马梨形虫病病原双重荧光PCR快速检测方法的建立与应用

马梨形虫病病原双重荧光PCR快速检测方法的建立与应用

论文摘要

在序列比对分析的基础上,设计2对引物和2条MGB探针,经体系优化建立了可快速鉴别检测两种马梨形虫病病原(马泰勒虫和驽巴贝斯虫)的双重荧光PCR检测方法。该方法可分别检出22和31基因拷贝的虫体DNA,且不与其他马病病原发生交叉反应。应用建立的荧光PCR检测方法,对采自进出口马匹的10份马全血和20份马血清进行检测,结果从马全血中检出2份马泰勒虫阳性样品。使用一对马泰勒虫EMA1全基因扩增引物,从2份阳性样品中扩增了EMA1基因。克隆测序后,对该基因全序列进行分析,证实其为马泰勒虫特异基因序列;2份样品的基因序列相似性为98.9%,存在6个氨基酸变异;2个样品中的EMA1基因不完全一致,表明2个感染样品中的虫体可能为不同的马泰勒虫虫株。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 病毒核酸及被检样品
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 主要设备
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物和探针合成
  •     1.2.2 反应条件优化
  •     1.2.3灵敏度试验
  •     1.2.4 检测标准曲线建立
  •     1.2.5 特异性试验
  •     1.2.6 样品检测
  •     1.2.7 马泰勒虫阳性样品EMA1全基因扩增
  •     1.2.8 目的片段克隆、测序和序列分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 荧光定量PCR反应条件优化
  •   2.2 灵敏度试验
  •   2.3 回归与荧光PCR效率计算
  •   2.4 特异性试验
  •   2.5 送检样品检测
  •   2.6 阳性样品的完整EMA1基因扩增与克隆
  •   2.7 序列测定与变异分析
  •   2.8 进化分析和亲缘性分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 高志强,汪琳,尹羿,张伟,蒲静,赵相鹏,任彤

    关键词: 马梨形虫病,双重荧光,马泰勒虫,驽巴贝斯虫,检测与应用

    来源: 中国动物检疫 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 北京海关技术中心

    基金: 国家重点研发计划项目(2017YFF0210305)

    分类号: S852.65

    页码: 90-97

    总页数: 8

    文件大小: 5161K

    下载量: 76

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