白花丹醌对血瘀证肝纤维化大鼠

张晓梅1赵翠红2张立娇2

（1河北省承德市宽城县宽城县医院肝病科河北承德067000;

2河北省承德市宽城县宽城县医院肝病科河北承德067000）

基金项目：广西科技厅课题《白花丹醌制剂新药临床前研究》桂科计字（2009）92号3-1【摘要】目的：探讨白花丹醌对实验性血瘀证肝纤维化大鼠血清学改变及证侯动态变化。方法：将SD大鼠40只在进行腹腔注射二甲基亚硝胺、第二周大鼠尾静脉注射去甲肾上腺素及每八天大鼠尾静脉注射小牛血清白蛋白的基础上供给加入酒精的饮用水，并喂以高脂低蛋白饲料建立血瘀证肝纤维化大鼠模型，第九周处死动物，检测血清谷丙氨酸转换酶（ALT）、谷草氨基酸转换酶（AST）活性、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、总胆红素(TBIL)的含量改变及在整个实验过程中观察动物行为、体征、排便等改变。结果：检测表明血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、CIV的含量及证侯变化与空白对照组存在显著性差异。结论：实验过程中血清学改变及证侯动态变化反应了与血瘀证肝纤维化动物模型的建立成正性关系。

【关键词】血瘀证肝纤维化模型；血清学；证侯

【中图分类号】R453【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)05-0013-01

本实验以喂高脂低蛋白饲料、含有酒精的饮用水为主建立大鼠实验性血瘀证肝纤维化模型，通过尾静脉注射甲肾上腺素、小牛血清白蛋白为干预，探讨实验性血瘀证肝纤维化过程中不同阶段证侯及血清学变化的意义。

1实验材料及方法

11实验动物：购自广西中医学院动物实验中心，SPF级SD大鼠40只(生产许可证号：SYXK桂2003-0001)，雄雌各半，体重150～180g，2月龄。

12实验试剂：二甲基亚硝胺、去甲肾上腺素、小牛血清白蛋白、酒精、生理盐水配置、蒸馏水（均由南宁恒因试剂公司提供）

13主要实验仪器及试剂：752分光光度计（上海精密科学仪器厂）、IRISIntrepidⅡxsp型全谱直读等离子体光谱仪（美国热电公司）、BS110S电子分析天平（德国Sartorius公司）HM355S型全自动切片机（德国美康公司）、SYNCHRONLx20全自动生化分析仪(Beck—manCoulter生产)，SN-697计数仪上海核所日环光电仪器有限公司。

透明质酸放免试剂盒，层粘连蛋白放免试剂盒，Ⅳ型胶原放免试剂盒，Ⅲ型前胶原放免试剂盒，(以上试剂盒均有北京北方生物研究所生产)，总胆红素试剂试剂盒，丙氨酸转换酶试剂盒，天冬氨酸转氨酶试剂盒，(以上试剂盒均由上海罗氏制药有限公司生产)

2方法

21动物分组及给药

211动物分组：随机抽取40只SD大鼠，随机分成Ⅰ、Ⅱ两组，Ⅰ组为空白对照组10只。Ⅱ组为血瘀证肝纤维化造模组30只。

212具体动物造模方法及给药：以10mg/kg体重的剂量腹腔注射05%二甲基亚硝胺（生理盐水配置），每天1次，每周连续注射3天，共九周；并于第2周开始于尾静脉缓慢注射去甲肾上腺素（用生理盐水配制成01g/L的浓度），用量01ml/100g体重，每日1次，连续8周。并于开始造模后8天从尾静脉注射小牛血清白蛋白（用生理盐水配制成50g/L的浓度），025ml/100g体重。

喂养时，大鼠仅供给加入酒精的饮水作为饮料（含20%浓度的酒精），并使用高脂低蛋白饲料（以玉米面为饲料，加入05%的胆固醇。实验前3周在饲料中加入20%的猪油）进行喂养。

22观察项目及指标

221血清学检测：第九周处死大鼠，腹主动脉取血，进行相关血清学指标的检测。用SYNCHRONLX20全自动生化分析仪测定血清谷丙氨酸转换酶（ALT）、谷草氨基酸转换酶（AST）和胆红素(TBIL)含量。用放射免疫法检测HA、LN、CIV含量。

222证侯观察：皮毛色泽、眼球颜色、尾部瘀斑、粪便性状、舌质、舌象的改变。

23统计学分析：采用SPSS110统计软件,组间比较用方差分析。

3结果

31血清学检测结果，见表1，见表2。

4讨论

研究血清肝纤维化指标用于肝纤维化的诊断，是近年医学界颇为关注的热门课题之一。但有些指标因并非肝纤维化所特有，尤其是单项指标的升高，很难作出慢性肝病肝纤维化的准确诊断。有些学者主张2～3项指标联合检测，有提高诊断的可靠性。但因研究的指标不统一，缺乏可比性。我们通过检测具有代表性的ALT、TBIL、AST、HA、LN、CIV六项指标的改变以及不同阶段证侯的变化，以期找出对血瘀证肝纤维化诊断更有价值的组合指标。

本研究利用SD大鼠接受腹腔注射二甲基亚硝胺、尾静脉注射小牛血清白蛋白、去甲肾上腺素，此法是一种复合多因素制作病证结合动物模型的新方法，该法建立了气滞血瘀证模型；并喂养加入酒精的饮水与高脂低蛋白饲料，此法是为了模仿中医血瘀证的病机，酒精和高脂饲料喂养，可使实验动物的饮食失节而达到减少其生气之源、引起其气虚血瘀的目的，这种以用药为干预，以饮食为主的方法构建血瘀证肝纤维化大鼠模型。

在模型构建的过程中我们动态观察得到不同阶段血瘀证证侯从轻到重的加剧变化以及血清学指标的变化，其中AST、ALT的升高是急慢性肝细胞损害的共同表现，而TBIL、HA、LN、CIV四项指标的升高与纤维化程度呈正关系；证侯的动态观察是与中医学中的“辨证论治”，的理论相符。

凭用药与饮食改变的造模方法，成功地复制了血瘀型肝纤维化大鼠病证结合动物模型，从大鼠证侯及血清学改变两方面，证明了血瘀型肝纤维化病证结合动物模型的复制成功，模型具有现代医学肝纤维化的血清学特征，同时又具有中医血瘀证的特征，为中西医结合研究肝纤维化提供了新的研究途径。

参考文献

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