孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响

孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响

李丹, 王莉芬, 范成明, 王化丽, 姜继勇[1]2005年在《孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响》文中认为目的:探讨间质细胞是否参与了孕激素对子宫内膜腺上皮的调控,及其初步的作用机制。方法:将增生期子宫内膜间质细胞经激素处理后进行培养,提取培养液。用浓度为30%的提取培养液对腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入孕酮或孕雌激素培养4h、24h。提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测腺上皮细胞HOXA11基因表达量。结果:当内膜腺上皮细胞中含有30%经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕、雌激素后其HOXA11基因,在培养4h时表达量有下降趋势;24h时,表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30%经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕、雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在4h时消失;24h时,转为正调控(HOXA11基因表达量增加)。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要问质细胞分泌的孕激素依赖因子的参与,而且由间质细胞和内膜腺上皮中的孕激素受体共同介导完成这一负调控作用。

李丹[2]2004年在《孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响》文中提出同源框基因(homeobox gene)在脊椎动物胚胎发育中,具有控制体节特征和确定胚胎前后分化关系等作用。同源框基因是一类控制胚胎发育和细胞分化的调节基因,其表达的蛋白质为同源域蛋白,是一类转录调节因子。这类基因中都存在一个由183个碱基对(bp)组成的、高度保守的同源框(homeobox)序列。HOX基因是同源框基因中的一大类,它们表达的蛋白产物,参与调节胚胎发育和细胞分化。HOXA11基因是HOX基因家族中的一员,主要参与子宫形态的发生和发育的调控。近年来研究发现,同源框基因HOXA11在人子宫内膜的发育及孕卵着床过程中起着重要作用,而且在人子宫内膜中的表达呈周期性变化。卵巢性激素与HOXA11基因表达的关系是近年来HOX基因在生殖领域中的研究热点。目前认为HOX基因是性激素对子宫调节链中的重要介导基因,雌、孕激素对内膜的多种调节作用主要通过HOX基因介导完成;HOX基因的异常表达与多种妇科疾病(不孕、流产、内膜异位及肿瘤等)相关。因此,阐明HOX基因在子宫内膜中的表达规律,以及卵巢激素对其表达的调控机制具有非常重要意义。已有的研究表明:在体内,孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的表达起负调控作用;而体外研究发现,当上皮细胞与间质细胞分离培养时,孕激素并不能使上皮细胞HOXA11基因表达量下降,而是使其表达量增加。孕激素的作用效应大多通过孕酮受体(Progesteron receptor, PR)介导产生;RU486是一种孕酮拮抗剂,其与PR有较强的亲和力,通过竞争性地与PR结合而阻止孕酮的生物效应。本研究目的是通过体外培养实验,用半定量RT—PCR方法,研究孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响,尤其是内膜间质细胞在其中所起的作用,进一步探讨孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因表达负调控作用的机制。结果显示:当内膜腺上皮细胞中含有30﹪经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕雌激素后第4小时,其HOXA11 基因表达量有下降趋势;第24小时,腺上皮细胞HOXA11 基因表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30﹪经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在第4小时消失;第24小时,转为正调控(HOXA11 基因表达量增加)。该组上皮细胞用RU486预处理后,再加入孕激素或孕雌激素时,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组相比无差异。上述结果提示,孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要间质细胞参与,而且是间质细胞和内膜腺上皮中的PR共同介导完成这一负调控作用。目前已知,HOX基因的异常表达与多种妇科疾病(不孕、流产、内膜异位及肿瘤等)相关。本实验的这些结果为全面揭示卵巢激素对HOXA11基因的调节作用奠定研究基础,为从基因水平调节人类生育以及诊治人类生殖性疾病提供依据。

参考文献:

[1]. 孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响[J]. 李丹, 王莉芬, 范成明, 王化丽, 姜继勇. 生殖与避孕. 2005

[2]. 孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响[D]. 李丹. 大连医科大学. 2004

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