论文摘要
人乳头瘤病毒(HPV)感染是全世界第二大妇科恶性肿瘤——宫颈癌的主要病因。HPV52属于高危型HPV,在亚洲地区具有较高的流行率。HPV52 L1蛋白可在缺乏病毒基因组及L2蛋白时,在体外自组装成T=7的正二十面体的病毒样颗粒(VLP),VLP与天然病毒高度相似,可刺激机体产生中和抗体且其不具有传染性,是HPV疫苗的最佳候选抗原。HPV疫苗是预防HPV感染最具效益的一种途径,目前已有三种基于VLP的HPV疫苗上市,其在减少由HPV感染引起的疾病上发挥了重要的作用。安全性及有效性是疫苗在市场上流通及使用的必要前提,而疫苗制剂生产过程中的每一项处理都可能对终制剂产生影响。因而,需建立相应的质量分析方法以监测疫苗的生产过程,进一步控制疫苗终制剂的效价。免疫化学质量分析方法不仅可对病毒进行分型、鉴定VLP的构象,还可评估疫苗抗原的抗原性,但其结果的准确性主要依靠合适的单抗的使用,因而,筛选出性质良好的单克隆抗体(mAb)对构建有效的免疫化学质量分析方法至关重要。本研究利用杂交瘤技术及克隆化筛选获得25株HPV52单克隆细胞株,经腹水生产及纯化获得其单克隆抗体,对25株单抗及抗体库中的17株单抗的抗体亚型、结合活性、对五聚体的结合倾向性、构象敏感性及中和活性等性质进行检测与分析,筛选出11株优势单抗。同时,本研究发现一些化学处理(DTT、H2O2、CH2O)可能影响HPV52 VLP的结构、热稳定性及对胰酶的敏感性,利用酶联免疫吸附法(ELISA)进一步分析HPV52单抗与化学处理前后的抗原的结合差异性,可分别将42株单抗分成三个类别,并综合考虑单抗的中和活性、结合活性、血清阻断能力及对五聚体的结合倾向性,筛选出5株对具有化学敏感性的优势单抗。从上述两次筛选到的单抗中挑选合适的优质单抗构建HPV52质量分析方法:无标记表面等离子共振法、抗原溶液竞争法及双表位分析的双抗夹心ELISA法。通过优化各实验方法的条件,考察各实验方法的灵敏度及其重现性,最后成功构建了基于7株单抗的SPR检测方法、基于6株单抗的抗原溶液竞争法与双抗夹心ELISA法。此外,本研究进一步利用双抗夹心ELISA法检测热加速对HPV52疫苗原液的影响,发现将HPV52疫苗原液置于37 ℃、45 ℃中14天不影响其抗原性。本研究详细鉴定了HPV52单抗的各项理化性质,并进一步分析单抗对化学处理(DTT、H202、CH20)前后的抗原结合活性的差异性。利用筛选得到的优势单抗建立HPV52 VLP质量分析方法,并将建立的双抗夹心ELISA法初步用于HPV52 VLP原液的热稳定性分析中。本研究利用具有化学(DTT、H202、CH2O)敏感性的优势单抗构建HPV52免疫化学质量分析方法,为后续监测HPV52 VLP疫苗生产工艺提供有效的分析工具,同时,本研究也为后续其他型别HPV筛选优势单抗、构建相应的质量分析方法提供研究思路。此外,本研究建立的HPV52质量分析方法为HPV52 VLP疫苗的早期研究、工艺改良、产品上市及放行等提供了管理支持。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 蔡雅霜
导师: 夏宁邵
关键词: 重组病毒样颗粒,疫苗制剂,化学处理,单克隆抗体,疫苗质量分析方法
来源: 厦门大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 厦门大学
分类号: R392-33
总页数: 124
文件大小: 8487K
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标签：重组病毒样颗粒论文; 疫苗制剂论文; 化学处理论文; 单克隆抗体论文; 疫苗质量分析方法论文;