基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因快速检测方法的建立

论文摘要

目的应用环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）建立针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法。方法以溶藻弧菌标准株（ATCC-17749）和溶藻弧菌野生株（WT）为研究对象,通过在线生物学软件（http://primerexplorer.jp/e/）设计针对溶藻弧菌gyrB基因的LAMP引物,利用恒温水浴进行等温扩增,优化反应条件,建立快速检测方法。结果①经2g/dl凝胶电泳结果显示反应温度为61℃时扩增产物成像效果较60℃,62℃和63℃明显,为适宜反应温度;②在61℃条件下反应60 min和90 min凝胶电泳成像效果差异不大,反应时间为60 min能满足扩增需要;③利用同一体系对临床6种其它常见致病菌进行等温扩增时未出现阳性条带,提示整个体系特异度较好;④采用模板稀释法验证该LAMP体系检测的灵敏度为10-4mg/L。结论建立了基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法,具有良好的特异度和敏感度,对快速检测溶藻弧菌有重要意义。

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类型: 期刊论文

作者: 陈昌国,陈秋圆,侯兵兵,刘新萍,董优优

关键词: 环介导等温扩增技术,弧菌,溶藻弧菌,快速检测,基因

来源: 现代检验医学杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 解放军总医院第六医学中心检验科

基金: 军队后勤科研重点项目,编号：BHJ14J005

分类号: R378.3

页码: 6-9

总页数: 4

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标签：环介导等温扩增技术论文;  弧菌论文;  溶藻弧菌论文;  快速检测论文;  基因论文;