FSHβ在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用研究

FSHβ在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用研究

论文摘要

目的探讨卵泡刺激素β亚基(follicle-stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及可能的机制。方法利用细胞化学染色方法检测处理因素(重组腺病毒或γ促分泌酶抑制剂DAPT)作用于间充质干细胞5 d后细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色的变化。通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-PCR)检测BMP9 mRNA、FSHβmRNA和Notch信号通路靶基因(Hey1) mRNA的表达水平。利用茜素红S(alizarin red S,ARS)染色检测腺病毒感染间充质干细胞21 d后细胞中钙盐的沉积情况。结果 FSHβ处理组ALP表达较GFP对照组无明显改变,BMP9处理组ALP表达较GFP对照组明显增加,而BMP9与FSHβ联合处理组ALP表达较BMP9处理组显著增加。另外,BMP9处理组晚期成骨标志物钙盐结节、Notch信号靶基因Hey1 mRNA表达水平较GFP对照组显著增加(P<0.01),而BMP9与FSHβ联合处理组较BMP9处理组表达显著增加(P<0.01)。使用药物DAPT抑制Notch信号后,BMP9与DAPT联合处理组较BMP9单独处理组,ALP染色、Hey1 mRNA表达显著降低(P<0.05);且BMP9+FSHβ+DAPT联合处理组较BMP9+FSHβ联合处理组ALP染色、Hey1 mRNA表达也显著降低(P<0.05)。结论 FSHβ可增强BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化,Notch信号通路可能在其中发挥重要作用。

论文目录

  • 1 材料及方法
  •   1.1 试剂与细胞培养
  •   1.2 目标重组腺病毒 (GFP、BMP9、FSHβ) 构建
  •   1.3 实验分组与重组腺病毒滴度、药物浓度测定
  •   1.4 ALP表达检测
  •   1.5 茜素红S染色测定钙盐结节
  •   1.6 细胞总RNA提取、逆转录以及实时荧光定量PCR实验
  •   1.7 数据分析
  • 2 结果
  •   2.1 C3H10T1/2细胞感染重组腺病毒后相应腺病毒mRNA的表达检测和ALP检测
  •   2.2 FSHβ增加BMP9诱导C3H10T1/2细胞的ALP表达
  •   2.3 FSHβ增强BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨中钙盐的沉积
  •   2.4 FSHβ增强BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中Notch信号的表达
  •   2.5 DAPT抑制FSHβ增强BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中ALP的表达
  •   2.6 DAPT抑制FSHβ增强BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中Notch信号的表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 成亚琳,曾继涛,黄敏,刘俊银,涂小林,刘宏

    关键词: 骨形态蛋白,卵泡刺激素,间充质干细胞

    来源: 中国骨质疏松杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 重庆医科大学附属第一医院生殖健康与不孕症中心,成都市第五人民医院,重庆医科大学生命科学研究院骨发育与再生实验室

    分类号: R329.2

    页码: 775-782

    总页数: 8

    文件大小: 354K

    下载量: 139

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