程序性细胞死亡因子5在卵巢子宫内膜异位症组织中的表达及意义

论文摘要

目的探讨程序性细胞死亡因子5（PDCD5）在卵巢子宫内膜异位症组织中的表达及PDCD5对异位内膜间质细胞生物学行为的影响。方法应用免疫组织化学法、实时定量逆转录酶链式反应法检测PDCD5在正常内膜、卵巢子宫内膜异位症患者异位内膜及在位内膜中的蛋白和mRNA表达水平。进一步分离培养异位内膜间质细胞,采用小干扰RNA敲降PDCD5,分别通过CCK-8法和TUNEL法检测在不同浓度亮丙瑞林作用下异位内膜细胞的增殖和凋亡情况。采用χ2检验比较异位、在位和正常内膜的PDCD5蛋白阳性表达率的差异,异位、在位及正常内膜组织中PDCD5 mRNA相对表达量的两两比较及不同浓度下PDCD5敲降组和对照组的不同时间的活细胞计数、不同浓度亮丙瑞林作用下细胞增殖抑制率以及凋亡率的比较采用t检验。结果异位内膜、在位内膜及正常内膜组织中PDCD5蛋白的阳性表达率分别为30%、29%及75%,异位内膜和在位内膜的PDCD5蛋白表达均低于正常内膜,差异均具有统计学意义（χ2=8.120、7.201;P=0.004、0.007）),异位内膜和在位内膜的PDCD5蛋白表达比较,差异无统计学意义（P=0.928）。异位内膜、在位内膜及正常内膜组织中PDCD5 mRNA相对表达量分别为0.24±0.02,0.27±0.03及1.00±0.04,异位内膜和在位内膜的PDCD5 mRNA表达均明显低于正常内膜,差异具有统计学意义（t=-32.098,P <0.001;t=-28.659,P <0.001）,异位内膜和在位内膜的PDCD5 mRNA表达比较,差异无统计学意义（t=-1.617,P=0.181）。PDCD5 mRNA表达与蛋白表达水平一致。体外单纯敲降PDCD5对异位内膜间质细胞形态及增殖无明显影响。CCK-8法结果表明,随着亮丙瑞林浓度增加,PDCD5敲降组和对照组的细胞增殖抑制率均逐渐增加,不同浓度下PDCD5敲降组的细胞增殖抑制率明显低于对照组,差异均具有统计学意义（P <0.05）。TUNEL法结果表明,在0.1μg/ml亮丙瑞林作用下,PDCD5敲降组的细胞凋亡率（0.06±0.01）低于对照组（0.13±0.02）,差异具有统计学意义（t=-5.972,P <0.001）。结论 PDCD5敲降能够减弱异位内膜间质细胞对亮丙瑞林的敏感性,使细胞凋亡减少,增殖增加。PDCD5在卵巢子宫内膜异位症组织中表达下调可能促进了子宫内膜异位症的发生发展。

论文目录

资料与方法

一、对象

二、标本处理

1. 组织处理：

2. 细胞处理：

三、方法

1. 免疫组织化学法检测PDCD5蛋白表达：

2. RT-qPCR法检测PDCD5 mRNA表达：

3. 异位内膜间质细胞的分离与培养：

4. 异位内膜间质细胞的鉴定：

5. PDCD5敲降与干扰效果检测：

6. 台盼蓝染色和CCK-8法检测细胞增殖：

7. 转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素缺口末端标记（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL）法检测细胞凋亡：

四、统计学分析

结果

一、异位、在位及正常内膜组织中PDCD5蛋白表达

二、异位、在位及正常内膜组织中PDCD5m RNA表达

三、异位内膜间质细胞鉴定结果

四、PDCD5敲降能有效减少PDCD5 mRNA表达

五、单纯敲降PDCD5对异位内膜间质细胞形态和增殖无影响

六、敲降PDCD5可增加异位内膜间质细胞的增殖

七、敲降PDCD5可减少异位内膜间质细胞的凋亡

讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张连锁,刘颖蕾,乔海风,周雅娟,开海丽,吴刘成,刘曼华

关键词: 子宫内膜异位症,程序性细胞死亡因子,免疫组织化学,亮丙瑞林,间质细胞

来源: 中华临床医师杂志(电子版) 2019年07期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 妇产科学

单位: 南通大学第二附属医院妇产科,南通大学实验动物中心

基金: 南通市科技计划项目（MS12017013-4）,南通市卫计委青年项目（WKZL2018020）

分类号: R711.71

页码: 481-488

总页数: 8

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程序性细胞死亡因子5在卵巢子宫内膜异位症组织中的表达及意义

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