赵锐, 官大威, 路斌, 韩阳, 侯震寰[1]2004年在《小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究》文中提出目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内的表达及其变化规律。方法在小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和非切创的小鼠作为对照。结果对照组可见表皮层、毛囊、皮脂腺表达iN-OS和eNOS,血管内皮可见eNOS的轻微染色。实验组观察损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤
赵锐, 官大威, 路斌, 韩阳, 侯震寰[2]2005年在《小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究》文中指出目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和无切创的小鼠作为对照。结果损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤组织中可见少量的多型核细胞表达iNOS和eNOS,伤后6～24h,大部分浸润的中性粒细胞和单核细胞为iNOS和eNOS阳性。随着时间的延长,iNOS和eNOS阳性细胞以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后3hiNOS的阳性细胞比率较低,6h～1d持续性增加并于1d达到最高峰,3～7d维持在一个相对稳定的水平直至伤后10d再次达高峰,10～14d开始下降。eNOS的阳性细胞率在伤后1～3h表达较低,6h～3d持续性增高,并在3d达到最高峰,在其后的5d内保持稳定表达,之后开始下降。而且损伤区及损伤周边区、特别是肉芽组织内的新生血管可见iNOS和eNOS不同强度的表达。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内多型核细胞、单核细胞和成纤维细胞中表达,其时序性变化可望用于皮肤损伤时间的推断。
赵锐[3]2004年在《小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究》文中指出前言 皮肤切创愈合是机体保持组织完整性而产生的一个有组织的、连续而复杂的过程,大致分为叁个阶段,即炎症期、纤维增生期和组织重建期,有多种炎症细胞和生物化学介质参与皮肤切创愈合的全过程,从而清除损伤、坏死的皮肤组织和入侵的病原体并重建损伤组织。 NO是由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)合成的一种弥漫性的细胞内信号分子,具有广泛的生物学作用。NOS是由不同染色体上的不同基因编码的,可分为结构型NOS(constitutive NOS,cNOS)和诱导性NOS(inducible NOS,iNOS),前者可分为神经型NOS(neuronal NOS,nNOS)和内皮型NOS(endothelial NOS,eNOS)。研究表明在皮肤损伤愈合过程中NO发挥重要作用,在皮肤损伤愈合过程中炎症介导、细胞增殖、分化、凋亡及血管形成、基质沉积和损伤后组织重构中发挥重要作用。因此皮肤切创愈合过程中,组织细胞中产生NO的两种关键酶iNOS和eNOS的动态表达,可间接反映组织中NO的生成量及其发挥的生物学作用。 本实验应用免疫组织化学染色技术对皮肤切创愈合过程中产生NO的两种关键酶—诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶的表达情况进行了研究,以推断NOS及其合成的NO在皮肤损伤愈合过程中的生物学功能,并对NOS在皮肤损伤愈合过程中随时间表达的变化特点在推断损伤时间中的可应用性进行了探讨。 材料和方法 动物模型的建立及分组:健康成年清洁级昆明系小鼠36只,雌雄不限,体重35～40g,随机分为12组,每组3只,其中1组为正常对照组。1%戊巴比妥钠30mg/kg剂量腹腔麻醉,剪毛处理,常规手术消毒,在背部中央做一
裴明[4]2009年在《大鼠皮肤、骨骼肌挫伤后ICAM-1 mRNA表达与损伤时间的研究》文中研究指明目的:应用荧光原位杂交(FISH)技术检测大鼠皮肤和骨骼肌挫伤后皮肤、肌肉组织中细胞间黏附因子-1(ICAM-1)mRNA的时序性表达规律,探讨这种基因mRNA表达在损伤时间推断中的可行性,旨为法医实践中推断早期皮肤和肌肉损伤时间提供科学的实验依据。方法:选取健康成年SD大鼠48只,随机分为对照组(6只)和实验组(42只)。均实施麻醉、褪毛后,实验组大鼠采用自由落体打击法于右后肢股四头肌部位造成皮肤、肌肉挫伤模型,损伤后0.5h、1h、6h、12h、18h、24h、30h七个时间点(每个时间点6只)取挫伤处皮肤及肌肉组织各30mg,置于液氮中保存备用;对照组大鼠未打击造伤,其余处理与实验组相同。检材冰冻切片后进行荧光原位杂交,激光共聚焦显微镜观察、拍照,采用Image-pro plus进行图像分析。对照组与各损伤组数据的处理采用SSPS10.0统计软件进行方差分析和SNK检验。结果:大鼠皮肤和骨骼肌挫伤后ICAM-1 mRNA在皮肤组织中的表达0.5h达到峰值,24h下降至正常对照组的2.25倍随后继续升高;在肌肉组织中于损伤后0.5h表达显着增强,6h达到峰值,18h降至最低后再次升高。结论:大鼠皮肤、骨骼肌挫伤后皮肤和肌肉组织中ICAM-1 mRNA表达随着损伤时间呈规律性变化,可望用于法医学鉴定及早期法医学损伤时间推断。荧光原位杂交技术是一种分子细胞遗传学技术,敏感而且准确,适合法医学研究及检案的需要。
刘杨, 王英元[5]2007年在《蛋白因子与皮肤损伤时间的相关性研究》文中提出皮肤创伤愈合是一个复杂的过程,黏附分子、细胞因子等蛋白因子在该过程中发挥重要作用,常随损伤时间的延长呈现规律性表达。对这些蛋白因子在皮肤损伤后的表达变化进行深入研究,可以为法医学皮肤损伤时间推断以及临床皮肤损伤的修复提供新思路。本文对黏附分子、细胞因子等蛋白因子应用于皮肤损伤时间推断研究的国内外研究现状进行了综述,以供今后检案及研究借鉴。
李媛[6]2014年在《糖尿病慢性皮肤溃疡阴证模型建立与回阳生肌膏对糖尿病阴证溃疡创面不同时相的影响》文中研究指明目的制备符合临床阴证模型的糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠模型,观察回阳生肌膏及其拆方对糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡不同时相炎症因子影响以及相关促愈因子mRNA表达含量的影响,探讨回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡促愈的作用机制。方法150只SD雄性大鼠,随机分为5组：分别分为皮肤缺损组(QS组：剪皮),糖尿病组(DM组：STZ+剪皮),糖尿病加金黄色葡萄球菌组(DMJJ组：STZ+剪皮+金葡菌),糖尿病加激素组(DMJS组：STZ+剪皮+激素注射),糖尿病加激素加异物组(DMYW组：STZ+剪皮+激素注射+异物埋置)五组,制备皮肤溃疡,不给予药物治疗,观察造模后大鼠一般情况,每日称量体重、观察疮面情况、测量创面面积,比较各组愈合情况,观察新生肉芽组织病理形态。2156只大鼠随机抽取6只做为空白对照组(空白组),不做任何处理,余下大鼠造糖尿病模型2w后随机分为5组：1d、3d.5d.7d.14d处理组,处理组内分为皮肤缺损组(缺损组：凡士林纱条),模型对照组(模型组：凡士林纱条),回阳生肌膏组(全方组：回阳生肌膏全方纱条)、温阳益气拆方组(益气组：温阳益气拆方纱条)、活血生肌拆方组(活血组：活血生肌拆方纱条)。缺损组采用皮肤缺损法,其他组采用“注射STZ-激素干预-皮肤缺损-异物埋置”复合因素制备慢性皮肤溃疡模型。各给药组给予相应药膏纱条,在给药的相应时间点处理大鼠,无菌条件下取血清及创面处肉芽组织,用酶联免疫法(ELISA)检测给药1d、3d、5d、7d、14d血清中白细胞介素-1(IL-1)和TXB2含量,3造模方法同上,用酶联免疫法(ELISA)及RT-PCR法检测给药3d、7d、14d血清中及肉芽组织内eNOS的基因表达情况。结果1采用“注射STZ-激素干预-皮肤缺损-异物埋置”复合因素造模方法与其他造模法相比,能显着延长创面愈合时间,并使创面表现为创面光白板亮、分泌物清稀如水,创面处肉芽组织色白或淡而无光泽,全身状态表现为体重增长不明显,蜷缩、尾冷,多尿,少食,大便稀溏、腥臭等阳虚症状。HE染色显示：QS组大鼠新生皮肤组织结构完整,层次清晰,新生表皮上有角质层分布,胶原纤维细胞粗大分布不规则,真皮层内有新生大小血管分布；DM组有单层表皮细胞生成,真皮层内有较细新生胶原纤维和大量炎症细胞,无新生血管形成；DMJJ组有多层新生表皮细胞规则分布,组织内有组织液、血浆凝固成分及炎症细胞浸润,有少量血管生成；DMJS组真皮边缘无表皮生成,组织内有少量炎症细胞及组织液浸润,无血管生成；DMYW组未见表皮生成,无炎症细胞浸润,无任何愈合倾向。Masson染色显示：光镜下蓝色显示胶原纤维,QS组胶原纤维粗长,密布且规则排列；DM组胶原纤维较粗,但比QS组少而细,围绕炎症细胞无序排列；DMJJ组胶原纤维短小,零星分布于细胞间；DMJS组胶原纤维细,多而杂乱充斥于细胞间隙中；DMYW组胶原纤维生成少,细而杂乱、散在分布。2不同时相血清中炎症因子表达,IL-1α含量,给药3d,益气组显着高于空白组和模型组(P<0.05),高于全方组和活血组(P<0.05)；给药5d,全方组显着高于空白组和模型组(P<0.05)；给药7d,各给药组显着高于空白组和模型组(P<0.05),全方组高于拆方组(P<0.05)；给药14d,模型组和活血组低于空白组(P<0.05)。TXB2含量,给药3d,正常组和全方组高于空白组(P<0.05)；给药5d,全方组高于空白组和正常组(P<0.05)；给药7d,益气组高于空白组和模型组(P<0.05),高于全方组和活血组(P<0.05)；给药14d,活血组高于空白组和模型组(P<0.05),高于全方组和益气组(P<0.05),空白组和正常组低于其他各给药组(P<0.05)。3不同时相血清中eNOS表达含量,给药3d,各组与模型组比均有统计学差异(P<0.05),益气组与空白组、正常组、全方组比有统计学差异(P<0.05),活血组与空白组、全方组比有统计学差异(P<0.05)；给药7d,模型组与各组比均有统计学差异(P<0.05),全方组与空白组、正常组及益气组比有统计学差异(P<0.05),活血组与空白组、正常组、益气组及模型组比有统计学差异(P<0.05)；给药14d,模型组与全方组、益气组、活血组比有统计学差异(P<0.05),全方组与空白组、正常组比有统计学差异(P<0.05).肉芽组织内eNOS基因表达含量,由RT-PCR结果可看出,给药3D,全方组eNOS含量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)；给药7D,各给药组eNOS含量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),正常组高于模型组和活血组,差异有统计学意义(P<0.05),益气组高于正常组、全方组和活血组,差异有统计学意义(P<0.05)；给药14D,活血组eNOS合量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1“注射STZ-激素干预-皮肤缺损-异物埋置”复合因素造模方法能使大鼠阳虚症状明显,创面愈合时间延长,创面表现出“阴证”证型特点,与临床“阴证疮疡”相似。2回阳生肌膏能适当提高大鼠血清中IL-1α及TXB2的含量,益气温阳药促进免疫抑制状态的大鼠炎症反应,活血通络药在后期促炎作用明显。3回阳生肌膏可以增加血清及肉芽组织中eNOS的表达含量,益气温阳药在给药早期对促愈因子的促表达作用明显,活血通络组在给药后期促愈作用明显。回阳生肌膏通过温阳益气药鼓动气机,使气旺血生,阳生阴长,使无形之气化为有形之物。
李刚莲[7]2009年在《大鼠皮肤MMP-2、MMP-9表达与损伤时间相关性的实验研究》文中指出目的:探讨创伤皮肤组织基质金属蛋白酶( Matrix metalloproteinase-s,MMPs)-2、9的表达与损伤时间的相关性,为损伤时间推断提供实验依据。资料和方法:建立大鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术、图像分析技术检测不同损伤时间大鼠皮肤组织生前及死后MMP-2与MMP-9表达。结果:生前伤组大鼠损伤后皮肤组织内MMP-2与MMP-9在损伤区及损伤区周围皮肤组织中的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。死后伤组皮肤组织中MMP-2与MMP-9的表达与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。生前伤组中MMP-2在损伤后0.5 h可见在中性粒细胞中阳性表达,随时间进展表达逐渐增强,12 h后明显增多,3 d达到高峰,第5 d后在炎细胞中表达减少,同时在成纤维细胞中有阳性表达, 12～14 d恢复正常。MMP-9在损伤后1 h可见在中性粒细胞中阳性表达,随时间进展表达逐渐增强, 12 h后明显增多,3 d达到高峰,第5 d后在炎细胞中表达减少,同时在成纤维细胞中有阳性表达, 12～14 d恢复正常。结论: MMPs在创伤修复中表达活跃而成为活体伤中的一种生活反应迹象,为法医学推断损伤时间提供新的可能的参考指标;皮肤损伤组织中MMP-2与MMP-9的表达具有规律性且有良好的时间相关性,MMP-2、MMP-9可望成为法医学损伤时间推断的指标。
杨通印[8]2008年在《窒息死大鼠脑组织iNOS的表达及法医学意义》文中研究指明背景及目的:机械性窒息死是凶杀案件中最多见的死因之一,大多数案件可通过现场勘验、尸体内外部征像可确定机械性窒息死。但少数案件现场遭受破坏或痕迹不清,尸体内外部无特异征象,难以判定为机械性窒息死。根据机械性窒息的机制,脑是受到损伤最为严重的内部器官,且死后脑组织完整不易受到破坏。检测某些物质在机械性窒息死脑组织中的特异性变化,为推断机械性窒息死提供一定科学依据。iNOS是一氧化氮合酶的一种亚型,在生理状态下不表达或微量表达;当机体受到炎症、缺血缺氧、损伤、紫外线等刺激后,能在相应病变的组织或器官大量表达,并呈一定的时间规律性。本实验主要研究大鼠窒息死组与其它死亡组脑组织中iNOS的表达规律,并探讨其在机械性窒息死因推断上的法医学意义。方法:1、动物模型:实验动物来源于重庆医科大学动物实验中心饲养的健康清洁的SD大鼠80只,按照随机的原则将大鼠分为机械性窒息死亡组、失血性休克死亡组、脑挫裂伤死亡组及断颈死亡组。大鼠颈部放入尼龙绳的活套内,背对活结,依靠大鼠自身重量使活套拉紧,造成颈部压迫窒息死亡模型;用10g砝码从20CM高度,在导管内自由落体垂直打击硬脑膜,建立脑挫裂伤死亡模型;分离出双侧颈动脉,剪断放血至休克死亡模型;用一手拇指和食指用力往下按住鼠头,另一只手抓住鼠尾,用力向后上方拉动,造成脊髓横断致断颈死亡模型;2、取材:在各组死后不同时间点在大脑中部作横切面切取0.4CM脑组织;3、对所取材脑组织石蜡切片进行HE染色光镜观察;4、采用免疫组织化学染色法进行iNOS染色;5、使用SPSS 13.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果:各组0h的染色和同组各时段相比阳性染色稍底,同一组染色结果在(6h、12h、24h)各时间点上没有显着染色差别,机械性窒息死亡组在大脑灰质神经元胞浆内染色深,呈明显棕黄色,基本上累及整个视野所有神经元的胞浆与失血性休克死亡组和脑挫裂伤死亡组及断颈死亡组有显着染色差别;失血性休克死亡组和脑挫裂伤死亡组神经元胞浆内染色较深,在整个视野中大部分的神经元胞浆受累及,两组间无明显染色差别;断颈处死亡组未见明显染色,偶见个别神经元胞浆内有浅谈染色。结论:大鼠机械性窒息死后iNOS特异性的高表达具有一定的规律性,死后6h、12h、24h,iNOS的表达趋于同一水平且都比死后0h,iNOS表达水平高。机械性窒息死后各时间点iNOS表达水平明显高于其它各死亡组死后各时间点iNOS表达水平。因此,iNOS可作为法医学者诊断窒息死的一个辅助指标。
参考文献：
[1]. 小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究[C]. 赵锐, 官大威, 路斌, 韩阳, 侯震寰. 全国第七次法医学术交流会论文摘要集. 2004
[2]. 小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究[J]. 赵锐, 官大威, 路斌, 韩阳, 侯震寰. 法医学杂志. 2005
[3]. 小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究[D]. 赵锐. 中国医科大学. 2004
[4]. 大鼠皮肤、骨骼肌挫伤后ICAM-1 mRNA表达与损伤时间的研究[D]. 裴明. 山西医科大学. 2009
[5]. 蛋白因子与皮肤损伤时间的相关性研究[J]. 刘杨, 王英元. 中国法医学杂志. 2007
[6]. 糖尿病慢性皮肤溃疡阴证模型建立与回阳生肌膏对糖尿病阴证溃疡创面不同时相的影响[D]. 李媛. 北京中医药大学. 2014
[7]. 大鼠皮肤MMP-2、MMP-9表达与损伤时间相关性的实验研究[D]. 李刚莲. 重庆医科大学. 2009
[8]. 窒息死大鼠脑组织iNOS的表达及法医学意义[D]. 杨通印. 重庆医科大学. 2008