导读:本文包含了脆壁克鲁维酵母论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:克鲁,酵母,乳糖,基因,菌株,条件,硫化物。
脆壁克鲁维酵母论文文献综述
李杰,曹宇婷,徐欣,张旭,李璐[1]（2013）在《脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立》一文中研究指出以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结果表明,以OD600为0.8的脆壁克鲁维酵母为受体、电压1.5 kV、电场强度为7.5 kV.cm-1、电击后培养时间为90 min,可获得较高的转化率,最高转化效率为2.37×102转化子.μgDNA。在电击转化的同时加入限制性内切酶10μL,对电击转化的转化率无显着影响。经PCR筛选证实87.5%的转化子为同源重组,从而建立一套有效的脆壁克鲁维酵母基因置换技术。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2013年02期）
曹宇婷[2]（2011）在《UAS重复对脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因表达的影响》一文中研究指出乳糖酶(lactase)又称为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactohydrolase.E.C.3.2.1.23),简称β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。生产食品级乳糖酶菌株主要有乳酸克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母等克鲁维酵母。克鲁维酵母是天然新鲜牛乳中含有的微生物,来源于克鲁维酵母菌的乳糖酶是一种中性乳糖酶,其最适pH值与天然牛乳的pH值(6.6-6.8)最为接近,同时,来源于克鲁维酵母菌的乳糖酶的活性较高,适合工业化处理牛乳和乳清。此外,来源于克鲁维酵母菌的乳糖酶的另一优点是在低温时仍具有较好的活力,在低温环境下,容易引起牛奶酸败变质的腐败菌生长速度基本停止,可利用此性质在低温下分解牛奶和乳清的乳糖,避免了乳品加工过程中的杂菌污染。但是,来源于克鲁维酵母的乳糖酶产量并不理想,限制了乳糖酶的快速发展。采用基因工程手段大量提高乳糖酶表达量是促进乳糖酶的发展方法之一。因此,本研究以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因为研究对象,并从启动子的改造入手,设计和构建了新型脆壁克鲁维表达载体,为乳糖酶在脆壁克鲁维酵母中安全高效表达探讨了条件和方法。研究内容及结果如下:1.脆壁克鲁维酵母Kan抗性标记载体的构建根据Genbank上已发表的序列,设计引物,应用PCR法克隆得到了含有Lac启动子上游激活序列和部分乳糖酶基因的目的片段PLac。根据Genbank上已发表的酵母乳糖酶基因序列和质粒pPic9k序列设计双酶切位点,构建质粒pPkan。此质粒在含有Kan抗性基因的基础上,在Kan抗性基因的两端各连接1 kb左右的同源臂,用以转入酵母。将线性化的质粒pPkan,利用电击法转入脆壁克鲁维酵母,构建具有Kan抗性的脆壁克鲁维酵母K.f.-kan,同时,Kan基因整合在启动子的位置上,利用同源重组敲除启动子区域以及部分乳糖酶基因,使乳糖酶基因失活,相当于在增加Kan抗性基因的同时增加了一个标记。脆壁克鲁维酵母K.f.-kan可作为构建改造启动子,尝试不同信号肽的中间载体。2.脆壁克鲁维酵母UAS重复载体的构建根据Genbank上已发表的酵母乳糖酶基因序列,设计两对引物,应用重迭延伸PCR法,构建了含有一个重复的上游激活序列的质粒pTUASR,此质粒在UAS重复区两端含有和pPkan相同的同源臂,用以进行转化。用电击转化法将线性化质粒质粒pTUASR转化脆壁克鲁维酵母K.f.-kan,获得脆壁克鲁维酵母重组转化子K.f.-UASR。脆壁克鲁维酵母K.f.-UASR在原启动子的基础上增加了一个UAS重复区域,并恢复敲除掉的乳糖酶基因,恢复了乳糖酶活性。3.转化子的筛选及乳糖酶活性检测PCR筛选脆壁克鲁维酵母转化子,ONPG法测定阳性转化子发酵液乳糖酶活性。结果表明,具有UAS重复的K.f.-UASR转化子较出发菌株Kluyveromyces fragilis乳糖酶活性从15.646 U/ml提高至22.823 U/ml,提高了乳糖酶的表达量。(本文来源于《东北农业大学》期刊2011-06-02）
刘霞[3]（2009）在《利用脆壁克鲁维酵母生产rhSOD》一文中研究指出超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)作为一种抗衰老剂广泛应用于医药、食品及化妆品行业。本文描述了一种利用脆壁克鲁维酵母生产高品质基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的方法,具体包括工程菌的构建和菌体发酵诱导两部分。(本文来源于《第六届全国SOD学术研讨会论文集》期刊2009-09-26）
李威,梁金钟[4]（2008）在《脆壁克鲁维酵母乳糖酶的提取与发酵优化》一文中研究指出通过试验研究了一株脆壁克鲁维酵母胞内乳糖酶的破壁提取及其发酵培养基成分与培养条件优化,确定了该株酵母合适的破壁方法及最佳发酵培养条件。结果表明,采用球磨机对该酵母进行处理可以较好地释放胞内乳糖酶。其发酵生产乳糖酶的最佳培养基成分为:乳糖4%,酵母粉3%,MnCl21mol/L;最佳培养条件:接种量10%,温度28℃,初始pH7～7.5,摇床转数180r/min,培养时间36h。在此条件下培养,乳糖酶活力达1100U/mL,4140U/g干菌体。(本文来源于《酿酒》期刊2008年03期）
李威[5]（2008）在《脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）生产乳糖酶的研究》一文中研究指出β-半乳糖苷酶(β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶,β-D-galactoside galatohydrolase,EC3.2.1.23)通常被称为乳糖酶(Lactase)。该酶能将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖,并具有半乳糖苷的转移作用。利用乳糖酶生产低乳糖乳及乳制品是解决乳糖不耐受症问题的有效途径之一,具有重要的实际价值和理论意义。对一株应用于生产中的脆壁克鲁维酵母LSF-0612及其生产的乳糖酶进行了相关的研究,包括种子培养基的优化、发酵培养基与发酵条件的优化、酶学性质的分析和乳糖水解试验。通过对种子培养相关的单因素试验和正交试验,确定了种子培养的最佳种子培养基组分为:葡萄糖4%、酵母浸粉4%、氯化锰0.5mmol/L,培养时间24h,在此条件下菌体湿重可达到1.79g/100ml。通过对液态发酵产酶相关的单因素及正交试验,确定出液态发酵培养基的最佳组分为:乳糖4%,酵母浸粉3%,氯化锰1mmol/L,。最佳发酵条件为:接种量10%,温度28C,初始pH7.0,摇床转数180r/min,培养时间36h。在此条件下的液态发酵产酶,可使细胞内酶活高达1100U/ml,或者换算为4140U/g干菌体。通过对脆壁克鲁维酵母LSF-0612乳糖酶的酶学性质的分析结果表明:该酶的最适反应温度为40℃,在40℃条件下放置2h酶活还能达到90%以上;酶液在4℃条件下保存一个月才出现较为明显的酶活下降趋势;该酶的最适反应pH是7.0,pH的稳定范围在6.5-7.5。该酶水解乳糖的实验结果表明,该酶可以使乳糖水解率最终达到60%,而增加酶的用量可以缩短水解的时间。使用2%的添加量,4h的乳糖水解率可达到60%,水解乳糖的最佳温度是40℃,最适pH值为7.0,接近牛乳的天然pH,因而适用于牛乳中乳糖的水解。(本文来源于《东北林业大学》期刊2008-04-01）
李威,梁金钟[6]（2008）在《脆壁克鲁维酵母生产乳糖酶发酵条件的优化》一文中研究指出通过试验研究了一株产乳糖酶脆壁克鲁维酵母的发酵培养基成分及培养条件,最终确定了该株酵母的最佳发酵培养条件。结果表明,此株脆壁克鲁维酵母发酵生产乳糖酶的最佳培养基成分为:乳糖4%,酵母粉3%,MnCl21mmol/mL;最佳培养条件:接种量10%,温度28℃,初始pH7-7.5,摇床转数180r/min,培养时间36h。在此条件下培养,乳糖酶活力达1100u/mL或4140u/g干菌体。(本文来源于《乳业科学与技术》期刊2008年02期）
刘建福[7]（2004）在《脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces Fragilis）LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖》一文中研究指出低聚半乳糖是由2-10个半乳糖基和葡萄糖基通过糖苷键连接的碳水化合物。商业化的低聚半乳糖以乳糖为底物,利用微生物β-D-半乳糖苷酶催化半乳糖基转移反应来生产。低聚半乳糖属于非消化性低聚糖,具有低甜度、低热能、低致龋齿性、选择性的促进人体肠道内有益菌增殖等生理学性质,在食品领域的应用潜力很大。本论文以提高β-D-半乳糖苷酶催化合成的低聚半乳糖的产率为目标,对产β-D-半乳糖苷酶的菌株筛选、发酵条件、β-D-半乳糖苷酶的诱导合成、酶的分离纯化及性质、酶法合成低聚半乳糖的过程和产物分离等进行了系统的研究,试验结果表明:以脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)为出发菌株,甲基磺酸乙酯(EMS)为诱变剂,5-溴-4-氯-3-吲哚-吡喃半乳糖苷(X-gal)作为筛子从诱变后的860个菌落中选育到一株具有较高转苷活力的β-D-半乳糖苷酶高产菌株,菌株编号为脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)LFS-8611。以乳糖为底物,由该菌株产生的β-D-半乳糖苷酶催化合成的低聚半乳糖产率为29.6%,是出发菌株的2.8倍。利用脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)LFS-8611液体发酵生产β-D-半乳糖苷酶的最佳培养基组成为:乳糖质量浓度为12mg/L、氮源质量浓度为16mg/L;最适培养条件为:培养基的初始pH为7.5、摇床转速为200r/min、培养温度25℃。在此最适培养条件下酶活力达到15.8U/mL,较出发菌株酶活力提高了3.0倍。脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶为诱导酶,半乳糖和乳糖是该酶的诱导物,两者的诱导系数(诱导酶活/非诱导酶活)分别为2.8和1.9。半乳糖诱导该菌株产酶的适宜浓度为10mg/mL,诱导4h酶活力达到最大值18.86U/mL。该酶的生物合成需要诱导物的持续存在,除去诱导物后,诱导作用很快消失。葡萄糖既不阻止该菌株对半乳糖和乳糖的吸收也不抑制半乳糖和乳糖对K. fragilisLFS-8611β-D-半乳糖苷酶的诱导合成。半乳糖对于进入对数生长前、中、后期和稳定期的菌体细胞都具有诱导作用,但对处于对数生长前期的菌体细胞的诱导系数大些。分别采用常规柱色谱和中压液相色谱两种纯化方法对K. fragilisLFS-8611 β-D-半乳糖苷酶粗酶进行了纯化。采用常规柱色谱,粗酶先后经过(NH4)2SO4分级沉淀、CM-Sepharose CL-6B、DEAE-Sepharose CL-6B、Sephacryl S-200等分离纯化步骤,酶的回收率为16%,纯化倍数为45.8;采用中压液相色谱,粗酶经过Hiprep?16/10 Source TM 30Q强阴离子交换柱和Hioad26/60 Superdex凝胶过滤色谱两步纯化,酶的回收率为<WP=8>27%,纯化倍数为42。经过上述两种方法纯化的K. fragilisLFS-8611 β-D-半乳糖苷酶在垂直板十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上,均呈现一条染色谱带,表明纯化的酶具有较高的纯度。SDS-PAGE电泳结果表明,K. fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶相对分子质量约为60000,Sepharose CL-6B凝胶过滤色谱测定的该酶相对分子质量约为68000。脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶为中温酶,该酶的最适酶反应温度为45℃,最适pH为7.5, pH稳定范围为7.5-8.0,温度稳定范围为25-40℃,在pH7.5的缓冲液中经温度40℃保温6h后,酶活力几乎没有损失。Pb2+、Cu2+、Zn2+等金属离子及十二烷基硫酸钠(SDS)、乙二胺四乙酸(EDTA)等化合物对该酶具有抑制作用; 该酶水解邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)和乳糖的米氏常数(Km)分别为2.35μmol/mL和0.39μmol/mL,最大反应速率(Vmax)分别为1.41μmol/min和0.188μmol/min。乳糖的水解产物半乳糖抑制K. fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶的活力,而葡萄糖对该酶的活力无抑制作用.以乳糖为底物,K. fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶催化合成的低聚半乳糖主要是叁糖。乳糖的起始浓度对合成的低聚半乳糖产量影响最为显着,乳糖起始浓度从110mg/mL增加到660mg/mL,形成的低聚半乳糖的最大含量相应从43mg/mL增加到208mg/mL。该酶催化低聚半乳糖合成的最适酶反应条件为:温度40℃、pH7.0、反应时间20h。在此最适酶反应条件下,以3L 40%(w/w)乳糖溶液为底物,K. fragilis LFS-8611β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的产率为34.6%。乳糖的水解产物葡萄糖和半乳糖对低聚半乳糖的合成具有抑制作用。以乳糖为底物,K. fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶催化乳糖转苷反应后的酶反应液中含有葡萄糖、半乳糖、乳糖和低聚半乳糖等糖类。此糖类混合物经过Sephadex G-15凝胶过滤色谱和DTF-02树脂连续两步分离后得到的低聚半乳糖在高效液相色谱(HPLC)上为一个单峰,表明低聚半乳糖达到了较高的纯度。高效液相电喷雾电离质谱联用(HPLC/ESI-MS)分析结果表明:脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶催化合成的低聚半乳糖为叁糖和四糖。气相色谱分析结果表明:低聚半乳叁糖是由两分子半乳糖和一分子葡萄糖组成。(本文来源于《江南大学》期刊2004-06-01）
姚笑迪,霍克克,方季,戈万忠,李育阳[8]（2003）在《人凝血因子IX在脆壁克鲁维酵母中的表达与分泌》一文中研究指出通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒,得到了一个高稳定的h-FIX基因整合表达载体pHKB202-FP。经摇瓶培养并以半乳糖诱导此表达载体转化的酵母菌株,ELISA检测显示酵母上清液中的人凝血因子IX表达量可达到约200 ng/ml。此结果表明人凝血因子IX蛋白首次成功地在脆壁克鲁维酵母中得到了表达和分泌。这对于促进人凝血因子IX的基因工程产业化具有实际意义。(本文来源于《高技术通讯》期刊2003年06期）
单敬轩,霍克克,李育阳[9]（2003）在《脆壁克鲁维酵母KfADE5,7基因的克隆及其5’非编码区结构与功能研究》一文中研究指出通过补偿乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)KlADE5,7基因突变,从脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)基因组文库中克隆了KfADE5,7基因。该基因全长4975bp,编码793个氨基酸,氨基酸序列与已知的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)ScADE5,7基因编码区有68.3％的同源度。利用KfADE5,7-lacZ融合基因,对5’非编码区进行缺失分析,发现了具有完整启动子功能的区域,在启动子上游还发现了两个增强转录和两个减弱转录的区域。(本文来源于《高技术通讯》期刊2003年06期）
苏燕,霍克克,赵翔,李育阳[10]（2001）在《脆壁克鲁维酵母KfPDI基因高表达菌株的构建》一文中研究指出通过构建脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis)蛋白二硫化物异构酶基因KfPDI强表达单元并克隆到不同类型的酵母载体上转化酵母菌株 ,经筛选得到了带有不同拷贝数KfPDI基因的酵母转化子。酶活性测定结果表明这些转化子中的蛋白二硫化物异构酶表达水平不仅与其KfPDI基因拷贝数有关 ,而且与该基因是否整合入宿主染色体也密切相关。本文所得到的KfPDI基因高表达菌株有望作为增强外源蛋白正确折迭和分泌效率的基因工程宿主菌(本文来源于《高技术通讯》期刊2001年09期）
脆壁克鲁维酵母论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乳糖酶(lactase)又称为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactohydrolase.E.C.3.2.1.23),简称β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。生产食品级乳糖酶菌株主要有乳酸克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母等克鲁维酵母。克鲁维酵母是天然新鲜牛乳中含有的微生物,来源于克鲁维酵母菌的乳糖酶是一种中性乳糖酶,其最适pH值与天然牛乳的pH值(6.6-6.8)最为接近,同时,来源于克鲁维酵母菌的乳糖酶的活性较高,适合工业化处理牛乳和乳清。此外,来源于克鲁维酵母菌的乳糖酶的另一优点是在低温时仍具有较好的活力,在低温环境下,容易引起牛奶酸败变质的腐败菌生长速度基本停止,可利用此性质在低温下分解牛奶和乳清的乳糖,避免了乳品加工过程中的杂菌污染。但是,来源于克鲁维酵母的乳糖酶产量并不理想,限制了乳糖酶的快速发展。采用基因工程手段大量提高乳糖酶表达量是促进乳糖酶的发展方法之一。因此,本研究以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因为研究对象,并从启动子的改造入手,设计和构建了新型脆壁克鲁维表达载体,为乳糖酶在脆壁克鲁维酵母中安全高效表达探讨了条件和方法。研究内容及结果如下:1.脆壁克鲁维酵母Kan抗性标记载体的构建根据Genbank上已发表的序列,设计引物,应用PCR法克隆得到了含有Lac启动子上游激活序列和部分乳糖酶基因的目的片段PLac。根据Genbank上已发表的酵母乳糖酶基因序列和质粒pPic9k序列设计双酶切位点,构建质粒pPkan。此质粒在含有Kan抗性基因的基础上,在Kan抗性基因的两端各连接1 kb左右的同源臂,用以转入酵母。将线性化的质粒pPkan,利用电击法转入脆壁克鲁维酵母,构建具有Kan抗性的脆壁克鲁维酵母K.f.-kan,同时,Kan基因整合在启动子的位置上,利用同源重组敲除启动子区域以及部分乳糖酶基因,使乳糖酶基因失活,相当于在增加Kan抗性基因的同时增加了一个标记。脆壁克鲁维酵母K.f.-kan可作为构建改造启动子,尝试不同信号肽的中间载体。2.脆壁克鲁维酵母UAS重复载体的构建根据Genbank上已发表的酵母乳糖酶基因序列,设计两对引物,应用重迭延伸PCR法,构建了含有一个重复的上游激活序列的质粒pTUASR,此质粒在UAS重复区两端含有和pPkan相同的同源臂,用以进行转化。用电击转化法将线性化质粒质粒pTUASR转化脆壁克鲁维酵母K.f.-kan,获得脆壁克鲁维酵母重组转化子K.f.-UASR。脆壁克鲁维酵母K.f.-UASR在原启动子的基础上增加了一个UAS重复区域,并恢复敲除掉的乳糖酶基因,恢复了乳糖酶活性。3.转化子的筛选及乳糖酶活性检测PCR筛选脆壁克鲁维酵母转化子,ONPG法测定阳性转化子发酵液乳糖酶活性。结果表明,具有UAS重复的K.f.-UASR转化子较出发菌株Kluyveromyces fragilis乳糖酶活性从15.646 U/ml提高至22.823 U/ml,提高了乳糖酶的表达量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脆壁克鲁维酵母论文参考文献
[1].李杰,曹宇婷,徐欣,张旭,李璐.脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立[J].东北农业大学学报.2013
[2].曹宇婷.UAS重复对脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因表达的影响[D].东北农业大学.2011
[3].刘霞.利用脆壁克鲁维酵母生产rhSOD[C].第六届全国SOD学术研讨会论文集.2009
[4].李威,梁金钟.脆壁克鲁维酵母乳糖酶的提取与发酵优化[J].酿酒.2008
[5].李威.脆壁克鲁维酵母（Kluyveromycesfragilis）生产乳糖酶的研究[D].东北林业大学.2008
[6].李威,梁金钟.脆壁克鲁维酵母生产乳糖酶发酵条件的优化[J].乳业科学与技术.2008
[7].刘建福.脆壁克鲁维酵母（KluyveromycesFragilis）LFS-8611β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖[D].江南大学.2004
[8].姚笑迪,霍克克,方季,戈万忠,李育阳.人凝血因子IX在脆壁克鲁维酵母中的表达与分泌[J].高技术通讯.2003
[9].单敬轩,霍克克,李育阳.脆壁克鲁维酵母KfADE5,7基因的克隆及其5’非编码区结构与功能研究[J].高技术通讯.2003
[10].苏燕,霍克克,赵翔,李育阳.脆壁克鲁维酵母KfPDI基因高表达菌株的构建[J].高技术通讯.2001
论文知识图
