导读:本文包含了核衣壳蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,病毒,番茄,抗体,综合征,电负性,冠状病毒。
核衣壳蛋白论文文献综述
毛莲珍,赵凯,邓明华,杨正安,唐迪[1]（2019）在《云南省昆明地区番茄斑萎病毒核衣壳蛋白和运动蛋白变异分析》一文中研究指出为了明确对番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)免疫的番茄YNAU335自交系表现出TSWV感病症状(抗性被打破)的原因,在排除YNAU335自交系不纯和或混杂其它感病番茄材料的因素外,选取96172I(感病)和YNAU335(抗性被打破)自交系感病植株,进行TSWV核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)和运动蛋白(movement protein,MP)基因的RT-PCR检测,并对阳性克隆进行基因测序分析。结果表明:(1)2个自交系中均克隆出TSWV的NP和MP基因,共获得5条NP(登录号:MK628735～MK628739)和3条MP(登录号:MK883723、MK883724和MK887284)多态性基因序列。(2)96172I感病材料中克隆出以上所有基因序列,YNAU335感病材料中克隆出其中的3条NP和1条MP基因序列。(3)对YNAU335中TSWV特有的NP和MP氨基酸突变位点进行分析,结果发现4个特异突变位点可能与打破YNAU335抗性有关,4个突变位点分别为:NP 18位氨基酸G突变为V,36位T突变为I,39位L突变为R,MP 274位E突变为K。(4)系统发育分析显示,5条NP和3条MP与云南省已登记的NP和MP聚类在不同的分支,表明云南省昆明地区TSWV存在丰富的遗传多样性。(本文来源于《西北植物学报》期刊2019年11期）
文荣,王玉燕,叶荣[2]（2019）在《鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性》一文中研究指出核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus, MHV) N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现MHV-A59感染鼠neuro-2a细胞后期表达的N蛋白呈现明显的电荷不均一性,其中只有小部分发生磷酸化并被装配至病毒颗粒中;等电聚焦电泳显示N蛋白的电荷呈连续分布。用蛋白脂酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)和蛋白酶体抑制剂MG-132处理后显示病毒复制水平不但与N蛋白电负性相关,而且与细胞的PKCαS657磷酸化和内质网蛋白水平相关。结果提示磷酸化修饰与鼠冠状病毒N蛋白电荷不均一性及稳定性密切相关。(本文来源于《微生物与感染》期刊2019年05期）
毛莲珍,朱海山,邓明华,杨正安,唐迪[3]（2019）在《番茄斑萎病毒核衣壳蛋白和运动蛋白变异分析》一文中研究指出课题组前期选育了对番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilf virus,TSWV)表现为免疫的番茄栽培自交系YNAU335,2018年在昆明地区种植时发现,YNAU335有部分植株表现出典型的TSWV感病症状。本研究旨在对云南省昆明地区TSWV核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,NP)和运动蛋白(Movement protein,MP)变异进行分析,明确YNAU335抗性被打破的原因。以自主选育的两个不同抗性番茄自交系96172I和YNAU335为材料,对96172I(感病)和YNAU335(抗性被打破)感病叶片和果实采样,提取总RNA并反转录。设计TSWV的NP和MP基因CDS序列克隆引物后进行PCR程序;电泳回收,连接克隆载体,96172I和YNAU335感病叶片和果实中的NP基因和MP基因分别随机选取60个阳性菌落(共计240个)摇菌、鉴别后测序。测序拼接的CDS序列通过https://www.ncbi.nlm.nih.gov/中的BankIt提交系统获得基因登录号,使用MEGA5.0软件中的Neighbor-Joining(NJ)法构建TSWV的NP和MP系统进化树并分析氨基酸突变位点。结果显示,2个自交系中均克隆出TSWV的NP和MP基因,共获得5条多态性NP序列(Gen Bank登录号:MK628735～MK628739)和3条MP序列(MK883723、MK883724和MK887284)。96172I自交系中克隆出以上所有多态性蛋白序列,YNAU335自交系中克隆出其中3条NP和1条MP序列。进一步分析YNAU335自交系中特有的NP和MP氨基酸突变位点,发现NP18位氨基酸G突变为V、36位T突变为I和39位L突变为R,MP 201位氨基酸V突变为M。系统发育分析显示,5条NP和3条MP与云南省已登记的NP和MP聚类在不同的分支,表明云南省昆明地区TSWV存在丰富的遗传多样性。(本文来源于《中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集》期刊2019-10-21）
周芝海,谭耀荣,郑瑶瑶,曾繁文,麦凯杰[4]（2019）在《猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。结果表明,扩增的N基因片段和所构建的重组质粒正确无误,成功诱导表达出可溶性重组蛋白SADS-CoV-N,分子质量约为67 ku,最佳诱导时间为6 h。Western-blot以及间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体能特异性检测SADS-CoV,证明重组蛋白有良好的免疫原性。本研究为后续建立SADS-CoV快速诊断方法及该病毒致病机制的深入研究奠定基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年09期）
李德栋,向文杰,林俊,朱远茂,薛飞[5]（2019）在《牛副流感病毒3型核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立》一文中研究指出为建立以牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)为包被抗原的间接ELISA方法,本研究扩增BPIV3的NP基因并克隆于原核表达载体,获得重组表达质粒p ET30-NP。将其转化至表达菌BL21(DE3),获得了可溶性表达的重组N蛋白,用镍柱在非变性条件下纯化后将其作为包被抗原,建立了检测BPIV3抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示作为包被抗原的重组N蛋白仅与BPIV3阳性牛血清发生特异性反应,与牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒等牛的常见病原无血清学交叉反应,表明其特异性较强。牛BPIV3阳性血清在1:640倍稀释时按该方法检测仍为阳性,显示该方法具有较高的敏感性。重复性试验显示批内变异系数小于6%,批间变异系数小于12%,表明该方法具有较好的稳定性。对94份牛血清的比较试验显示,本研究建立的间接ELISA方法与病毒中和试验的符合率为98%。利用该方法检测了394份采自接种过BPIV3灭活苗牛场的血清样品和95份未接种疫苗牛场的血清样品,结果接种疫苗的牛血清均呈强阳性,而95份未接种疫苗牛血清的阳性率为80%。本研究建立的间接ELISA方法可以试用于国内BPIV3的流行病学调查和免疫监测,为国内BPIV3的防控提供技术支持。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年05期）
杨文婷[6]（2019）在《抗猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及功能验证》一文中研究指出猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种以脱水、腹泻、肠绒毛严重萎缩为主要病变的传染病。2010年以来,PEDV变异株在世界多国猪场相继暴发流行,其对哺乳仔猪致病性强、死亡率高,一周龄以下的仔猪感染后其致死率可高达100%。该PEDV变异株的出现在我国及全球造成重大经济损失,严重威胁着养猪业的健康发展,开发用于检测PEDV感染的制剂和相应方法显得尤为重要且紧迫。核衣壳蛋白(N)在不同的PEDV毒株间高度保守、且在宿主感染早期合成,因此,PEDV N蛋白是作为感染早期检测的理想靶标。为有助于开发一系列检测PEDV感染的方法,本研究制备了抗PEDV N蛋白的单克隆抗体,并测试了其在不同检测方法中的应用前景。首先,本研究从PEDV LJX/2014毒株中采用RT-PCR方法扩增获得了N基因,随后将其因克隆至pET-30a(+)原核表达载体,获得了表达PEDV N蛋白的重组表达质粒,并将其命名为pET-N。将pET-N转化至BL-21(DE3)感受态细胞中表达N蛋白,结果表明,该目标蛋白以分泌型及包涵体形式同时表达。经优化表达条件,最终获得大量分泌型表达的N蛋白。采用镍柱亲和层析技术对所获得的重组N蛋白进行纯化,结果显示,本研究获得高纯度的PEDV N蛋白。将200μg纯化后的PEDV N蛋白与ISA15佐剂混合后于背部皮下多点免疫BALB/c小鼠,每两周以相同剂量及方式进行加强免疫。第叁次免疫一周后,采用等量N蛋白于腹腔注射进行加强免疫,3 d后处死小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得杂交瘤细胞。杂交瘤细胞经过叁轮亚克隆筛选后,共获得6株稳定分泌抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经单克隆抗体分型试剂盒鉴定,该6株单克隆抗体(mAbs)的重链均为IgG1亚类,轻链为?链。制备6株mAbs的腹水,其抗体滴度均在稀释度128000倍以上。除采用ELISA检测纯化后的PEDV N蛋白与mAbs的反应性外,我们还采用IFA和流式细胞术检测PEDV LJX/2014毒株接种的Vero-E6细胞与6株mAbs的反应性,同时用Western blotting检测其细胞裂解物与mAbs的反应性,上述结果均显示,本课题制备的mAbs均能用于间接免疫荧光(IFA)、Western blotting以及流式细胞术的检测分析。采用截短表达的策略,对mAb进行表位鉴定,采用间接ELISA方法分析这6株mAbs的表位所在区段。结果表明,3F12单抗株识别线性表位VAAKDALKSLGI,推测其余单抗株分别识别N181-379区段内的不同构象表位。综上所述,本研究成功制备了6株针对PEDV N蛋白的mAbs;测定了6株mAbs的亚型及其亲和性;分析了它们在ELISA、IFA、Western blotting和流式细胞术等方法中的应用;制备了6株mAbs的腹水,鉴定了mAbs的抗原表位。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
刘赫,叶伟,张亮,程林峰,马宏炜[7]（2019）在《汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化》一文中研究指出目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因(SF)与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV NP表达质粒,酶切鉴定重组质粒,获得的重组质粒命名为pCAGGS-SF-NP。将重组表达质粒瞬时转染到HEK293T细胞中, Western blot法检测重组质粒的表达;瞬时转染并收获蛋白样品,与StrepTrap~(TM) HP琼脂珠混匀后, 4℃过夜孵育;转移到层析柱中,经缓冲液洗涤、脱硫生物素洗脱完成亲和层析,获得洗脱样本;洗脱样品进行SDS-PAGE,分离得到与NP相互作用的宿主蛋白。结果酶切鉴定结果表明成功构建pCAGGS-SF和pCAGGS-SF-NP,重组质粒成功表达串联SF与NP的融合蛋白;在亲和层析过程中,成功特异富集融合蛋白SF-NP;洗脱样品成功分离出与NP相互作用的宿主蛋白。结论构建的重组表达质粒可以在真核细胞中成功表达融合蛋白SF-NP并获得了与NP相互作用的宿主蛋白。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年02期）
常海燕,严晓敏,张昭萍,吴卫华,贾蓓[8]（2018）在《发热伴血小板减少综合征患者核衣壳蛋白特异性IgM水平与病情严重程度的相关性》一文中研究指出目的探讨核衣壳蛋白(N蛋白)特异性Ig M抗体水平与发热伴血小板减少综合征(SFTS)疾病病情严重程度的相关性。方法回顾性分析某叁甲医院30例SFTS患者的临床特点及实验室检查结果,比较N蛋白特异性Ig M(+)组与N蛋白特异性Ig M(-)组患者的临床特点及预后转归;根据患者疾病严重程度分为轻症组和重症组,比较轻症组患者与重症组患者Ig M抗体滴度与发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) RNA载量的相关性;从而观察分析N蛋白特异性Ig M抗体滴度、SFTSV-RNA载量与患者病情严重程度的相关性。结果 N蛋白特异性Ig M(-)组中有神经症状、死亡及病重例数均明显较Ig M(+)组多(均P <0. 05); N蛋白特异性Ig M抗体水平与SFTSV-RNA载量、凝血酶原时间(PT)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)均呈负相关(r值分别为-0. 495、-0. 440、-0. 367、-0. 280,均P <0. 05);而与血小板(PLT)呈正相关(r=0. 335,P=0. 002)。SFTSVRNA载量与PT、LDH、AST均呈正相关(r值分别为0. 606、0. 604、0. 587,均P <0. 001);而与PLT呈负相关(r=-0. 384,P <0. 001)。发病第10～13天时轻症组患者N蛋白特异性Ig M抗体滴度高于重症组患者(P <0. 05)。结论N蛋白特异性Ig M抗体的出现及滴度的升高有助于SFTSV的清除,且对患者凝血功能及肝损伤、心肌损伤有修复作用; N蛋白特异性Ig M抗体可能是预测患者预后的重要因素。(本文来源于《中国感染控制杂志》期刊2018年12期）
潘慧,赵忠豪,章松柏,张德咏,张洁[9]（2018）在《番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N及膜多糖蛋白Gn的多克隆抗体制备及应用》一文中研究指出由番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt orthotospovirus (TSWV)侵染引起的番茄斑萎病毒病在我国蔬菜、花卉等作物上造成了严重的经济损失。本研究克隆了TSWV核衣蛋白N基因及膜多糖蛋白Gn基因,利用Gateway系统获得N和Gn基因的原核表达载体。将其转化到大肠杆菌表达菌株Rosetta (DE3)细胞内,IPTG诱导表达N蛋白和Gn蛋白,以此为抗原分别免疫新西兰大白兔,制备N蛋白和Gn蛋白的多克隆抗体。Western blot检测结果表明,N蛋白的多克隆抗体能够与N蛋白发生特异性结合反应,间接酶联免疫吸附(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,in-ELISA)分析检测表明抗体滴度为1∶12 800,而Gn蛋白的多克隆抗体特异性差,效价未检出。本研究制备的N蛋白多克隆抗体可用于田间病株的病害诊断,同时有助于开展病毒在介体昆虫内定位、病毒和介体昆虫互作及功能分析的研究。(本文来源于《福建农业学报》期刊2018年09期）
Ying,SHAN,Zi-qi,LIU,Guo-wei,LI,Cong,CHEN,Hao,LUO[10]（2018）在《猪流性腹泻病毒流行毒株核衣壳蛋白能够通过阻断核因子κB入核拮抗λ干扰素产生（英文）》一文中研究指出目的:探索猪流性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N蛋白)对III型λ干扰素(IFN-λ)的影响。创新点:首次在IPEC-J2细胞模型中证明PEDV流行病毒株的N蛋白可拮抗由聚肌胞苷酸(poly(I:C))诱导表达的III型IFN,但不能拮抗I型或II型IFN。这种拮抗作用是通过阻断核因子κB(NF-κB)入核来实现的。方法:利用poly(I:C)刺激IPEC-J2细胞使其IFN诱导表达。实验组转染N蛋白真核表达载体,对照组转染空载体;利用定量聚合酶链反应(q PCR)、荧光素酶报告基因等技术,检测N蛋白对I型、II型及III型IFN表达抑制情况。利用间接免疫荧光技术,检测NF-κB在细胞内的分布情况,分析NF-κB入核与N蛋白抑制IFN-λ表达的关系。结论:2013年至2017年间从浙江省不同的农场分离的10个PEDV毒株的N蛋白具有较高的核苷酸同源性,而疫苗毒株CV777的N蛋白在系统发育树中形成单系分支(图1)。流行病毒株的N蛋白可以在IPEC-J2细胞中成功表达(图2和3),并拮抗由poly(I:C)诱导表达的III型IFN,但不能拮抗I型或II型IFN(图4和5)。PEDV N蛋白通过阻断NF-ΚB入核来对poly(I:C)诱导的IFN-λ3产生的抑制作用(图6)。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》期刊2018年07期）
核衣壳蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus, MHV) N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现MHV-A59感染鼠neuro-2a细胞后期表达的N蛋白呈现明显的电荷不均一性,其中只有小部分发生磷酸化并被装配至病毒颗粒中;等电聚焦电泳显示N蛋白的电荷呈连续分布。用蛋白脂酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)和蛋白酶体抑制剂MG-132处理后显示病毒复制水平不但与N蛋白电负性相关,而且与细胞的PKCαS657磷酸化和内质网蛋白水平相关。结果提示磷酸化修饰与鼠冠状病毒N蛋白电荷不均一性及稳定性密切相关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
核衣壳蛋白论文参考文献
[1].毛莲珍,赵凯,邓明华,杨正安,唐迪.云南省昆明地区番茄斑萎病毒核衣壳蛋白和运动蛋白变异分析[J].西北植物学报.2019
[2].文荣,王玉燕,叶荣.鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性[J].微生物与感染.2019
[3].毛莲珍,朱海山,邓明华,杨正安,唐迪.番茄斑萎病毒核衣壳蛋白和运动蛋白变异分析[C].中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集.2019
[4].周芝海,谭耀荣,郑瑶瑶,曾繁文,麦凯杰.猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备[J].中国兽医科学.2019
[5].李德栋,向文杰,林俊,朱远茂,薛飞.牛副流感病毒3型核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J].中国预防兽医学报.2019
[6].杨文婷.抗猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及功能验证[D].中国农业科学院.2019
[7].刘赫,叶伟,张亮,程林峰,马宏炜.汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化[J].细胞与分子免疫学杂志.2019
[8].常海燕,严晓敏,张昭萍,吴卫华,贾蓓.发热伴血小板减少综合征患者核衣壳蛋白特异性IgM水平与病情严重程度的相关性[J].中国感染控制杂志.2018
[9].潘慧,赵忠豪,章松柏,张德咏,张洁.番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N及膜多糖蛋白Gn的多克隆抗体制备及应用[J].福建农业学报.2018
[10].Ying,SHAN,Zi-qi,LIU,Guo-wei,LI,Cong,CHEN,Hao,LUO.猪流性腹泻病毒流行毒株核衣壳蛋白能够通过阻断核因子κB入核拮抗λ干扰素产生（英文）[J].JournalofZhejiangUniversity-ScienceB(Biomedicine&Biotechnology).2018
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