抗冻肽论文_陈旭,蔡茜茜,汪少芸,杨傅佳,吴金鸿

导读:本文包含了抗冻肽论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:活性,胶原,花粉管,载体,胶原酶,曲霉,质体。

抗冻肽论文文献综述

陈旭,蔡茜茜,汪少芸,杨傅佳,吴金鸿^[1]（2019）在《抗冻肽的研究进展及其在食品工业的应用前景》一文中研究指出抗冻肽是一类在结冰或亚结冰状态下能保护生物体免受伤害的一类小分子蛋白或蛋白质水解物。抗冻肽因其具有传统商业抗冻剂及天然抗冻蛋白无法比拟的优势,近年来引起了研究人员的极大兴趣,其研究进展为食品工业的产业化应用奠定了基础。本文针对目前抗冻肽的研究现状,对抗冻肽的性质、特点、抗冻机理及在食品工业中的应用等方面进行综述,并对抗冻肽未来的发展及应用前景进行展望。(本文来源于《食品科学》期刊2019年17期）

金泉,张莉,吴金鸿,汪少芸,李灵^[2]（2018）在《丝胶抗冻肽在大肠杆菌中的重组表达及其抗冻活性初探》一文中研究指出为了高效制备抗冻肽,研究一种丝胶抗冻肽目的基因SerD在大肠杆菌BL21菌株中的重组表达,并分析表达产物的抗冻活性。首先合成SerD基因片段,经KpnI和XhoI双酶切后定向插入质粒载体Pet32a中,构建表达质粒Pet32a-SerD,然后电转化入大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行目的基因表达,利用镍琼脂糖亲和层析对目的重组蛋白进行纯化,并对其进行抗冻活性分析。结果表明,最佳表达条件为重组菌在20℃诱导16 h;通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulphate-PolyAcrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹试验(Western-Blot)鉴定重组蛋白表达成功且His-SerD融合蛋白表达的分子量在25～35 kDa之间;胞内表达His-SerD融合蛋白的大肠杆菌BL21-SerD复苏后的生长活性明显高于PBL空载菌;添加His-SerD融合蛋白可明显降低溶液中冰晶颗粒大小,具有较好的重结晶抑制效果。本文通过基因工程方法在大肠杆菌中成功构建丝胶肽抗冻肽的重组表达系统,并最终获得具有抗冷冻胁迫保护作用的His-SerD融合蛋白。(本文来源于《食品工业科技》期刊2018年21期）

张莉,黄心阳,马添熠,吴金鸿,汪少芸^[3]（2017）在《重组抗冻肽在乳酸乳球菌中表达及其抗冻活性研究》一文中研究指出为了优化抗冻蛋白SF-P的重组表达,利用乳酸链球菌素Nisin对已构建的重组乳酸乳球菌进行表达。通过对诱导时间、诱导pH、诱导温度和诱导剂Nisin浓度等诱导表达条件进行优化,利用SDS-PAGE和Western blot确定最佳的表达条件;通过比较冷冻胁迫前后菌体的生长状况、发酵活力和细胞内钠钾离子含量的变化,研究重组菌在冷冻胁迫作用下的生理功能特性。结果表明:优化后的最佳表达条件为pH 7.0,诱导剂Nisin浓度15ng/mL,温度25℃,诱导时间6h;SF-P2诱导重组菌株可以显着改善乳酸菌由于经受冷冻胁迫导致的对数生长延滞期和稳定生长延滞期的增加,表现出较强的酸化活力,并且可以有效降低冷冻胁迫过程对乳酸菌细胞膜通透性的影响,起到保护细胞生理功能的作用,表明SF-P2诱导重组菌具有显着的抗冷冻胁迫保护作用。(本文来源于《食品与机械》期刊2017年10期）

艾青,赵莹,曹慧,徐斐,袁敏^[4]（2016）在《胶原抗冻肽的制备及在冷冻面团中的应用》一文中研究指出抗冻肽是一类通过抑制冰晶生长使生物有机体免受冰冻伤害的多肽。文中采用酶法制备了高热滞活性的胶原抗冻肽,并考察了该抗冻肽对冷冻面团酵母存活率、发酵时间、馒头比容、质构及感官评分的影响。结果表明:胶原抗冻肽显着改善了冷冻面团的品质,当其添加量为0.3%时,面团经21 d冻藏后,酵母存活率从43%增加到54.5%;醒发时间缩短了33.3%,为60 min;馒头比容从1.74 m L/g增加到2.11 m L/g,上升了27.1%;馒头的硬度和咀嚼性显着减小,其回弹性、黏性、弹性均增加;同时冷冻面团的外观较好,感官总分达到55.5分。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2016年07期）

吴金鸿,汪少芸,李灵,王正武^[5]（2015）在《丝胶抗冻肽的重组表达、纯化及其抗冻活性研究》一文中研究指出为了给表达高活性的抗冻肽提供开发应用的依据,进一步为用基因工程方法生产制备抗冻活性肽提供理论基础,本研究应用分子生物学手段表达获得重组的丝胶肽,采用亲和色谱方法分离纯化重组肽,并对其进行了细胞冻藏保护活性、重结晶抑制活性、热滞活性等抗冻活性分析。研究结果表明通过PCR获得丝胶肽DNA序列,经KpnI与XhoI双酶切后将丝胶肽重组基因(SerD)插入到大肠杆菌表达质粒pET32a中,构建重组表达质粒pET32a/SerD,并转化至E coli DH5a大肠杆菌菌株,经IPTG诱导表达、抗性筛选成功获得丝胶肽表达的重组菌株。经过镍琼脂糖亲和层析、EK酶酶切处理制备得到重组表达丝胶肽,抗冻活性显示其对冻藏乳酸菌能较好保持增长活力,具有明显的冰晶抑制活性和一定的热滞活性。本研究结果可为研制工业应用的高效抗冻制剂提供一定理论参考。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2015-10-21）

阮功成,曹慧,徐斐,于劲松^[6]（2015）在《冰亲和吸附装置对胶原抗冻肽的分离纯化》一文中研究指出抗冻肽是一类可以非依数性降低体系冰点的多肽,在生命体内具有非常重要的生理作用。研究搭建了冰亲和吸附装置,并以微生物保护活性为指标,优化了其对猪皮胶原酶解复合物中胶原抗冻肽的吸附条件,同时对分离产物的性质进行了研究。结果表明:在胶原酶解复合物浓度为1 mg/mL,吸附时间为10 h,吸附温度为-5℃,吸附次数为2次的条件下,所获得的胶原抗冻肽对微生物的低温保护活性最强。经过冰亲和吸附后,胶原抗冻肽的主要洗脱峰之间的分离效果明显增加,其胶原抗冻肽的分子质量主要分布小于1 000 Da、且富含甘氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2015年09期）

朱玉兵^[7]（2013）在《胶原抗冻肽的制备及其功能特性研究》一文中研究指出抗冻蛋白(Antifreeze Protein,AFP)是生物为适应极端寒冷环境而产生的一类特异性多肽或糖肽。到目前为止国内外研究人员已经从海洋鱼类、昆虫、植物、细菌和真菌等各类生物体中分离得到了多种AFP。虽然不同种类的AFP结构各不相同,但它们都具有相似的抗冻活性,即能以非依数形式降低水溶液的冰点,但不影响其熔点,从而导致水溶液的熔点和冰点之间出现差值,表现出热滞活性(THA);AFP结合到冰晶表面,还具有阻止冰晶形成、调控胞外冰晶的增长及抑制冰的重晶化等作用。由于AFP的热滞活性及重结晶抑制效应,其在食品、医学、生物及化工等领域中具有广泛的应用前景。尽管不同种类的AFP已被分离,其基因序列及结构也被测定,但较低的产率及较高的成本限制了其广泛应用。近来有研究发现,畜禽下脚料中富含的胶原蛋白因其独特的分子结构,可能含有强活性的AFP。因而,本研究拟以猪皮中的胶原蛋白为原料,THA及水解度(DH)为指标,采用可控酶解技术对胶原抗冻肽进行制备和筛选,并对其功能特性进行研究,主要研究内容如下:采用差示扫描量热法(DSC)建立了AFP的THA的测定方法,并考察了保留温度(Th)、胶原蛋白浓度及升降温速率等因素对THA的影响。结果表明,当胶原蛋白浓度为20 mg/ml,Th为0.12℃,升降温速率为10℃/min时胶原蛋白THA最高,为0.61℃。测定胶原蛋白THA时Th的选取至关重要,而升降温速率对THA无显着影响。根据以上研究最终确定的DSC法程序如下:将胶原蛋白溶解于蒸馏水中,配制20 mg/mL的胶原蛋白溶液;当仪器充满液氮并稳定后,将10μL样品于铝皿内保持5 min,按照1.0℃/min的速率进行升降温。首先降温至-20℃保持5min,再升温至10℃并保持5 min,获得胶原蛋白溶液的熔融热(△Hm)和熔点(Tm)。接着,将胶原蛋白溶液降温至-20℃保持5 min,然后缓慢升温至胶原蛋白溶液呈部分熔化状态,即到达其Th,保持15 min,再将温度从Th降至-20℃。DSC法测定胶原蛋白THA的SD和RSD较低,为2.65%和3.11%,表明采用DSC法测定AFP的THA具有较高的稳定性、重复性和精密度。采用可控酶解技术确定了胶原抗冻肽的制备工艺。首先以猪皮为原料,采用胃蛋白酶法制备了I型胶原,并对其纯度及氨基酸组成进行鉴定。结果表明,I型胶原蛋白纯度较高,分子量约为330 KD;在氨基酸组成中,Gly、Ala和Pro含量最高,Gly含量几乎占了1/3,为30.6%;Ala和Pro含量分别为9.9%和11.6%;胶原Pro的羟基化程度较高,为52.46%。再以提取的I型胶原为原料,研究了温度、pH、加酶量、胶原蛋白浓度及DH等因素对酶解产物THA的影响。结果表明,确定碱性蛋白酶对胶原蛋白有最大的水解能力,pH值、DH、胶原蛋白浓度有显着影响。在此基础上,以THA为响应值,设计了叁因素叁水平的响应面实验,确定了可控酶解技术制备胶原酶解产物的最佳酶解条件为:温度55℃、酶添加量5%、pH 7.8、胶原蛋白浓度20.75 mg/mL、DH 9%,当酶解产物浓度为200 mg/mL时,其THA最高,为5.31℃。对高THA活性酶解产物的氨基酸组成及分子量分布进行了研究,发现高THA活性酶解产物的相对分子质量主要分布在180~1000 Da之间,约占72.03%。将高THA活性的酶解复合物加入到冰淇淋中,并考察其对冰淇淋浆料黏度、膨胀率、融化率、微观结构、冰晶生长、重结晶及Tg’的影响。结果表明淇淋浆料的黏度及膨胀率都随酶解复合物浓度的增加而呈增大趋势,当酶解复合物浓度为0.5%时,冰淇淋的黏度和膨胀率达到最大,分别为34.5mPa·s和26.87%;相比于对照组,添加有胶原酶解复合物的冰淇淋开始融化的时间大约滞后8 min,其气泡分布及大小也得到显着改善;胶原酶解复合物还可显着抑制冰淇淋的冰晶生长及重结晶,当酶解复合物添加浓度为0.2%时,开始表现出对冰淇淋的重结晶抑制活性,当酶解复合物添加浓度为0.5%时,表现出最大的重结晶抑制活性;胶原酶解复合物在冰淇淋中的添加也显着升高了冰淇淋的玻璃化转变温度(Tg’),当酶解复合物添加浓度为0.5%时,冰淇淋的Tg’达到最大,为-17.64℃,这对冰淇淋的玻璃化贮存有着重要的意义;此外,本研究还采用模糊数学的h函数法评价了酶解复合物对冰淇淋感官品质的影响,发现酶解复合物可明显改善冰淇淋的品质,当其添加浓度为0.3%时,感官评价得分最高。(本文来源于《上海理工大学》期刊2013-12-01）

李卫东,陈维宇,柯才焕^[8]（2009）在《转杂色鲍抗冻肽-Ⅲ基因表达载体pIRES2-EGFP-AFP-HdiActinP的构建》一文中研究指出现代转基因技术是一种快速改良品种特性的有效方法.采用转基因技术提高我国南方重要贝类经济养殖品种——杂色鲍的耐低温特性是扩大其养殖范围的重要手段.以pIRES2-EGFP为基本载体,以合成并经过功能鉴定的抗冻肽(AFP)和杂色鲍肌动蛋白启动子(HdiActinP)为插入元件,首先用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ对基本载体pIRES2-EGFP和AFP-Ⅲ进行双酶切,目的酶切产物被回收后再连接得到载体pIRES2-EGFP-AFP.随后利用限制性内切酶SacⅠ和EcoRⅠ对载体pIRES2-EGFP-AFP和HdiActinP进行双酶切,目的酶切产物被回收后再连接最终得到杂色鲍转AFP-Ⅲ的表达载体pIRES2-EGFP-AFP-HdiActinP,经过聚合酶链式反应和测序验证证明载体构建成功.(本文来源于《厦门大学学报(自然科学版)》期刊2009年05期）

徐军^[9]（2003）在《抗冻肽表达载体构建与应用、绿色木霉分泌表达系统及AFP基因内含子功能的研究》一文中研究指出本论文由叁部分工作组成:一、根据已发表的美洲拟鲽抗冻肽AFZP(Antifreeze peptide)基因序列设计了PCR引物,从含美洲拟鲽AFZP基因cDNA序列的细菌表达质粒中扩增出目的片段,将PCR扩增的目的片段克隆到pUC-19质粒并进行了序列测定,测序结果与已发表的美洲拟鲽AFZP基因cDNA序列完全一致,最后我们将AFZP基因cDNA序列从pUC-19质粒亚克隆到植物表达载体PBI-121的CaMV35S启动子及NOS终止子之间。采用花粉管通道方法,我们对数种植物进行了AFZP植物表达载体的转化,初步实验结果表明转化植株与野生植株相比显示了一定程度的耐寒能力。二、绿色木霉(Trichoderma viride)是一种有希望用于外源基因分泌表达的丝状真菌,为了探索在绿色木霉中进行分泌表达,我们将来源于巨大曲霉(Aspergillus giganteus)的抗真菌蛋白AFP基因(430 bp)开放阅读框(包含前导序列以及内含子)插入真菌表达载体TrpC基因的启动子和终止子之间,并利用表达载体中潮霉素抗性基因为筛选标记,以PEG介导的原生质体转化方法转化了绿色木霉,SDS-PAGE和Western印迹分析表明,绿色木霉转化子分泌表达了具有抗真菌活性的成熟AFP,本部分的工作为研究在绿色木霉中分泌表达具有重要应用价值的异源真核蛋白打下了基础。叁、丝状真菌内含子的剪接可能与其他高等真核生物相似,但它是否影响基因表<WP=3>达呢?对此,人们依然知道的很少。巨大曲霉(Aspergillus giganteus)的抗真菌蛋白AFP基因(430 bp)开放阅读框中间有两个小的内含子(89 bp和56 bp),具有保守的剪接位点及丝状真菌内含子的一些典型特征。为了解内含子是否会影响AFP基因的表达,我们构建了插入AFP基因(430 bp)或无内含子的AFP基因(即285 bp 的AFP cDNA序列)的真菌表达载体并将它们分别转化绿色木霉(Trichoderma viride),对转化子的表达分析结果表明,内含子的存在对于AFP基因的表达是必需的,这说明真菌内含子不仅仅只是被剪切的间插序列,它们还可能对基因表达产生关键影响。最近的研究表明AFP与寡核苷酸结合结构域有相似的结构特征,而已有研究通过比较ADH及其相关基因的内含子和外显子结构,证实,ADH基因的寡核苷酸结合结构域的进化是内含子依赖的,因此,基于以上这些事实以及我们当前的实验结果,有理由推测AFP基因的进化可能是内含子依赖的。此外,本室先前的一项工作认为在绿色木霉(Trichoderma viride)基因组中发现了一个沉默的无内含子的AFP基因,但是本文对绿色木霉原始菌株及转化株的PCR及Southern印迹分析均清楚的表明,绿色木霉(Trichoderma viride)基因组并不存在这一序列。(本文来源于《中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）》期刊2003-07-01）

谢秀杰,达来^[10]（2002）在《成串抗冻肽基因的诱导表达载体的构建》一文中研究指出目的 :构建可将目的基因转化入烟草的重组载体。方法 :在大豆热休克启动区下游把带有甘薯信号肽的冬鲽抗冻肽成串基因与GUS报道基因融合并亚克隆到双源载体pBIN19中。结果 :构建了带有GUS报道基因的诱导型重组载体。结论 :经验证该重组载体构建成功。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2002年01期）

抗冻肽论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

为了高效制备抗冻肽,研究一种丝胶抗冻肽目的基因SerD在大肠杆菌BL21菌株中的重组表达,并分析表达产物的抗冻活性。首先合成SerD基因片段,经KpnI和XhoI双酶切后定向插入质粒载体Pet32a中,构建表达质粒Pet32a-SerD,然后电转化入大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行目的基因表达,利用镍琼脂糖亲和层析对目的重组蛋白进行纯化,并对其进行抗冻活性分析。结果表明,最佳表达条件为重组菌在20℃诱导16 h;通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulphate-PolyAcrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹试验(Western-Blot)鉴定重组蛋白表达成功且His-SerD融合蛋白表达的分子量在25～35 kDa之间;胞内表达His-SerD融合蛋白的大肠杆菌BL21-SerD复苏后的生长活性明显高于PBL空载菌;添加His-SerD融合蛋白可明显降低溶液中冰晶颗粒大小,具有较好的重结晶抑制效果。本文通过基因工程方法在大肠杆菌中成功构建丝胶肽抗冻肽的重组表达系统,并最终获得具有抗冷冻胁迫保护作用的His-SerD融合蛋白。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

抗冻肽论文参考文献

[1].陈旭,蔡茜茜,汪少芸,杨傅佳,吴金鸿.抗冻肽的研究进展及其在食品工业的应用前景[J].食品科学.2019

[2].金泉,张莉,吴金鸿,汪少芸,李灵.丝胶抗冻肽在大肠杆菌中的重组表达及其抗冻活性初探[J].食品工业科技.2018

[3].张莉,黄心阳,马添熠,吴金鸿,汪少芸.重组抗冻肽在乳酸乳球菌中表达及其抗冻活性研究[J].食品与机械.2017

[4].艾青,赵莹,曹慧,徐斐,袁敏.胶原抗冻肽的制备及在冷冻面团中的应用[J].食品与发酵工业.2016

[5].吴金鸿,汪少芸,李灵,王正武.丝胶抗冻肽的重组表达、纯化及其抗冻活性研究[C].中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛论文摘要集.2015

[6].阮功成,曹慧,徐斐,于劲松.冰亲和吸附装置对胶原抗冻肽的分离纯化[J].食品与发酵工业.2015

[7].朱玉兵.胶原抗冻肽的制备及其功能特性研究[D].上海理工大学.2013

[8].李卫东,陈维宇,柯才焕.转杂色鲍抗冻肽-Ⅲ基因表达载体pIRES2-EGFP-AFP-HdiActinP的构建[J].厦门大学学报(自然科学版).2009

[9].徐军.抗冻肽表达载体构建与应用、绿色木霉分泌表达系统及AFP基因内含子功能的研究[D].中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）.2003

[10].谢秀杰,达来.成串抗冻肽基因的诱导表达载体的构建[J].天津医科大学学报.2002

论文知识图

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