利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

论文摘要

以坛紫菜(Porphyra haitanensis)为原料,通过硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等方法分离纯化得到一种高纯度藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)(A565 nm/A280 nm=5.4)。利用胃、肠液消化酶对R-PE进行酶解制备脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)抑制肽。酶解条件为:1)胃蛋白酶与R-PE比例0.5%(m/m),酶解时间30 min,pH 1.2,温度37℃;2)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶质量比为1∶1的混合酶,其与R-PE比例0.25%(m/m),酶解时间30 min,pH 7.5,温度37℃。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析发现,经两步酶解,R-PE被完全降解。采用凝胶过滤色谱法测得R-PE水解液中分子质量在3 kDa以下的小肽含量为86.06%。R-PE水解液对PEP抑制水平IC50为136.35μg/mL。酶抑制动力学研究发现,R-PE水解液对PEP表现为可逆的非竞争性抑制作用,抑制常数Ki为14μg/mL。本研究利用坛紫菜R-PE制备活性高的PEP抑制肽,将为坛紫菜深加工及高值化利用提供一定的理论参考。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 坛紫菜模拟胃、肠液消化
  •     1.3.2 R-PE的分离纯化
  •     1.3.3 蛋白质含量测定
  •     1.3.4 酶法制备PEP抑制肽的条件优化
  •     1.3.5 PEP抑制活性测定
  •     1.3.6 R-PE水解液的Tricine-SDS-PAGE分析
  •     1.3.7 R-PE水解液分子质量分布比例测定
  •     1.3.8 R-PE水解液对PEP的抑制类型及抑制常数分析
  •   1.4 数据分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 坛紫菜模拟胃、肠液消化
  •   2.2 R-PE的分离纯化
  •   2.3 酶法制备PEP抑制肽的条件确定
  •     2.3.1 胃蛋白酶比例及消化时间的确定
  •     2.3.2 混合酶比例及消化时间的确定
  •   2.4 R-PE水解液的Tricine-SDS-PAGE分析
  •   2.5 R-PE水解液的分子质量分布
  •   2.6 R-PE水解液的PEP抑制活性
  •   2.7 R-PE水解液对PEP的抑制类型及抑制常数分析
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 谢雪琼,钟婵,孙乐常,翁凌,张凌晶,刘光明,曹敏杰

    关键词: 坛紫菜,藻红蛋白,脯氨酰内肽酶抑制活性,分子质量分布,抑制动力学

    来源: 食品科学 2019年14期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 集美大学食品与生物工程学院,水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心

    基金: 国家自然科学基金面上项目(31772049)

    分类号: TS254.58

    页码: 123-129

    总页数: 7

    文件大小: 1555K

    下载量: 209

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