川西云杉几丁质酶基因PlCHI的克隆、表达与生物信息学分析

川西云杉几丁质酶基因PlCHI的克隆、表达与生物信息学分析

论文摘要

以川西云杉(Picea likiangensis var. balfouriana (Rehd. et Wils.) Hillier ex Slsvin)为材料,利用RTPCR技术,克隆获得几丁质酶基因Pl CHI的cDNA全长序列,并对该基因的序列特征及基因表达情况进行分析。结果显示,Pl CHI的开放阅读框长1017 bp,共编码338个氨基酸;蛋白序列结构域分析结果表明,Pl CHI为ClassⅠ类几丁质酶,属19家族,兼具溶菌酶活性;该序列与其他植物几丁质酶的蛋白序列相似性较高。系统发育分析结果显示,川西云杉Pl CHI序列与北美云杉(Picea sitchensis (Bong.) Corr.)、黑松(Pinus thunbergii Parl.)等松科植物亲缘关系最近。进一步将Pl CHI重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,表达出约45 k D的蛋白,主要以包涵体形式存在,且在25℃下采用0.2 mmol/L的IPTG诱导4 h时蛋白的表达量最佳。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 实验材料
  •   1.2 Pl CHI基因的克隆
  •   1.3 生物信息学分析
  •   1.4 Pl CHI基因原核表达载体的构建
  •   1.5 重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 Pl CHI基因全长c DNA克隆
  •   2.2 Pl CHI基因c DNA序列全长分析
  •   2.3 蛋白理化性质分析
  •   2.4 蛋白结构预测
  •   2.5蛋白序列同源性分析
  •   2.6 系统进化分析
  •   2.7 原核表达载体的构建与鉴定
  •   2.8 重组表达载体质粒的诱导表达及电泳分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘利娟,刘裕峰,杨帅,刘应高

    关键词: 川西云杉,几丁质酶,基因克隆,生物信息学,原核表达

    来源: 植物科学学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,林业

    单位: 四川农业大学林学院

    基金: 四川省教育厅重点项目(09ZA068)~~

    分类号: Q943.2;S791.18

    页码: 503-512

    总页数: 10

    文件大小: 3064K

    下载量: 217

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