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PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路的抑制作用

2020-12-02阅读(173)

PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路的抑制作用

论文摘要

【目的】研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）M蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路的影响。【方法】克隆PEDV M基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1-Myc-PEDV-M,并转染HEK-293T细胞。采用Western bloting试验检测M蛋白的表达。通过双荧光素酶报告试验检测M蛋白对SeV诱导的干扰素通路活化的影响;通过Real-time PCR分析M蛋白对SeV诱导的IFN-β及干扰素刺激基因ISG54、ISG56、RIG-I mRNA表达的影响。通过过表达试验验证上调表达M蛋白对PEDV复制的影响。【结果】克隆了676 bp的PEDV M基因,成功构建其真核表达载体pcDNA3.1-Myc-PEDV-M,且其可在HEK-293T细胞中表达。PEDV M蛋白可抑制Ⅰ型干扰素信号通路的激活,且M蛋白对SeV诱导的Ⅰ型干扰素通路活化的抑制具有剂量依赖效应;M蛋白能够抑制IFN-β与干扰素诱导基因ISG52、ISG56、RIG-I mRNA的表达,并具有剂量依赖效应。过表达试验表明,M蛋白在抑制Ⅰ型干扰素信号通路激活的同时促进PEDV复制。【结论】PEDVM蛋白能够抑制Ⅰ型干扰素信号通路的激活,并促进PEDV复制。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材 料
  •     1.1.1 细胞、毒株和质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 PEDV M基因CDS PCR扩增
  •   1.3 真核表达质粒pcDNA3.1-Myc-PEDV-M的构建
  •   1.4 PEDV M蛋白表达的Western bloting检测
  •   1.5 PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素通路活化的影响
  •   1.6 PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素通路下游效应分子基因mRNA表达的影响
  •   1.7 过表达M蛋白对PEDV复制的影响
  • 2 结果与分析
  •   2.1 PEDV M基因CDS扩增
  •   2.2 真核表达质粒pcDNA3.1-Myc-PEDV-M的鉴定
  •   2.3 PEDV M蛋白在HEK-293T细胞中表达的检测
  •   2.4 PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素通路活化的影响
  •   2.5 PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素通路下游效应分子基因mRNA表达的影响
  •   2.6 过表达M蛋白对PEDV复制的影响
  • 3 讨 论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈盼,李莎莎,朱紫祥,郑海学,徐志文

    关键词: 猪流行性腹泻病毒,蛋白,干扰素信号通路

    来源: 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 四川农业大学动物医学院动物生物技术中心四川省重点实验室,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原学国家重点实验室口蹄疫国家参考实验室

    基金: 国家科技计划(科技支撑-子课题)(2015BAD12B00-2),四川省科技支撑计划项目(2017NZ0038,2016NYZ0052)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.13207/j.cnki.jnwafu.2019.07.006

    页码: 40-46

    总页数: 7

    文件大小: 615K

    下载量: 208

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