论文摘要
谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率。首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶Rec T和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率。实验结果显示:在启动子Ptuf和Rec T的双重作用下,采用滞后链（70 bp、12. 5μg）优化组合方式,使基因编辑效率提升至（80±5. 7）%。由Rec T介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 王婷,马洪坤,赵桂红,蔡柠匀,张德志,陈宁
关键词: 谷氨酸棒状杆菌,优化,基因组编辑
来源: 食品与发酵工业 2019年19期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学
专业: 生物学
单位: 天津科技大学生物工程学院,代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室(天津科技大学),教育部工业发酵微生物重点实验室(天津科技大学),天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心
基金: 国家重点研发计划(2018YFA0900304),工业微生物优良菌种选育与发酵技术公共服务平台项目(17PTGCCX00190)
分类号: Q78
DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.021520
页码: 1-7
总页数: 7
文件大小: 931K
下载量: 236
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