导读:本文包含了六聚组氨酸论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:组氨酸,层析,亲和,金属,蛋白,天冬,微粒。
六聚组氨酸论文文献综述
李淑娟,牛育鸿[1]（2010）在《金磁微粒介导的抗六聚组氨酸多克隆抗体的纯化》一文中研究指出制备了抗六聚组氨酸(6×Histidine,6×His)多克隆抗体,以金磁微粒为载体对其进行纯化得到了高纯度的抗6×His抗体.首先以EDC法制备出六聚组氨酸-血蓝蛋白(6×His-KLH)抗原并免疫家兔,得到的抗血清经初步纯化,采用ELISA法测定其效价;为去除多克隆抗体中抗KLH抗体,将表面固定有KLH的金磁微粒(金磁微粒-KLH)与多克隆抗体反应,抗KLH抗体通过抗原抗体反应被吸附在金磁微粒表面,磁性分离取上清,利用ELISA法对去除前后抗6×His及抗KLH抗体的效价进行测定,确定出最佳去除条件.实验表明,初步纯化的多克隆抗体中抗6×His抗体效价可达1∶20 000;金磁微粒表面KLH固定化容量可达700μg/mg,当金磁微粒表面KLH与多克隆抗体质量比为50∶3时,金磁微粒-KLH可有效地去除多克隆抗体中抗KLH抗体,去除效果较好,说明所采用的方法成功制备出了高效价的抗6×His多克隆抗体;金磁微粒-KLH可特异性去除多克隆抗体中抗KLH抗体,得到高纯度的抗6×His的抗体,为研究6×His融合蛋白纯化检测奠定了基础.(本文来源于《陕西科技大学学报(自然科学版)》期刊2010年05期）
杨柳[2]（2008）在《钴螯合亲和介质的制备及其在六聚组氨酸融合蛋白纯化中的应用》一文中研究指出金属螯合亲和层析(Metal Chelate Affinity Chromatographic,MCAC),又称固定金属离子亲和层析(Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography,IMAC),是一种选择性好、操作简单的蛋白质分离方法。共价固定于高分子微球表面的配基与Ni~(2+),Co~(2+)等过渡金属离子形成配位数未饱和的螯合物,基因工程表达的六聚组氨酸融合蛋白可通过其组氨酸标签与螯合物通过配位作用结合,因此,金属离子螯合物已被广泛用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化。螯合有Ni~(2+),Ci~(2+)的磁性复合微粒也成为新的研究热点。本研究以琼脂糖微球(AgaroseCL-6B)和二氧化硅磁性微球为载体,分别合成了表面载有钴离子-羧甲基天冬氨酸螯合物的金属螯合亲和介质,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究,具体内容如下:1.以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸为螯合配基制备载有Co~(2+)的金属螯合亲和层析介质Agarose-CM-Asp-Co,建立了变性和非变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白较大规模的纯化体系。将该纯化介质与镍螯合羧甲基天冬氨酸琼脂糖微球(Agarose-CM-Asp-Ni),商品化(Qiagen公司)镍螯合次氨基叁乙酸琼脂糖微球(Ni-NTA-Agarose)的性能进行了比较研究。以Bradford法对蛋白质的最大纯化量进行测定,以SDS-PAGE对纯化得到目的蛋白的纯度进行鉴定。结果表明,Agarose-CM-Asp-Co亲和层析介质在非变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白DXS的最佳孵育时间为15min,最大纯化量约为14.8mg/mL。在变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白CD155D1的最佳孵育时间为20min,最大纯化量约为7.6mg/mL。与螯合镍的配合物相比,该纯化介质具有结合容量大,选择性高等优点。2.以二氧化硅磁性微粒为载体,羧甲基天冬氨酸为配基制备螯合有Co~(2+)的磁性复合微粒Affimag-CM-Asp-Co,并将其用于小规模六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。优化了500μL细胞裂解液中六聚组氨酸融合蛋白纯化所需磁粒用量,Affimag-CM-Asp-Co与细胞裂解液的孵育时间,纯化缓冲液体系等条件。结果表明:对500μL细胞裂解液纯化体系,Affimag-CM-Asp-Co的优选用量为1mg,最佳孵育时间为10min。以Bradford法对蛋白质进行测定,Affimag-CM-Asp-Co在非变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白DXS的纯化量为9.4μg/mg。与柱层析法相比,基于Affimag-CM-Asp-Co的六聚组氨酸融合蛋白纯化方法操作简便,耗时短,得到的目的蛋白纯度高。(本文来源于《西北大学》期刊2008-06-30）
张培因,王燕媚,卫红飞,王爱丽,于永利[3]（2008）在《金属鳌合亲和层析填料的制备及其在重组六聚组氨酸融合蛋白中的应用》一文中研究指出目的:制备Ni2+螯合金属层析填料,分离HSP65-MUC1-histag基因工程蛋白质。方法:应用Sepharose4B作为载体,亚氨基二乙酸(IDA)为起始材料合成金属鳌合层析填料,同时应用5-Br-PADAP一阶导数光度法对Ni2+的吸收峰进行鉴定和定量。最后应用制备的Ni2+-Sepharose4B纯化HSP65-MUC1-histag。结果:Ni2+最佳吸收峰为574nm,凝胶中螯合的Ni2+为5.2mg.g-1,Ni2+-Sepharose4B金属螯合亲和层析纯化重组蛋白纯度≥98%,回收率≥90%。结论:制备了能应用于蛋白质亲和层析的高效金属鳌合层析填料。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2008年02期）
李淑娟,孙永亮,胡道道,陈超,崔亚丽[4]（2007）在《金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究》一文中研究指出以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明:对200μL细胞裂解液纯化体系,Co-CM-Asp-Sepharose(50%悬浮液)的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL(50%悬浮液)对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点。(本文来源于《生物工程学报》期刊2007年05期）
孙永亮[5]（2007）在《金属螯合亲和色谱填料的制备及其在六聚组氨酸融合蛋白分离中的应用》一文中研究指出近年来，随着基因工程技术的发展，分离纯化基因重组蛋白的下游技术越来越显示出其重要性。从成分复杂的表达体系中分离纯化目的蛋白是一项艰巨而繁重的任务。目前基于分子的尺寸、形状、电荷、分子量、吸附等性质的差异进行蛋白质分离的方法也已在蛋白质纯化中得到不同程度的应用，而金属螯合亲和层析法(Metal Chelate Affinity Chromatographic，MCAC.又叫固定金属离子亲和层析法Immobilized Metal ion Affinity Chromatography，IMAC)以其分辨率高、选择性好、操作简单而成为一种重要的蛋白质分离方法。研究表明，影响金属螯合亲和色谱分离效果的因素很多，如溶液的pH值、盐浓度、洗脱方式等，但决定色谱填料分离效果的主要因素在于填料的基质、配基及螯合金属离子种类。琼脂糖(Agarose)具有良好的亲水性和稳定性，与可溶性蛋白的非特异性反应小。作为填料基质既可在非变性条件下使用，又可在变性条件(如6mol／L盐酸胍或8mol／L尿素)下使用。本实验用琼脂糖作为基质，选用四配位，与金属离子有较强作用力的羧甲基天冬氨酸为配基，以Co~(2+)、Ni~(2+)作为螯合金属离子，合成了一系列金属螯合亲和色谱填料，并对其蛋白质分离性能进行了研究。论文主要工作为以下几个方面：1．以琼脂糖(商品名SepharoseCl-6B)为基质，环氧氯丙烷为交连剂，以羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为配基制备了分别螯合Co~(2+)和Ni~(2+)的两种色谱介质：Agarose-CM-Asp-Co、Agarose-CM-Asp-Ni。对琼脂糖基质和Agarose-CM-Asp-Co、Agarose-CM-Asp-Ni的红外光谱表征结果表明：Co~(2+)、Ni~(2+)已经分别成功地螯合到被修饰的琼脂糖微球上。琼脂糖基质与Agarose-CM-Asp-Ni微球的电镜照片对比结果显示：介质表面光滑，说明在实验过程中没有引起微球形貌的变化，即在实验过程中没有产生能引起非特异性吸附的因素。用这两种介质对六聚组氨酸融合蛋白进行了分离，对目标蛋白的洗脱液做了SDS-PAGE分析，结果表明：两者都取得了良好的分离效果，并且Agarose-CM-Asp-Co分离效果最佳。2．以琼脂糖为基质，环氧氯丙烷为交联剂，制备了一系列不同羧甲基天冬氨酸担载量的介质微球：Agarose-0.5CM-Asp、Agarose-CM-Asp、Agarose-2CM-Asp。对其进行了滴定分析，测得各自的配基数目依次分别为：3.34×10~(-5)、3.83×10~(-5)、4.14×10~(-5)mol／L。结果表明：虽然配基CM-Asp的加入量成倍增加，但琼脂糖表面所能担载的配基CM-Asp的量增幅不大，说明在本实验条件下配基CM-Asp的螯合量已基本饱和。对上述叁种不同CM-Asp担载量所制备螯合金属离子样品进行湿法硝解，通过原子吸收测定金属离子担载量，其结果也支持了上述观点。用上述叁种不同CM-Asp担载量的微球所制备的金属离子Co~(2+)、Ni~(2+)螯合材料做六聚组氨酸融合蛋白分离，结果显示，金属离子螯合量的变化只影响到色谱介质的蛋白质吸附量，而对分离纯度没有明显影响。3．优化了对200μL细胞裂解液纯化所需的Agarose-CM-Asp-Co的介质用量、Agarose-CM-Asp-Co与细胞裂解液的孵育时间、介质的清洗条件、目标蛋白洗脱时所需咪唑浓度等条件。比较了Agarose-CM-Asp-Co与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司产品)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果。结果表明：针对200μL细胞裂解液的纯化体系，优选Co-CM-Asp-Sepharose(50％的悬浮液)的体积为60μL，最佳孵育时间为30min，洗脱时最佳咪唑浓度为200mM。与商品化的Ni-NTA-Agarose介质相比，清洗条件简单，介质选择性好，洗脱得到的靶蛋白纯度高。且本研究所得到的分离介质Agarose-CM-Asp-Co的分离性能优于与Qiagen公司产品Ni-NTA-Agarose。(本文来源于《陕西师范大学》期刊2007-05-01）
李淑娟[6]（2007）在《六聚组氨酸融合蛋白纯化方法研究》一文中研究指出六聚组氨酸(6xHis)是一种融合蛋白纯化和检测的常用标签，基于组氨酸与Ni~(2+)螯合作用，Ni-NTA(次氨基叁乙酸)、Ni-IDA(亚氨基二乙酸)树脂已被广泛用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化。以羧甲基天冬氨酸(CM-ASP)为螯合配基的Co~(2+)螯合物对六聚组氨酸融合蛋白纯化具有选择性高、金属离子不易脱落等特点。此外，通过抗6xHis抗体纯化六聚组氨酸融合蛋白的方法受到了很多关注。本论文就六聚组氨酸融合蛋白的纯化开展了较为系统的研究，内容包括两个方面：(1)合成了载有羧甲基天冬氨酸钴离子螯合物的树脂并建立了六聚组氨酸融合蛋白的纯化方法。(2)制备了抗6xHis多克隆抗体，并初步将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化。以Sepharose CL-6B为载体，环氧氯丙烷为活化剂，羧甲基天冬氨酸为螯合配基制备载有Co~(2+)的固定化金属螯合亲和层析介质(Co-CM-Asp-Sepharose)，将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。优化了200μL细胞裂解液中六聚组氨酸融合蛋白纯化所需介质用量，Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间，介质清洗溶液及靶蛋白洗脱液咪唑浓度等条件。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与商品化Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果。开展了从5mL细胞裂解液中纯化六聚组氨酸融合蛋白CD155D1的研究，并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1的纯化量。结果表明：对200μL细胞裂解液纯化体系，Co-CM-Asp-Sepharose(50％悬浮液)的优选体积为60μL，最佳孵育时间为30min，洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol／L。介质用量放大为1.5mL(50％悬浮液)从5mL细胞裂解液中纯化CD155D1可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比，载有Co~(2+)的固定化金属螯合亲和层析介质具有选择性好，清洗条件简单，得到的靶蛋白纯度高等优点。以碳二亚胺(EDC)介导，将6xHis与载体匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为免疫原免疫新西兰兔，所得抗血清经饱和硫酸铵沉淀，得到纯度高的抗6xHis多克隆抗体。将多抗通过共价作用固定于氨基末端磁性微粒表面，以磁性微粒为载体通过免疫亲和原理对六聚组氨酸融合蛋白CD155D1的纯化进行了初步研究，结果表明抗6xHis多克隆抗体可用于六聚组氨酸融合蛋白纯化，但效率较低。除去多克隆抗体中针对载体蛋白的抗体是提高纯化效率的一个关键环节，为此，通过免疫亲和法以表面固定KLH的金磁微粒去除多克隆抗体中抗KLH抗体，得到了纯度更高的针对6xHis的抗体，为下一步系统研究6xHiS融合蛋白纯化奠定基础。(本文来源于《西北大学》期刊2007-05-01）
许艳,万敏,张培因,卫红飞,王丽颖[7]（2004）在《六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响》一文中研究指出目的研究六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响。方法采用PCR法扩增目的基因,克隆人pMD18-T载体后进行序列测定。构建原核表达载体pET28-His-Cpn10-IL4与pET28-Cpn10-His-IL-4,在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达两种在不同位置带有六聚组氨酸(His-tag)的重组白细胞介素4(rhIL-4)融合蛋白。用SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达产物,采用镍亲和层析的方法纯化两种重组融合蛋白。结果Western印迹证实两种融合蛋白均可与抗组氨酸单克隆抗体特异性结合,但用镍亲和层析方法可以很好地分离纯化融合蛋白His-Cpn10-IL-4,却不能纯化融合蛋白Cpn10-His-IL-4。结论应用镍亲和层析的方法纯化融合蛋白时,His-tag在融合蛋白中的位置对蛋白质的纯化非常重要,His-tag可以在融合蛋白的N端和C端,但不能在中间。(本文来源于《医学分子生物学杂志》期刊2004年02期）
六聚组氨酸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
金属螯合亲和层析(Metal Chelate Affinity Chromatographic,MCAC),又称固定金属离子亲和层析(Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography,IMAC),是一种选择性好、操作简单的蛋白质分离方法。共价固定于高分子微球表面的配基与Ni~(2+),Co~(2+)等过渡金属离子形成配位数未饱和的螯合物,基因工程表达的六聚组氨酸融合蛋白可通过其组氨酸标签与螯合物通过配位作用结合,因此,金属离子螯合物已被广泛用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化。螯合有Ni~(2+),Ci~(2+)的磁性复合微粒也成为新的研究热点。本研究以琼脂糖微球(AgaroseCL-6B)和二氧化硅磁性微球为载体,分别合成了表面载有钴离子-羧甲基天冬氨酸螯合物的金属螯合亲和介质,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究,具体内容如下:1.以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸为螯合配基制备载有Co~(2+)的金属螯合亲和层析介质Agarose-CM-Asp-Co,建立了变性和非变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白较大规模的纯化体系。将该纯化介质与镍螯合羧甲基天冬氨酸琼脂糖微球(Agarose-CM-Asp-Ni),商品化(Qiagen公司)镍螯合次氨基叁乙酸琼脂糖微球(Ni-NTA-Agarose)的性能进行了比较研究。以Bradford法对蛋白质的最大纯化量进行测定,以SDS-PAGE对纯化得到目的蛋白的纯度进行鉴定。结果表明,Agarose-CM-Asp-Co亲和层析介质在非变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白DXS的最佳孵育时间为15min,最大纯化量约为14.8mg/mL。在变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白CD155D1的最佳孵育时间为20min,最大纯化量约为7.6mg/mL。与螯合镍的配合物相比,该纯化介质具有结合容量大,选择性高等优点。2.以二氧化硅磁性微粒为载体,羧甲基天冬氨酸为配基制备螯合有Co~(2+)的磁性复合微粒Affimag-CM-Asp-Co,并将其用于小规模六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。优化了500μL细胞裂解液中六聚组氨酸融合蛋白纯化所需磁粒用量,Affimag-CM-Asp-Co与细胞裂解液的孵育时间,纯化缓冲液体系等条件。结果表明:对500μL细胞裂解液纯化体系,Affimag-CM-Asp-Co的优选用量为1mg,最佳孵育时间为10min。以Bradford法对蛋白质进行测定,Affimag-CM-Asp-Co在非变性条件下对六聚组氨酸融合蛋白DXS的纯化量为9.4μg/mg。与柱层析法相比,基于Affimag-CM-Asp-Co的六聚组氨酸融合蛋白纯化方法操作简便,耗时短,得到的目的蛋白纯度高。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
六聚组氨酸论文参考文献
[1].李淑娟,牛育鸿.金磁微粒介导的抗六聚组氨酸多克隆抗体的纯化[J].陕西科技大学学报(自然科学版).2010
[2].杨柳.钴螯合亲和介质的制备及其在六聚组氨酸融合蛋白纯化中的应用[D].西北大学.2008
[3].张培因,王燕媚,卫红飞,王爱丽,于永利.金属鳌合亲和层析填料的制备及其在重组六聚组氨酸融合蛋白中的应用[J].吉林大学学报(医学版).2008
[4].李淑娟,孙永亮,胡道道,陈超,崔亚丽.金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究[J].生物工程学报.2007
[5].孙永亮.金属螯合亲和色谱填料的制备及其在六聚组氨酸融合蛋白分离中的应用[D].陕西师范大学.2007
[6].李淑娟.六聚组氨酸融合蛋白纯化方法研究[D].西北大学.2007
[7].许艳,万敏,张培因,卫红飞,王丽颖.六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响[J].医学分子生物学杂志.2004
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