首页> 正文

Elp3在酿酒酵母氧化应激反应中的功能研究

2020-12-02阅读(188)

Elp3在酿酒酵母氧化应激反应中的功能研究

论文摘要

Elp3具有组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferase,HAT）活性,是Elongator复合物的催化亚基,可乙酰化组蛋白H3和H4上特定位点的氨基酸。本实验室前期研究发现,Elp3缺失及其HAT靶位点H3K14/H4K8突变使elp3△酵母H2O2敏感性增强,表明Elp3可能通过乙酰化组蛋白促进抗氧化基因的转录进而影响酿酒酵母的H2O2耐受性。为进一步验证该推测,我们以WT、elp3△菌株为对照,对含Elp3全长及其保守HAT或SAM结构域缺失的H3/H4野生及突变elp3△转化株中ROS、MDA和CAT、SOD、GPX基因mRNA水平进行测定。结果发现H2O2胁迫下,各菌株ROS、MDA含量都明显升高,转入yELP3基因能降低elp3△细胞内ROS、MDA水平;H3K14/H4K8突变使elp3△菌株ROS、MDA水平进一步升高,yELP3的补偿作用降低。qRT-PCR检测结果表明,氧化胁迫下elp3△菌株中CAT、SOD、GPX基因表达量明显低于WT,而转入yELP3会使elp3△菌株中这些抗氧化基因表达水平增加。在H3K14/H4K8突变的elp3△转化株中,抗氧化基因的表达量进一步下调,yELP3的补偿作用也明显降低。上述结果表明Elp3可通过乙酰化组蛋白调控抗氧化基因的转录,参与酿酒酵母的氧化应激反应。此外Elp3两保守HAT或SAM结构域任何一个缺失都会降低ELP3对elp3△菌株的补偿作用,其ROS、MDA及抗氧化基因水平与elp3△菌株相似,表明HAT和SAM结构域对Elp3功能的发挥很重要。已知Elp3还可以修饰tRNA,影响蛋白的翻译效率。因此,Elp3很可能也通过tRNA修饰功能参与酵母的氧化应激。我们以WT、elp3△及tRNALysys UUU和tRNAGlnUUG单独或同时过表达的elp3△菌株为材料,H2O2胁迫下对这些菌株进行敏感性检测和抗氧化指标测定。结果发现tRNALysUUU和tRNAGlnUUG同时过表达能显著提高elp3△菌株的H2O2耐受性,降低ROS、MDA水平。表明Elp3可能通过其tRNA修饰影响一些抗氧化酶的翻译效率进而影响细胞H2O2耐受性。接下来我们通过Western Blot测定一些抗氧化蛋白的表达量,结果发现H2O2胁迫下,tRNALysUUU/tRNAGlnUUG/elp3△菌株的总蛋白含量、SOD、GPX3、CAT蛋白水平均介于elp3△菌株和WT之间。这些结果表明修饰tRNA过表达对H2O2胁迫下elp3△细胞抗氧化蛋白的表达降低,ROS、MDA升高及H2O2耐受性降低等均有明显的补偿改善功能。揭示Elp3可通过对tRNA修饰影响抗氧化蛋白的翻译而参与酿酒酵母的氧化应激反应。酵母氧化应激和热激反应有着一定的联系。通过对WT、elp3△及tRNALysUUU和tRNAGlnUUG单独或同时过表达的elp3△菌株中氧化应激相关指标的测定,结果发现高温和H2O2协同处理会进一步降低elp3△菌株的H2O2耐受性,修饰tRNA过表达对elp3△菌株的H2O2和高温敏感表型有明显的补偿作用。而且H2O2胁迫条件下Elp3缺失使得细胞Hsp75、Hsp105蛋白表达明显下调。这些结果表明H2O2胁迫下,Elp3可通过调控一些氧化应激相关蛋白和热激蛋白等的表达进而影响细胞氧化应激。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 引言
  •   1.1 Elp3 相关研究进展
  •     1.1.1 Elongator复合物的发现及结构特征
  •     1.1.2 Elp3 的结构与功能
  •   1.2 酿酒酵母的氧化应激反应
  •     1.2.1 活性氧与氧化应激
  •     1.2.2 酵母氧化应激反应的抗氧化防御体系
  •     1.2.3 酵母氧化应激主要转录激活因子
  •   1.3 热激与氧化应激之间的相互作用
  •     1.3.1 酵母热激反应和相关转录因子
  •     1.3.2 酿酒酵母氧化应激与热激之间的关系
  •   1.4 研究目的和意义
  • 第二章 材料和方法
  •   2.1 实验材料
  •     2.1.1 酵母菌株
  •     2.1.2 引物设计
  •     2.1.3 主要试剂
  •     2.1.4 酵母培养基
  •     2.1.5 试剂盒和抗体
  •     2.1.6 主要仪器设备
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 ROS水平的测定
  •     2.2.2 MDA的测定
  •     2.2.3 基因表达分析
  •     2.2.4敏感性实验
  •     2.2.5 生长曲线
  •     2.2.6 细胞总蛋白的提取
  •     2.2.7 Western Blot
  • 第三章 结果和分析
  •   3.1 Elp3的HAT活性对酵母氧化应激反应的影响
  •     3.1.1 Elp3 缺失及HAT靶位点突变对ROS的影响
  •     3.1.2 Elp3 缺失及HAT靶位点突变对MDA的影响
  •     3.1.3 Elp3 缺失及HAT靶位点突变对抗氧化基因表达的影响
  •   3.2 Elp3的t RNA修饰作用对酿酒酵母氧化应激反应的影响
  •     3.2.1 Elp3 缺失及修饰t RNA过表达菌株敏感性实验
  •     3.2.2 Elp3 缺失及修饰t RNA过表达菌株的生长曲线
  •     3.2.3 Elp3 缺失及修饰t RNA过表达对细胞ROS影响
  •     3.2.4 Elp3 缺失及修饰t RNA过表达对细胞MDA的影响
  •     3.2.5 Elp3 缺失及修饰t RNA过表达对细胞总蛋白的影响
  •     3.2.6 Elp3 缺失及修饰tRNA过表达对抗氧化蛋白表达的影响
  •     3.2.7 Elp3 缺失及修饰t RNA过表达对热激蛋白表达的影响
  • 第四章 讨论
  •   4.1 Elp3 通过转录调控参与酿酒酵母氧化应激
  •   4.2 Elp3 对酿酒酵母氧化应激的翻译调控
  •   4.3 Elp3 两保守结构域在氧化应激反应中的功能地位
  •   4.4 Elp3 与酿酒酵母热激反应
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读硕士学位期间的研究成果

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 童文艳

    导师: 李芬

    关键词: 基因表达,修饰,蛋白翻译,氧化应激

    来源: 河南师范大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学,生物学

    单位: 河南师范大学

    分类号: Q933

    DOI: 10.27118/d.cnki.ghesu.2019.000343

    总页数: 71

    文件大小: 4209K

    下载量: 16

    相关论文文献

    • [1].细菌氧化应激反应的研究进展[J]. 化工管理 2020(28)
    • [2].氧化应激反应在冠心病发病中的作用研究进展[J]. 岭南心血管病杂志 2020(05)
    • [3].维拉帕米对腹腔镜胆囊切除术氧化应激反应的影响[J]. 广州医学院学报 2012(02)
    • [4].气道炎症及氧化应激反应标记物在诊治慢性阻塞性肺疾病中的应用[J]. 求医问药(下半月) 2012(12)
    • [5].糖尿病视网膜病变患者血清同型半胱氨酸与氧化应激反应的变化[J]. 中国现代医学杂志 2011(15)
    • [6].氧化应激反应与糖尿病视网膜病变[J]. 临床眼科杂志 2009(05)
    • [7].氧化应激反应与新生儿支气管肺发育不全的研究进展[J]. 医学综述 2019(12)
    • [8].不同剂量辛伐他汀对减轻急性心肌梗死患者氧化应激反应作用研究[J]. 白求恩医学杂志 2016(06)
    • [9].维拉帕米对腹腔镜结肠癌根治术氧化应激反应的影响[J]. 湖北科技学院学报(医学版) 2013(04)
    • [10].甲状腺功能异常对老年人代谢及氧化应激反应的影响[J]. 中国现代普通外科进展 2020(02)
    • [11].单肺通气时氧化应激反应的研究进展[J]. 现代生物医学进展 2010(10)
    • [12].一期腔镜手术治疗急性复杂性胆囊炎的临床疗效及对机体氧化应激反应的影响[J]. 腹腔镜外科杂志 2020(06)
    • [13].糖尿病患者肺功能变化及与氧化应激反应的相关性[J]. 疑难病杂志 2017(11)
    • [14].糖尿病肾病患者血清同型半胱氨酸与氧化应激反应的变化[J]. 中国医药导刊 2012(08)
    • [15].不同压力持续气道正压对单肺通气氧化应激反应的影响[J]. 临床麻醉学杂志 2010(11)
    • [16].腹腔镜直肠癌根治术对患者血清炎症因子及氧化应激反应的影响[J]. 现代诊断与治疗 2019(03)
    • [17].高同型半胱氨酸血症在脑梗死氧化应激机制中的作用研究[J]. 现代诊断与治疗 2017(10)
    • [18].选择性肺叶隔离对食管手术患者氧化应激反应的影响[J]. 医学研究杂志 2014(01)
    • [19].电磁辐射暴露后不同脑区的氧化应激反应[J]. 局解手术学杂志 2013(05)
    • [20].氧化应激反应及细胞凋亡与早期压疮形成的关系研究[J]. 中华护理杂志 2011(05)
    • [21].氧化应激反应对老年患者炎症反应及术后认知功能障碍的影响[J]. 山西医科大学学报 2011(12)
    • [22].硫辛酸预处理对腹膜透析患者静脉铁剂治疗诱导的氧化应激反应的影响[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2010(09)
    • [23].不同海拔地区正常人群血清氧化应激反应相关指标含量分析[J]. 高原医学杂志 2017(03)
    • [24].不同时间机械通气对COPD大鼠肺脏氧化应激反应的影响[J]. 实用医学杂志 2013(22)
    • [25].下丘脑室旁核氧化应激反应对心力衰竭时肾交感神经活动的影响[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2009(06)
    • [26].呼出气冷凝物与支气管哮喘气道炎症和氧化应激反应的关系[J]. 临床肺科杂志 2009(10)
    • [27].血清中γ-谷氨酰转肽酶及谷胱甘肽与妊娠期高血压疾病的相关性及意义[J]. 医学综述 2014(13)
    • [28].右美托咪定对先天性心脏病患儿体外循环氧化应激反应的影响[J]. 医学研究生学报 2019(12)
    • [29].血栓通联合依达拉奉对急性脑梗死患者炎症及氧化应激反应的作用[J]. 中国乡村医药 2017(06)
    • [30].A/C比值与2型糖尿病患者炎症及氧化应激反应的关系[J]. 中国处方药 2018(07)

    标签：;  ;  ;  ;  

    Elp3在酿酒酵母氧化应激反应中的功能研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕论降 版权所有 鄂ICP备12018319号-6