导读:本文包含了主要抗原域论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗原性,病毒,抗原,支原体,脑炎,基因,肺炎。
主要抗原域论文文献综述
王旭[1]（2018）在《绵羊肺炎支原体P130蛋白主要抗原域原核表达及间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)主要通过呼吸道来引起羊的传染性胸膜肺炎,临床症状为大叶性肺炎,支原体分布广泛,受损害的范围遍布多个国家和地区。新疆、内蒙古、山东等一些地区是发展养羊业的主要地区,最近几年,绵羊肺炎支原体病的流行趋势和范围逐渐扩大,给养羊业带来了巨大的冲击。我们要采用预防为主、治疗为辅的原则,防控该病的手段还是建立快速的检测方法。就现在来说,我国针对绵羊肺炎支原体这部分依旧很薄弱,所以,本次研究对分离出来的绵羊肺炎支原体菌株进行了鉴定,然后将分离纯化后的菌株进行后续试验。为建立简便快速的检测方法,本试验建立间接ELISA抗体检测方法以绵羊肺炎支原体膜蛋白P130-3为包被抗原。根据基因功能预测注释,绵羊肺炎支原体(Mo)P130-3蛋白显示编码大小约为130.5 ku,本试验以绵羊肺炎支原体的全基因组为模板,利用PCR技术扩增P130-3的基因片段,选取P130-3主要抗原域P130-3(693bp),构建P130-3蛋白主要抗原域原核表达载体PET32a-P130-3,并将载体转化到BL21中,诱导表达条件为0.8mMol/L IPTG和37℃,经超声波破碎、离心、纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。本试验建立了基于P130-3的间接ELISA检测方法,确定优化后的间接ELISA条件为:抗原包被浓度0.5μg/mL,4℃包被过夜;封闭液为1%BSA,37℃封闭1 h;一抗血清最佳浓度为1:100,最佳反应条件为37℃、1 h;二抗为驴抗绵羊辣根过氧化酶标记抗体酶标二抗最佳工作浓度为1:6000,最佳反应时间为37℃、1 h。结果表明:表达的P130-3蛋白经鉴定大小为43 ku,与预期值相符。并确定了建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性以及重复性。使用30份试剂盒鉴定为阴性血清进行间接ELISA检测,确定阴阳判定临界值0.238。通过150份临床样品的检测对全菌蛋白和本试验所建立的间接ELISA方法进行符合率的检测,试验结果表明两者符合率达90.67%。综上所述,本试验所建立的间接ELISA方法简便、快速,相对于其他检测方法价格低廉,可以用来诊断绵羊肺炎支原体病和流行病学调查。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
布日额,王金良,吴金花,孙立杰,锡林高娃[2]（2018）在《牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定》一文中研究指出利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重迭延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重迭延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度>96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重迭延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年03期）
王旭,张晓宇,张建华,黄海碧,王晓晖[3]（2018）在《绵羊肺炎支原体P130蛋白主要抗原域原核表达及其间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出为建立绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)快速检测方法,本试验以绵羊肺炎支原体膜蛋白P130为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。根据基因功能预测注释,绵羊肺炎支原体(Mo)P130蛋白显示编码大小约为130.5 ku,本试验以Mo全基因组为模板,使用PCR扩增Mo P130的基因片段,根据生物信息学软件分析,选取P130主要抗原域P130-3(693 bp),构建P130蛋白主要抗原域原核表达载体pET32a-P130-3,并转化至BL21菌,在0.8 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以P130-3为诊断抗原,经过优化反应条件,建立检测Mo抗体的间接ELISA方法。结果表明,表达的P130-3蛋白经鉴定大小为43 ku,与预期值相符。P130-3-ELISA方法阴、阳判定临界值为:D_(450)值=0.238,该方法与口蹄疫等阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性。组内变异与组间变异均小于5%,具有很好的重复性,利用该方法与兰州兽医研究所推出的间接血凝法对200份临床样本进行检测,两者的符合率在90%以上。本研究建立的Mo间接ELISA方法可用于Mo的诊断和流行病学调查。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2018年03期）
孙涛,王超,徐彪,王宏华,邓明俊[4]（2016）在《鸭坦布苏病毒E基因主要抗原域的原核表达及单克隆抗体的制备》一文中研究指出为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因主要抗原域的单克隆抗体(MAb),本研究经DNAStar软件分析预测E蛋白含有的优势抗原表位区,以DTMUV QD株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增涵盖编码主要优势表位的E基因片段(943 bp~1 287 bp),并将其克隆至表达载体p ET-28a中,转化于大肠杆菌中进行诱导表达。对表达的重组蛋白进行western blot鉴定,将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与SP2/0细胞融合,经筛选和鉴定,获得了两株能够稳定分泌抗E蛋白的杂交瘤细胞株,命名为4G8和6B12,其亚型均为Ig G1型,并且识别于不同的抗原位点。经间接免疫荧光检测,MAb 4G8和6B12均能够与DTMUV发生特异性反应。本研究所制备的MAb为进一步鉴定DTMUV以及分析囊膜糖蛋白E的结构和功能奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2016年06期）
孙涛,李传峰,徐彪,邓明俊,岳志芹[5]（2015）在《鸭甲肝病毒VP1蛋白主要抗原域的原核表达及间接ELISA方法的初步建立》一文中研究指出根据已发表的鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)疫苗株A66株基因组序列,利用生物学分析软件DNAStar进行VP1蛋白的二级结构和抗原域预测,确定其主要抗原域(major antigen domain of VP1,VP1M),设计并合成一对可扩增VP1M的特异性引物,PCR扩增获得长为327 bp的VP1M基因片段。将VP1M基因片段定向克隆至p GEX-4T-1表达载体中,鉴定正确后进行IPTG诱导表达,获得了以包涵体为主的重组蛋白。重组蛋白纯化后,经过Western blot检测表明重组蛋白具有良好的抗原性。以该蛋白作为包被抗原,成功建立了检测DHAV-1的间接ELISA方法。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为DHAV的快速诊断、流行病学调查和免疫鸭群的抗体检测提供了快速实用的检测手段。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2015年02期）
胡小欢[6]（2014）在《DPV gJ基因主要抗原域表达及抗体制备》一文中研究指出本论文对鸭瘟病毒(DPV)gJ基因进行了生物信息学分析,原核表达了gJ基因去跨膜区和信号肽的截段基因gJ(M),并制备了截段基因表达蛋白的多克隆抗体,主要内容可归纳如下：1.鸭瘟病毒gJ基因的分子特性分析鸭瘟病毒gJ基因大小为1620bp,编码539个氨基酸,理论等电点为6.037。鸭瘟病毒gJ蛋白在其N端有信号肽,C端有一个跨膜区,阂值为0.5时共有32个潜在的磷酸化位点,这些位点包括15个丝氨酸位点,9个苏氨酸位点,8个酪氨酸预测位点。通过对gJ蛋白做二级结构预测,结果表明无规则卷曲的氨基酸含量高(占50.65%),为蛋白抗原表位提供了良好的空间。其ORF含62个稀有密码子,含量占33.3%,包括9个连续的稀有密码子串。2.鸭瘟病毒gJ截段基因的原核表达及多克隆抗体的制备成功构建了gJ全基因和gJ截段基因的重组原核表达质粒pET-32a(+)-gJ口pET-32(+)-gJ(M),并将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌中。IPTG诱导结果表明gJ全基因不能有效表达,gJ截段基因高效表达,得到与预期蛋白大小一致的约为30kDa的不可溶性蛋白,免疫印迹结果表明表达蛋白可与兔抗DPV血清发生特异性反应。对诱导表达条件进行优化得出最佳表达条件为力0.1mmol/L IPTG,在30℃水浴条件下诱导5h。纯化的重组蛋白免疫兔子制备兔抗gJ(M)抗体,琼脂糖扩散试验表明其效价为1：32。(本文来源于《四川农业大学》期刊2014-06-01）
王雅静,郭东春,刘家森,王淑亚,原冬伟[7]（2013）在《鸭肠炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串联表达》一文中研究指出为了研究鸭肠炎病毒gB和gD基因串联表达后的免疫学活性,根据已发表的鸭肠炎病毒糖蛋白gB和gD基因序列设计两对引物,分别扩增了gB和gD基因主要抗原域,将其克隆到表达载体pPRO-EX—HTb中,构建重组表达质粒pHTb—gB-gD。将重组表达质粒pHTb-gB-gD转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,SDS—PAGE表明:获得串联表达的gB和gD重组蛋白约60.5 Ku,与预期蛋白的分子质量一致,主要以包涵体的形式存在。Western-blot表明:串联表达的gB和gD重组蛋白可与鸭肠炎病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联表达的gB和gD重组蛋白为下一步建立针对鸭肠炎病毒的诊断方法奠定基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2013年12期）
卢冰霞,李斌,秦毅斌,赵武,梁家幸[8]（2013）在《猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定》一文中研究指出为了猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制做准备,对广西猪JEVFC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定。结果表明,成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。这为下一步猪JEV诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集》期刊2013-10-21）
卢冰霞,李斌,秦毅斌,赵武,梁家幸[9]（2013）在《猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792 E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定》一文中研究指出对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。(本文来源于《西南农业学报》期刊2013年03期）
王贵宾,郭巍,赵立平,李红梅,赵敏[10]（2012）在《马动脉炎病毒GL、M和N蛋白主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定》一文中研究指出采用RT-PCR方法从EAV Bucyrus株扩增了截短的GL、M和全长的N基因片段,将叁者分别克隆到表达载体pGEX-6p-1中,测序验证后转化Rosetta(DE3)宿主菌中经IPTG诱导表达,诱导后菌体裂解物经SDS-PAGE分析。试验结果表明,重组菌表达出约35 000、34 000和38 000的特异性条带,通过条件优化及切胶纯化获得较高浓度的目的蛋白。经Western-blot和间接ELISA分析,纯化的蛋白只与抗马动脉炎病毒阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性和特异性。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2012年07期）
主要抗原域论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重迭延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重迭延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度>96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重迭延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
主要抗原域论文参考文献
[1].王旭.绵羊肺炎支原体P130蛋白主要抗原域原核表达及间接ELISA检测方法的建立[D].内蒙古农业大学.2018
[2].布日额,王金良,吴金花,孙立杰,锡林高娃.牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定[J].中国兽医学报.2018
[3].王旭,张晓宇,张建华,黄海碧,王晓晖.绵羊肺炎支原体P130蛋白主要抗原域原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].中国兽医科学.2018
[4].孙涛,王超,徐彪,王宏华,邓明俊.鸭坦布苏病毒E基因主要抗原域的原核表达及单克隆抗体的制备[J].中国预防兽医学报.2016
[5].孙涛,李传峰,徐彪,邓明俊,岳志芹.鸭甲肝病毒VP1蛋白主要抗原域的原核表达及间接ELISA方法的初步建立[J].中国动物传染病学报.2015
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[7].王雅静,郭东春,刘家森,王淑亚,原冬伟.鸭肠炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串联表达[J].中国兽医杂志.2013
[8].卢冰霞,李斌,秦毅斌,赵武,梁家幸.猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定[C].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集.2013
[9].卢冰霞,李斌,秦毅斌,赵武,梁家幸.猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定[J].西南农业学报.2013
[10].王贵宾,郭巍,赵立平,李红梅,赵敏.马动脉炎病毒GL、M和N蛋白主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定[J].中国兽医学报.2012
论文知识图
