导读:本文包含了新疆沙冬青论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:新疆沙冬青,脱水素,qRT-PCR,载体构建
新疆沙冬青论文文献综述
程福星[1]（2018）在《新疆沙冬青脱水素蛋白基因克隆、表达及功能研究》一文中研究指出本试验以新疆沙冬青为研究材料,对新疆沙冬青中的脱水素基因及其启动子分别进行了克隆和分析,采用实时荧光定量技术探索了脱水素基因在低温、盐、干旱和外源激素胁迫条件下的表达特性,并观察了重组表达载体导入到原核生物大肠杆菌中的生长情况。即通过多种分子生物学技术手段,进一步探究了脱水素基因在抵抗非生物胁迫中的功能和作用机制,具体试验结果如下:1.通过同源克隆及RACE技术,从新疆沙冬青中克隆得到了脱水素蛋白基因的全长cDNA,并命名为AnDHN。cDNA全长1005 bp,包含515 bp的开放阅读框,编码181个氨基酸残基;通过分析脱水素蛋白结构,判断其编码的蛋白属于YK型脱水素蛋白。2.运用染色体步移技术最终克隆得到了长约830 bp的启动子序列,通过在线网站PlantCARE和PLACE分析预测出了多种与逆境响应相关的功能元件,其中包含了多种与低温、高盐、干旱和激素相关的应答元件;还含有一些组织特异性元件,如胚乳特异性表达元件等。3.利用qRT-PCR技术,对新疆沙冬青AnDHN基因在不同非生物胁迫诱导下的表达量作出了分析。结果表明,AnDHN基因在低温、高盐、干旱因素胁迫下特异性表达,且根、茎、叶的表达量均呈现出了不同程度的上调;在脱落酸、生长素和茉莉酸甲酯外源激素的诱导下,表达量也表现出了上调的趋势,且AnDHN基因的表达主要受脱落酸诱导较为明显。4.借助Gateway克隆技术成功构建了pET32a-AnDHN表达载体,并经过亲和层析技术纯化了该蛋白。重组菌AnDHN和对照菌pET32a分别经过0.5 mM的IPTG诱导6 h后,判断了AnDHN蛋白在非生物胁迫下对大肠杆菌活力的影响,即通过平板培养观察发现AnDHN蛋白提高了大肠杆菌在逆境胁迫下的耐受能力。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-06-01）
易萌萌[2]（2018）在《新疆沙冬青AnGolS2基因的克隆及表达调控研究》一文中研究指出近几年对植物抗逆性的研究已经越来越深入,而植物对逆境的应答及适应的机理也越来越受到人们的关注。植株在面对逆境时会做出相应的应答,从而更好地适应恶劣的环境(包括低温、高盐、干旱等等)。而启动子在调控基因的表达中起到了重要的作用,因此对基因启动子与逆境应答机理的关系研究逐渐成为热点。本研究选用了新疆沙冬青为实验材料,运用基因克隆技术,成功的克隆了An GolS2以及该基因的启动子,并且利用软件预测了该启动子的顺式作用元件,根据顺式作用元件设计缺失载体,最后进行瞬时表达分析,得到的试验结果如下:1.根据干旱胁迫转录组中找到的GolS基因的EST序列设计该基因特异性引物,用RACE扩增技术,以cDNA为模板对基因3’端及5’端进行扩增,之后对序列进行测序及拼接,得到基因全长序列1168 bp,其中编码区为987 bp。2.根据AnGolS2的编码区设计特异性引物,以新疆沙冬青DNA为模板,利用染色体步移技术,克隆得到821 bp的启动子序列,然后通过PLACE和plant CARE网站进行预测分析,得到顺式作用元件。预测结果表明该启动子序列除了TATA-Box和CAAT-Box等核心元件,还含有一些与非生物胁迫及激素应答相关的顺式作用元件。3.对新疆沙冬青的根茎叶叁个部位进行低温、高盐和干旱胁迫的不同时间处理后进行实时荧光定量,发现在不同逆境胁迫下根茎叶中AnGolS2基因的表达量发生了不同的变化,推测An GolS2可能涉及到叶片光合产物的运输和储存过程。用ABA、IAA、NAA、GA_3、MeJA、ETH对新疆沙冬青植株进行诱导后进行荧光定量分析,发现在不同的激素诱导下An GolS2基因的表达量发生变化,因此我们推测激素可能涉及到An GolS2基因表达调控。4.构建乙烯相关元件的缺失载体,含有乙烯元件的缺失体(385 bp),不含有乙烯元件的缺失体(378 bp),将两个缺失体和启动子全长序列一同连接到表达载体p CAMB IA 3301上,得到叁个重组表达载体。利用农杆菌介导转化的方法,以GUS基因为检测报告基因进行瞬时表达分析,结果表明:注射含有乙烯元件的启动子缺失片段表达载体的叶片经过乙烯诱导后有显色反应,注射不含有乙烯元件的启动子缺失片段表达载体的叶片用乙烯诱导后无显色反应,不用乙烯诱导的叶片无论注射哪个启动子缺失片段表达载体都没有颜色,说明An GolS2启动子上的这个乙烯转录因子结合位点可能对An GolS2基因的表达有调控作用,但这一元件的启动作用明显低于全长启动子,暗示在全长启动子的其它部位可能还存在着响应乙烯诱导的顺式作用元件。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-06-01）
张婷婷[3]（2018）在《新疆沙冬青GPAT基因的功能验证》一文中研究指出新疆沙冬青能在非常恶劣的自然环境生长的濒危植物,它具有18条染色体的二倍体,并且具有高应激耐受性,是非常优秀的耐寒植物。植物叶绿体膜中的磷脂酰甘油(Phosph-atidglglycerol,PG)的脂肪酸不饱和度与膜脂相变温度及植物抗寒性关系密切。而甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)又是PG生物合成过程中的第一个酰基酯化酶,对决定植物膜PG的不饱和度起关键作用。利用PCR法获得新疆沙冬青GPAT基因c DNA全序列AnGPAT基因,将AnGPAT基因转入烟草,获得转AnGPAT基因烟草T2代种子,本研究对转AnGPAT基因烟草进行了遗传性验证,并通过测定野生型烟草与转AnGPAT基因烟草多种抗寒生理指标的变化,进一步鉴定AnGPAT基因的功能。本研究的主要结果如下:1.提取野生型烟草与转AnGPAT基因烟草的DNA,通过PCR扩增在转基因烟草中获得AnGPAT基因清晰条带,同时通过Southern blot遗传性验证确认AnGPAT基因已转入烟草。2.利用ELISA酶联免疫反应测定低温胁迫下野生型烟草与转AnGPAT基因烟草的GPAT酶含量,利用GC-MS脂肪酸含量的变化,综合结果表明,随着低温胁迫时间的增长,转AnGPAT基因烟草中GPAT酶含量及不饱和脂肪酸含量均高于野生型烟草,与GPAT底物的选择性一致,转AnGPAT基因烟草表现出的抗寒性更高。3.通过对野生型烟草与转AnGPAT基因烟草表型的鉴定,并测量低温胁迫下野生型与转AnGPAT基因烟草地上与地下鲜重、干重,以及电导率,丙二醛的含量,脯氨酸的含量等相关指标的变化,发现在低温胁迫下转AnGPAT基因烟草细胞受伤的程度,质膜的过氧化程度均低于野生型烟草,转基因烟草更耐寒,进一步验证了AnGPAT基因的抗寒功能。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-04-20）
石丽丽,蒋志荣,方向文[4]（2018）在《新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)和蒙古沙冬青(A. monglicus)叶片解剖特征及抗旱性》一文中研究指出以新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)幼苗叶片、蒙古沙冬青(A.monglicus)幼苗及成年叶片为研究对象,采用石蜡切片法将叶片解剖并固定,再用光学显微观察法对其抗旱性结构分析比较,旨在探讨沙冬青属植物叶片在干旱环境的生态适应机制。采用方差分析法对各指标的差异性进行比较分析,通过Pearson's相关系数法分析各指标间相关关系。结果表明:(1)新疆沙冬青与蒙古沙冬青幼苗叶片厚度无显着差异;新疆沙冬青幼苗叶片的角质层厚度及上、下表皮厚度及栅栏组织厚度均显着大于蒙古沙冬青幼苗;新疆沙冬青幼苗叶片的海绵组织厚度和主脉直径均显着小于蒙古沙冬青。蒙古沙冬青成年植株叶片厚度、角质层厚度、栅栏组织厚度及主脉直径均显着大于幼苗,上、下表皮厚度及海绵组织厚度均小于幼苗。(2)沙冬青属植物叶片栅栏组织厚度与叶片厚度显着正相关;下表皮厚度、角质层厚度、海绵组织厚度与叶片厚度相关性不显着。为了更好适应分布区环境,新疆沙冬青叶片比蒙古沙冬青具有更强的抗旱性,蒙古沙冬青成年植株叶片的抗旱性优于幼苗。沙冬青属植物叶片的加厚主要通过栅栏组织的加厚实现。(本文来源于《中国沙漠》期刊2018年01期）
王雪,周佳熠,孙会改,禹瑞敏,高飞[5]（2018）在《新疆沙冬青基因组调查测序与基因组大小预测》一文中研究指出新疆沙冬青是中国荒漠地区代表性常绿阔叶植物,属于第叁纪孑遗植物。其极强的逆境耐受性受到了研究者的广泛关注,但由于缺乏基因组序列,分子生物学研究水平进展缓慢。本研究对新疆沙冬青进行了基因组调查测序,共得到65 Gb大小的双端测序数据。结合基于K-mer分析和流式细胞分析的方法,预测基因组大小、杂合率和GC含量等特征,估计基因组大小为770~787 Mb。测序数据拼接构建得到contigs的N50为684 bp,总读长为0.538 Gb;进一步组装后scaffolds的N50为12.09 kb,总读长为0.602 Gb。对拼接数据进行SSR分子标记预测,共得到151858个SSR,其中二核苷酸重复单元比例最高为56.39%,在二核苷酸重复单元中,AT/TA组成形式占多数。本研究首次报道了荒漠植物新疆沙冬青的基因组特征,为后续基因组学研究提供参考。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2018年01期）
周禧琳,袁林[6]（2016）在《新疆沙冬青引种栽培技术及园林应用初探》一文中研究指出论文研究并总结了新疆沙冬青种子的采集,种子的保存及播种前的处理,整地播种、幼苗成活期管理以及幼苗移栽等引种栽培技术。对其在引种地的生长适应性、园林观赏特性以及园林应用价值进行了初步的探索,对其在园林造景中的配植方式及配置要素提出了科学的建议,以期为新疆沙冬青的资源保育以及在园林绿化中的推广应用提供基础依据。(本文来源于《塔里木大学学报》期刊2016年04期）
王寅刚[7]（2016）在《新疆沙冬青GPAT基因克隆与表达分析》一文中研究指出本研究实验材料为强耐寒性植物新疆沙冬青,对编码耐寒相关蛋白酶的AnGPAT基因进行分子克隆及序列分析,构建了转入AnGPAT基因的大肠杆菌原核表达载体、毕赤酵母真核表达载体并进行体外表达分析及蛋白纯化,并且通过构建转AnGPAT基因烟草对基因功能进行验证。为发掘新的耐寒优势基因及基因工程在林木育种上的应用提供了参考。本课题主要研究结果如下：1.PCR扩增获得新疆沙冬青GPAT基因的cDNA全长序列,命名为AnGPAT。新AnGPAT基因编码区序列长1380bp,编码460个氨基酸残基,预测蛋白分子量40.9kD,等电点7.38。自95至171位氨基酸为GPAT_N保守功能域,201到436位氨基酸残基为LPLATs保守功能域。进化分析表明AnGPAT与野大豆(Glycine soja)GPAT同源性最高,达83%。2.将AnGPAT基因编码区与表达载体PET-30a(+)连接,构建大肠杆菌诱导型表达载体PET30a-AnGPAT,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达并纯化后,获得40KDa左右重组AnGPAT蛋白；将AnGPAT基因编码区与表达载体pPIC9连接,构建毕赤酵母诱导型表达载体pPIC9-AnGPAT,转化到毕赤酵母GS115中,诱导表达并纯化后,获得40KDa左右重组AnGPAT蛋白。3.对转AnGPAT基因大肠杆菌BL21进行总脂肪酸含量的测定,结果表明其不饱和脂肪酸含量高于对照,证明原核表达的AnGPAT具有生物酶活性。4.将AnGPAT基因编码区与表达载体PBI121连接,构建真核表达载体PBI121-AnGPAT,导入农杆菌LBA4404,农杆菌介导烟草愈伤组织,获得转AnGPAT基因烟草,并对转基因烟草的进行PCR扩增,证明了AnGPAT基因已经整合到转基因烟草的基因组中。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2016-06-16）
石丽丽[8]（2016）在《蒙古沙冬青和新疆沙冬青叶片解剖结构特征及其抗旱适应性》一文中研究指出本文以新疆沙冬青幼苗、蒙古沙冬青幼苗以及蒙古沙冬青成年植株的叶片为研究对象,采用常规石蜡切片方法对其抗旱性解剖结构进行了研究;采用单因素方差分析研究了叶片解剖性状在两种沙冬青幼苗之间、蒙古沙冬青幼苗与成年植株之间的差异;同时对两种沙冬青叶片厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度、上、下表皮厚度等叶片解剖指标间的异速生长关系进行分析,得到以下主要结论:1、两个种沙冬青叶片均为典型的超旱生结构:叶片小而厚、叶片解剖形态为等面叶,角质层发达、表皮细胞肥大、叶肉组织排列紧密、栅栏组织厚、海绵组织不发达、维管束发达。2、新疆沙冬青与蒙古沙冬青幼苗的叶片厚度、主脉直径无显着差异,新疆沙冬青的角质层厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、栅栏组织厚度均显着大于蒙古沙冬青,新疆沙冬青海绵组织厚度、主脉直径、主脉木质部厚度、主脉韧皮部厚度均显着小于蒙古沙冬青。蒙古沙冬青成年植株叶片的叶片厚度、角质层厚度、栅栏组织厚度、主脉直径、主脉木质部厚度、主脉韧皮部厚度均显着大于幼苗,上、下表皮及海绵组织厚度均小于幼苗。3、沙冬青属植物叶片厚度与栅栏组织厚度之间存在显着正相关关系,而与海绵组织厚度、上、下表皮厚度、角质层厚度的相关性较弱。4、沙冬青属叶片解剖性状间存在异速生长关系,栅栏组织厚度与叶片厚度、栅海比(P/S)与叶片厚度、主脉直径与栅栏组织厚度这3对性状呈正的异速生长关系;上表皮细胞厚度与叶片厚度、海绵组织厚度与栅栏组织厚度、上表皮细胞厚度与栅栏组织厚度、主脉直径与海绵组织厚度、角质层厚度与海绵组织厚度这5对性状呈负的异速生长关系。上述8对性状的异速生长关系在两种沙冬青幼苗叶片之间有一定差异,在蒙古沙冬青幼苗与成年植株之间亦有差异。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2016-06-01）
司杰,周禧琳,焦培培[9]（2016）在《吸湿-回干处理对新疆沙冬青种子活力的影响》一文中研究指出吸湿-回干处理为一种经济实用的提高种子活力、增加抗逆性的实验方法,同样能应用于新疆沙冬青种子的研究上,经吸湿-回干处理的新疆沙冬青种子无论在萌发率、苗长及活力指数上均高于对照,即使在低温吸胀24 h的冷害条件下也呈现同样的规律,甚至有更高的活力指数。(本文来源于《天津农业科学》期刊2016年04期）
刘玉东[10]（2016）在《新疆沙冬青AnGolS1克隆、表达及其转基因番茄植株获得》一文中研究指出番茄作为蔬菜栽培中的第一大作物,其适宜的温度范围为13～33℃。在我国设施番茄栽培中,冬春季节的低温成为影响番茄产量与质量的重要限制因子。而普通番茄中抗低温种质资源匮乏,本试验针对从生长在极端低温环境中的新疆沙冬青幼苗低温诱导差减抑制杂交库中分离到的肌醇半乳糖苷合成酶基因EST片段(命名为AnGolS1)利用RACE方法,获得了AnGolS1全长序列(GenBank登录号：GU942748),分析了基因及其编码蛋白的特性,研究了低温下该基因的表达模式,并在此基础上,将该基因转入栽培番茄中,以期提高栽培番茄对低温的抗性。论文的主要结论如下：(1)根据pET30a(+)具有HIS标签的特性,利用酶切连接的方法构建了pET30a(+)-AnGolS1重组质粒；利用IPTG诱导AnGolS1融合蛋白表达,Ni+树脂纯化融合蛋白并用来催化底物反应；通过HPLC分析不同反应时间产物肌醇半乳糖苷的含量,AnGolS1催化底物反应非常迅速,推测AnGolS1很可能是一个快速反应酶并且酶活性有效时间为40min。(2)利用qRT-PCR技术分析不同胁迫下幼苗根、茎及叶中AnGolS1表达量变化,结果显示：AnGolS1基因仅在低温胁迫下高效表达,尤其是茎中高达334.5倍；而在干旱和高盐胁迫下并没有明显的上调表达变化,这说明AnGolS1仅是一个低温诱导基因。(3)低温处理新疆沙冬青幼苗,对根、茎、叶分别取样并进行石蜡包埋和切片；构建探针质粒并合成DIG-labeling探针,进行ISH原位杂交实验。光学显微镜下观察发现：低温胁迫下,茎中束中形成层细胞有非常明显的杂交信号,而周围木质部、韧皮部和皮层等细胞却并不明显；同时,根和叶片木质部周围也存在比较明显的杂交信号,这些结果说明茎束中形成层细胞很可能担负着AnGolS1的合成、转运和协调作用。(4)根据Gateway转基因技术要求构建转基因重组质粒并转化农杆菌,农杆菌介导侵染番茄子叶,抗性培养基培育愈伤组织获得番茄幼苗；利用PCR扩增及活体荧光检测鉴定阳性转基因植株,最终获得了25株AnGolS1转基因番茄T0代植株,其中有4株可能是多拷贝植株,为下一步研究番茄抗寒性提供了重要的实验材料。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2016-03-31）
新疆沙冬青论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近几年对植物抗逆性的研究已经越来越深入,而植物对逆境的应答及适应的机理也越来越受到人们的关注。植株在面对逆境时会做出相应的应答,从而更好地适应恶劣的环境(包括低温、高盐、干旱等等)。而启动子在调控基因的表达中起到了重要的作用,因此对基因启动子与逆境应答机理的关系研究逐渐成为热点。本研究选用了新疆沙冬青为实验材料,运用基因克隆技术,成功的克隆了An GolS2以及该基因的启动子,并且利用软件预测了该启动子的顺式作用元件,根据顺式作用元件设计缺失载体,最后进行瞬时表达分析,得到的试验结果如下:1.根据干旱胁迫转录组中找到的GolS基因的EST序列设计该基因特异性引物,用RACE扩增技术,以cDNA为模板对基因3’端及5’端进行扩增,之后对序列进行测序及拼接,得到基因全长序列1168 bp,其中编码区为987 bp。2.根据AnGolS2的编码区设计特异性引物,以新疆沙冬青DNA为模板,利用染色体步移技术,克隆得到821 bp的启动子序列,然后通过PLACE和plant CARE网站进行预测分析,得到顺式作用元件。预测结果表明该启动子序列除了TATA-Box和CAAT-Box等核心元件,还含有一些与非生物胁迫及激素应答相关的顺式作用元件。3.对新疆沙冬青的根茎叶叁个部位进行低温、高盐和干旱胁迫的不同时间处理后进行实时荧光定量,发现在不同逆境胁迫下根茎叶中AnGolS2基因的表达量发生了不同的变化,推测An GolS2可能涉及到叶片光合产物的运输和储存过程。用ABA、IAA、NAA、GA_3、MeJA、ETH对新疆沙冬青植株进行诱导后进行荧光定量分析,发现在不同的激素诱导下An GolS2基因的表达量发生变化,因此我们推测激素可能涉及到An GolS2基因表达调控。4.构建乙烯相关元件的缺失载体,含有乙烯元件的缺失体(385 bp),不含有乙烯元件的缺失体(378 bp),将两个缺失体和启动子全长序列一同连接到表达载体p CAMB IA 3301上,得到叁个重组表达载体。利用农杆菌介导转化的方法,以GUS基因为检测报告基因进行瞬时表达分析,结果表明:注射含有乙烯元件的启动子缺失片段表达载体的叶片经过乙烯诱导后有显色反应,注射不含有乙烯元件的启动子缺失片段表达载体的叶片用乙烯诱导后无显色反应,不用乙烯诱导的叶片无论注射哪个启动子缺失片段表达载体都没有颜色,说明An GolS2启动子上的这个乙烯转录因子结合位点可能对An GolS2基因的表达有调控作用,但这一元件的启动作用明显低于全长启动子,暗示在全长启动子的其它部位可能还存在着响应乙烯诱导的顺式作用元件。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
新疆沙冬青论文参考文献
[1].程福星.新疆沙冬青脱水素蛋白基因克隆、表达及功能研究[D].沈阳农业大学.2018
[2].易萌萌.新疆沙冬青AnGolS2基因的克隆及表达调控研究[D].沈阳农业大学.2018
[3].张婷婷.新疆沙冬青GPAT基因的功能验证[D].沈阳农业大学.2018
[4].石丽丽,蒋志荣,方向文.新疆沙冬青(Ammopiptanthusnanus)和蒙古沙冬青(A.monglicus)叶片解剖特征及抗旱性[J].中国沙漠.2018
[5].王雪,周佳熠,孙会改,禹瑞敏,高飞.新疆沙冬青基因组调查测序与基因组大小预测[J].植物遗传资源学报.2018
[6].周禧琳,袁林.新疆沙冬青引种栽培技术及园林应用初探[J].塔里木大学学报.2016
[7].王寅刚.新疆沙冬青GPAT基因克隆与表达分析[D].沈阳农业大学.2016
[8].石丽丽.蒙古沙冬青和新疆沙冬青叶片解剖结构特征及其抗旱适应性[D].甘肃农业大学.2016
[9].司杰,周禧琳,焦培培.吸湿-回干处理对新疆沙冬青种子活力的影响[J].天津农业科学.2016
[10].刘玉东.新疆沙冬青AnGolS1克隆、表达及其转基因番茄植株获得[D].沈阳农业大学.2016