肉葡萄球菌电转化条件的优化

肉葡萄球菌电转化条件的优化

论文摘要

肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)作为革兰氏阳性菌,遗传转化难度大是限制其遗传操作的主要因素之一.通过优化菌体生长状态、电击缓冲液、复苏培养基组分等条件,分析了各因素对S.carnosus TM300电转化效率的影响.研究表明:S.carnosus TM300在B2生长培养基中生长到A578=0.6时收集菌体,使用GS电击缓冲液洗涤菌体制备感受态细胞,在电压2 450 V、间距2 mm电转杯条件下进行电转化,电击后立即加入LBM复苏培养基,37℃、180 r/min摇床复苏培养4 h,可以获得的最佳电转化效率为5.95×103μg-1.

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 培养基和缓冲液
  •     1.1.3 主要仪器设备
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 质粒的提取与定量检测
  •     1.2.2 S.carnosus TM300感受态细胞的制备
  •     1.2.3 电转化
  •     1.2.4 引物合成
  •     1.2.5 转化子验证
  •     1.2.6 EGFP的表达
  •     1.2.7 目的蛋白EGFP的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 细胞生长时期对转化效率的影响
  •   2.2 不同电击电压对转化效率的影响
  •   2.3 质粒质量浓度对转化效率的影响
  •   2.4 电击缓冲液对转化效率的影响
  •   2.5 复苏培养基对转化效率的影响
  •   2.6 复苏时间对转化效率的影响
  •   2.7 肉葡萄球菌转化子的验证
  •   2.8 荧光显微镜观察
  •   2.9 SDS-PAGE与Western blot分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张变强,唐巧巧,柯灵超,张健,王德培,朱燕,高强

    关键词: 肉葡萄球菌,电转化,转化效率

    来源: 天津科技大学学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 工业发酵微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院,天津科技大学后勤管理处

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31370075,31471725),山东省重点研发计划(领军人才项目)资助项目(2016GRC3201)

    分类号: TS201.3

    DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20170319

    页码: 8-14

    总页数: 7

    文件大小: 1051K

    下载量: 140

    相关论文文献

    • [1].鸭源葡萄球菌的分离鉴定和毒力基因检测及其与致病性相关性研究[J]. 中国兽医科学 2018(02)
    • [2].夏、冬两季猪源葡萄球菌耐药情况比较[J]. 中国畜牧兽医 2017(05)
    • [3].骨髓中分离出沃氏葡萄球菌1列[J]. 中国保健营养 2012(16)
    • [4].一例路邓葡萄球菌所致足部脓肿[J]. 甘肃科技纵横 2019(12)
    • [5].蜂源幼虫缓慢葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验研究[J]. 甘肃畜牧兽医 2020(02)
    • [6].鸡舍空气中葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 湖北农业科学 2020(16)
    • [7].发病罗非鱼苗沃氏葡萄球菌的分离与鉴定[J]. 热带生物学报 2013(01)
    • [8].畜禽葡萄球菌病的分析诊断和治疗要点[J]. 饲料博览 2019(05)
    • [9].路邓葡萄球菌的鉴定、耐药和临床感染分析[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版) 2018(01)
    • [10].1株猫葡萄球菌的分离与初步鉴定[J]. 中国兽医杂志 2016(06)
    • [11].包头地区奶牛子宫内膜炎致病葡萄球菌耐药性研究[J]. 现代农业 2016(09)
    • [12].泌尿系感染中葡萄球菌的耐药性分析[J]. 职业与健康 2012(12)
    • [13].傅立叶变换红外光谱技术对2种葡萄球菌的快速分类鉴定[J]. 安徽农业科学 2012(27)
    • [14].仓鼠源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 动物医学进展 2010(07)
    • [15].路邓葡萄球菌[J]. 中国感染与化疗杂志 2009(03)
    • [16].路邓葡萄球菌的质谱技术鉴定及耐药谱、临床感染特征分析[J]. 山东医药 2020(15)
    • [17].空气环境中葡萄球菌的鉴定及耐药性分析[J]. 环境与健康杂志 2018(02)
    • [18].猪源葡萄球菌中氟苯尼考耐药基因及其移动元件检测分析[J]. 中国农业科技导报 2018(11)
    • [19].血液分离利奈唑胺耐药头状葡萄球菌耐药性及相关临床特征分析[J]. 中国感染与化疗杂志 2017(04)
    • [20].猪肉和牛奶源葡萄球菌耐药性调查[J]. 中国畜牧兽医 2013(10)
    • [21].肉葡萄球菌对香肠发色的影响[J]. 肉类研究 2012(02)
    • [22].儿科血培养标本分离葡萄球菌耐药性分析[J]. 国际检验医学杂志 2012(08)
    • [23].临床标本中葡萄球菌的检测及耐药性研究[J]. 检验医学与临床 2011(02)
    • [24].雪貂葡萄球菌的分离与鉴定[J]. 中国比较医学杂志 2010(08)
    • [25].金黄色葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征16例分析[J]. 中国误诊学杂志 2009(16)
    • [26].夫西地酸对葡萄球菌体外抗菌作用研究[J]. 中国抗生素杂志 2008(03)
    • [27].牛羊场环境气载葡萄球菌浓度及气溶胶粒谱特征分析[J]. 中国兽医杂志 2019(07)
    • [28].木糖葡萄球菌和肉葡萄球菌混合发酵剂对腊肉品质的影响[J]. 食品科学 2018(22)
    • [29].山西省獭兔源葡萄球菌16s基因序列及进化树分析[J]. 中国养兔 2018(05)
    • [30].临床分离葡萄球菌的耐药性监测[J]. 河北医科大学学报 2015(06)

    标签:;  ;  ;  

    肉葡萄球菌电转化条件的优化
    下载Doc文档

    猜你喜欢