（1广西强寿药业集团有限责任公司；广西南宁530003，2广西康华药业有限责任公司；广西南宁530003）
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定牛至肝康胶囊中迷迭香酸的含量。方法：采用Agilent1260serierSB-C18色谱柱（5μm，4.6mm×250mm），乙腈－水（64:36）为流动相，流速为
1.0ml?min-1，柱温为室温，进样量为10μl。结果：迷迭香酸在63.04μg/ml～315.20μg/ml范
围内线性关系良好，r=0.9993，平均回收率为99.29%，RSD=0.53%。结论：该法简便、快速、专属性好，结果准确、可靠。
【关键词】迷迭香酸；牛至肝康胶囊；高效液相色谱法
牛至肝康胶囊为广西强寿药业集团有限责任公司在研新药品种，由牛至、虎杖、蓝花柴胡、
绞股蓝、柴胡、赭石、黄芪、陈皮、白术、甘草等十味中药组成，具有疏肝利胆，健脾益气，利湿解毒的作用，用于肝郁脾虚，湿毒内阻所致的急、慢性肝炎等。处方中的君药为牛至。牛至具有清热解毒、利水消肿之功效，临床上主要用于治疗痢疾、急慢性肠炎等疾患[1]。研究表明，牛至含有多种挥发油成分、乌索酸、鞣质、黄酮及黄酮甙、香豆素、聚酚等化合物[2]，且从其化学成分中可分离出迷迭香酸，含量较高，约为8.13%-15.74%，可作为本品含量测定基准物进行研究，以保证新药牛至肝康胶囊的产品质量。
1仪器与试药
美国Angilent公司1260高效液相色谱仪；AgilentZORBAXSB-C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。迷迭香酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：0840-201513），乙腈、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。牛至肝康胶囊及缺牛至的阴性对照样品为广西强寿药业集团有限责任公司自制样品。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：AgilentC18（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：乙腈－水（64:36）；流速为1.0ml/min；检测波长：273nm，柱温为室温，流速1.0ml?min-1。在上述色谱条件下，迷迭香酸与供试品中其它组分色谱峰达到基线分离，分离度良好，迷迭香酸峰理论塔板数不低于,3000，迷迭香酸及牛至肝康胶囊供试样品色谱图见图1。
2.2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的迷迭香酸对照品15.76mg，用甲醇定容于50ml棕色容量瓶中，分别精密量取2、4、5、6、8ml，定容于10ml棕色容量瓶中，制成一系列不同浓度的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备取样品适量，研细，取1.0g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加如甲醇25ml，浸泡30分钟，超声处理（功率400W，频率40kHz）30分钟，取出放冷，过滤，滤渣及滤器用甲醇适量洗涤3次，滤液及洗涤液置50ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.4线性关系考察精密吸取以上不同浓度对照品溶液各10μl进样分析，以对照品溶液浓度（X，μg/ml）为横坐标，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，的迷迭香酸的回归方程为：y=7.4924x+29.257（r=0.9993），结果表明，迷迭香酸在63.04μg/ml～315.20μmg/ml
浓度范围内时，进样量10μl与迷迭香酸峰面积对数呈良好的线性关系。
图2迷迭香酸线性关系图
2.5精密度实验精密量取对照品溶液10ul注入液相色谱仪，重复进样6次，结果迷迭香酸峰面积RSD为1.36%，表明精密度较好。
2.6稳定性实验取牛至肝康胶囊同一供试品溶液（批号150203）在室温下放置，分别于0、2、4、6、8、10、12、24h进样10ul，测定，结果供试品溶液迷迭香酸峰面积RSD为1.65%，表明供试品溶液在24小时内基本稳定，峰面积没有在考察时间内呈现下降趋势。
2.7重复性实验精密称取牛至肝康胶囊细粉6份，按“供试品溶液的制备”项下方法制成供试品溶液，并在上述色谱条件下进样10ul，测定迷迭香酸峰面积，计算含量。结果供试品中迷迭香酸含量的RSD值为1.48%，表明实验方法的重复性较好。
2.8回收率实验分别精密称取9份已知含量的牛至肝康胶囊细粉约0.5g，分别置于50ml具塞锥形瓶中。精密称取迷迭香酸对照品30.02mg置50ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。每个具塞锥形瓶分别准确加入对照品5ml和甲醇45ml，按“供试品溶液的制备”项下方法制成供试品液，在上述色谱条件下进样10ul测定，结果平均回收率为99.29%，RSD=0.53%，见表1。
2.9干扰试验取缺牛至的阴性样品，按“供试品溶液的制备”项下的方法制成阴性样品溶液，在上述色谱条件下进样10ul测定。试验结果表明，本品辅料在迷迭香酸出峰时间无吸收，证明辅料对迷迭香酸的测定无干扰，从而可保证本品测定方法的准确性。2.10样品测定精密吸取供试品溶液10ul分别注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，每样平行测定5份，计算样品中迷迭香酸的含量，结果10批样品的迷迭香酸含量为6.000mg/g-6.0901mg/g，见表2.
3讨论
3.1供试品溶液制备的选择采用甲醇直接超声提取并稀释样品后进样，样品色谱峰中，在迷迭香酸出峰时间的2倍以后未出现杂质峰，方法简便，分离效果理想。
3.2波长的选择取迷迭香酸对照品溶液，在200-400nm范围内扫描，结果在波长273nm处有最大吸收，故检测波长确定为273nm。
3.3小结本文建立的高效液相色谱法，结果较为准确，且简便、快速、专属性强、可靠。
参考文献
[1]郭雨姗等.牛至的化学成分研究.中国药学杂志，2012；47（14）：1109-1113
[2]伍睿等.牛至化学成分的研究.天然产物研究与开发，2000；12（6）：13-16