶端及亚顶端区域显示出与vln1突变体相似的微丝形态,即缺少粗微丝束。进一步研究发现:gl2突变体缺乏粗微丝束的表型可以被VLN1的过量表达回补。总之,本研究结果证实:VLN1通过捆绑根毛细胞亚顶端和顶端的微丝,调控根毛生长的终止过程,从而在根毛生长过程中发挥重要作用,并且VLN1调节根毛生长的作用受到转录因子GL2的调控,为根毛生长的调控机理和VLN1在体内的功能提供了新的科学依据。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 文献综述
  •   1.1 微丝骨架
  •     1.1.1 微丝骨架的结构
  •     1.1.2 微丝骨架的功能
  •   1.2 微丝结合蛋白
  •   1.3 微丝结合蛋白VLN家族
  •   1.4 根毛
  •     1.4.1 根毛的生长
  •     1.4.2 根毛的功能
  •     1.4.3 根毛生长发育相关调控的研究进展
  •   1.5 GL2的研究进展
  •   1.6 本研究的目的与意义
  • 第二章 VLN1对拟南芥根毛长度及生长速率的影响
  •   2.1 VLN1转基因材料中VLN1基因表达情况的鉴定
  •     2.1.1 材料与方法
  •     2.1.2 结果与分析
  •   2.2 VLN1对拟南芥根毛长度及生长速率的影响
  •     2.2.1 材料与方法
  •     2.2.2 结果与分析
  •   2.3 小结
  • 第三章 VLN1在根毛中组织定位以及亚细胞定位
  •   3.1 VLN1在根毛中的组织定位
  •     3.1.1 材料与方法
  •       3.1.1.1 试验材料
  •       3.1.1.2 试验仪器
  •       3.1.1.3 试验试剂
  •       3.1.1.4 试验方法
  •     3.1.2 结果与分析
  •   3.2 p VLN1::VLN1-GFP材料的鉴定
  •     3.2.1 材料与方法
  •     3.2.2 结果与分析
  •   3.3 VLN1在根毛中的亚细胞定位
  •     3.3.1 材料与方法
  •     3.3.2 结果与分析
  •   3.4 小结
  • 第四章 VLN1对微丝的动态变化的影响
  •   4.1 材料与方法
  •     4.1.1 试验材料
  •     4.1.2 试验仪器
  •     4.1.3 试验方法
  •   4.2 结果与分析
  •     4.2.1 VLN1对根毛细胞微丝状态的影响
  •     4.2.2 根毛不同生长阶段VLN1对微丝状态的影响
  •     4.2.3 VLN1对根毛顶端及亚顶端单根微丝捆绑动态的影响
  •     4.2.4 VLN1对根毛细胞中单根微丝其他动态参数的影响
  •   4.3 小结
  • 第五章 GL2对VLN1功能的调控作用
  •   5.1 GL2与VLN1基因体内的相互作用
  •     5.1.1 材料与方法
  •     5.1.2 结果与分析
  •   5.2 GL2转基因及杂交材料的鉴定
  •     5.2.1 材料与方法
  •     5.2.2 结果与分析
  •   5.3 GL2对VLN1在根毛中表达的影响
  •     5.3.1 材料与方法
  •     5.3.2 结果与分析
  •   5.4 GL2调控VLN1参与根毛生长终止过程
  •     5.4.1 材料与方法
  •     5.4.2 结果与分析
  •   5.5 GL2调控VLN1参与根毛微丝动态调节过程
  •     5.5.1 材料与方法
  •     5.5.2 结果与分析
  •   5.6 小结
  • 第六章 讨论与结论
  •   6.1 讨论
  •     6.1.1 VLN1通过捆绑根毛顶端及近顶端的微丝调节根毛的终止生长过程
  •     6.1.2 GL2通过激活VLN1转录水平来调节其微丝捆绑功能,在根毛终止生长阶段中发挥新的作用
  •   6.2 结论
  • 参考文献
  • 缩略词
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 毕霜田

    导师: 王显玲

    关键词: 根毛,生长终止,捆绑肌动蛋白丝,拟南芥

    来源: 沈阳农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 沈阳农业大学

    分类号: Q945

    DOI: 10.27327/d.cnki.gshnu.2019.000155

    总页数: 75

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