郁湘云
深圳市龙岗中心医院(广东深圳518116）
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷方法以C18反相柱为色谱柱，甲醇—水为流动相。检测波长270nm，用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果平均回收率为98.38%。r=0.9995,线性关系良好。结论此方法灵敏、准确，适用于龙胆苦苷的测定。
【关键词】高效液相色谱法清肝胶囊龙胆苦苷
［中图分类号］R967［文献标识码］A［文章编号］1810－5734(2010)7-0086-02
龙胆为龙胆科植物，其根及根茎含龙胆苦苷，龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法（HPLC）测定复方制剂中的龙胆苦苷，其操作步骤简便，样品回收率高，重现性好，结果可靠，现报道如下。
1仪器与试药
1.1仪器
紫外分光光度计（日本岛津UV-260）；高效液相色谱仪（Waters510泵，490紫外检测器，740数据处理仪）；薄层自动涂铺器（瑞士CAMAG）；薄层层析点样台TLC-SP-1（西安市秦西机械厂）；离心机800型（江苏医用设备仪器厂）；微量进样器（上海医用激光仪器厂）。
1.2试药
中性氧化铝（100～200目）（上海五四试剂厂）；硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所）；乙酸乙脂、甲醇、氯仿均匀为分析纯（上海试剂一厂）。
2含量测定
2.1色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅胶为填充剂；甲醇—水（3：7）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。
2.2内标溶液的制备
精密称取咖啡因适量，加甲醇制成1ml含0.4mg的溶液，即得。
2.3测定法
精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液各5ml，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品中含龙胆粉量约0﹒5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，放置12h，时时振摇，精密加内标溶液2ml，加甲醇至刻度，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，按内标法以峰面积计算，即得。
3试验方法与结论
3.1条件试验
3.1.1龙胆苦苷对照品的含量确定和水溶性实验
3.1.1.1龙胆苦苷的测定:照高效液相色谱法采用NucleosilC18柱（46cm×0.25cm），精密吸取含量测定项下配制的龙胆苦苷对照品溶液进样，以甲醇—水为流动相，连续重复进样3次，归一化法计算含量。
3.1.1.2水溶性实验：精密称取龙胆苦苷对照品0.2608g，加水1ml，根据操作规范［１］，可见立即溶解。故认为龙胆苦苷对照品水溶性在易溶范围。
[SX(]1[]0.2608[SX)]=38.3ml/g
3.1.2样品与龙胆苦苷对照品紫外光谱对照取复方制剂样品和对照溶液2.5ml，分别在波长200～400nm间进行扫描。结果表明：二者紫外吸收曲线基本一致，在波长（271±1）nm处均有最大吸收。
3.1.3提取溶剂的选择：龙胆苦苷为裂环环烯醚萜单糖苷，极性大。清肝胶囊为复方制剂，成分复杂，提取溶剂的选择会影响下一步的薄层分离。因此，试用了甲醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取找出最佳提取溶剂。试验表明，甲醇对龙胆苦苷的提取效率高，同时出提出大量糖类水溶性杂质，影响薄层分离，干扰紫外吸收。而乙酸乙酯虽提取效率较差，但提取的糖类等杂质也较少。因此，采用乙酸乙酯—甲醇（70：10）的比例混合作提取溶媒；既能定量地提取龙胆苦苷，又能尽可能少地提出杂质，在该溶媒条件下的最大吸收波长为270nm。
3.2回收率试验
取清肝胶囊样品5份，精密称量，分别加入一定量的龙胆苦苷对照品，照含量测定项下的方法分别测定含量，计算回收率。
3.3精密度实验
3.3.1样品测定精密度实验取清肝胶囊样品6份，每份5g，照含量测定项下的方法试验，分别测定含量。
3.3.2薄层层析精密度试验取清肝胶囊样品5g，照含量测定项下的方法试验，在6块薄层板上点样［２］，每块板上点2个点，测定含量。
3.4紫外光谱试验
取清肝胶囊与空白龙胆制剂各5g，分别照含量测定项下的方法制备供试品溶液，照分光光度法试验，在200～350nm间进行重叠扫描。结果表明，在270nm处，制剂中其它原料几乎不影响龙胆苦苷的测定。
3.5标准曲线的制备
取龙胆苦苷对照品约400mg，照含量测定项下的方法绘制标准曲线。回归方程为Conc=17﹒856A-0.0275，r=0.9995，曲线通过原点，线性相关较好。
4讨论
采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷的含量，样品的预处理是关键。在工艺上采用连续回流提取方法提取龙胆苦苷［３］，至提取液近无色时，可提尽龙胆苦苷。其残渣经薄层层析检验，无龙胆苦苷斑点。提取液浓缩后加入水，龙胆苦苷转溶于水中，过滤，可除去提取中带来的脂溶性杂质；水溶液经氧化铝层析柱，甲醇洗脱，大部分色素等杂质被吸附［４］，而龙胆苦苷被洗脱下来。柱层析洗脱过程中，采用100ml甲醇洗脱，龙胆苦苷几乎全部洗下来。
采用薄层层析方法，用硅胶GF254板分离，荧光熄灭法定位，龙胆苦苷斑点清晰，有利于刮板。
通过试验证实，采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷，方法准确、稳定、可靠。
参考文献
［１］卫生部药政局，中国药品生物制品检定所﹒中国药品检验标准操作规范［S］﹒北京：中国医药科技出版社，1996，65﹒
［2］吕武清，龙新华﹒中成药中的药材薄层色谱鉴别［Ｍ］北京：人民卫生出版社，1997，178-179
［3］庄越，曹宝成，萧瑞祥﹒实用药物制剂技术［Ｍ］北京：人民卫生出版社，1999，110-114
［4］王如治﹒药剂学［Ｍ］北京人民卫生出版社，1997，120﹒