导读:本文包含了胰岛素原论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胰岛素,蛋白,糖尿病,血症,荧光,高尿酸,内质网。
胰岛素原论文文献综述
王晓红,王庆辉,杜娟,王锐[1]（2019）在《社区门诊老年2型糖尿病患者血清胰岛素原的检测及其与冠心病的相关性观察》一文中研究指出糖尿病患者合并冠心病,是非糖尿病患者的2-3倍,且并发冠心病的病程进展快~([1])。而冠心病患者约有70%血糖异常~([2])。本研究观察社区门诊中老年2型糖尿病患者合并冠心病的情况,并检测血清胰岛素原水平,探讨其与冠心病的相关性及临床意义。1材料与方法1.1诊断标准及分组2017年12月-2018年4月(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2019年10期）
邵红,杜娟,王锐,黄毅[2]（2019）在《不同浓度胰岛素原对大鼠肝脏细胞胰岛素敏感性的影响及意义》一文中研究指出高胰岛素血症和胰岛素抵抗(IR)导致2型糖尿病(T2DM)发病的分子病理学机制成为国内外研究的难点和热点。观察发现,临床应用放免法测定胰岛素,其测定值包括真胰岛素、胰岛素原(PI)及胰岛素中间代谢物。但是T2DM和糖耐量异常(IGT)的患者及动物模型中出现的高胰岛素血症,(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2019年07期）
Alnoor,Hussein,Taha,Bagadi[3]（2019）在《抗人胰岛素原scFv-EGFP融合蛋白的制备及其活性分析》一文中研究指出特异性靶向临床生物标志物的重组单克隆抗体越来越多地被用作诊断许多疾病的有力工具。绿色荧光蛋白(GFP)作为荧光体及其红移突变体,增强型绿色荧光蛋白(EGFP),其荧光强度比野生型GFP强35倍,已被用作荧光标记物,用于观察体内和体外蛋白质的定位。GFP/EGFP与抗体的遗传融合导致荧光抗体的扩增,荧光抗体已被用作体外研究和肿瘤成像的可靠检测工具。胰岛素原被用作靶抗原并且广泛用于治疗糖尿病。最近,几种针对胰岛素原的scFv被用于构建免疫测定,其特异性地靶向血清和血液中的胰岛素物质。本论文制备了重组胰岛素原和scFv-EGFP融合蛋白,并测试了它们的活性。主要研究成果如下:(1)将大肠杆菌BL21 pET-Ins菌株在30℃,220rpm下培养至OD_(600)≥0.6,然后用1mmol/L IPTG在26℃,220rpm下诱导4小时。通过SDS-PAGE分析显示,破碎后离心上清液中没有重组人胰岛素原的显着积累。在破碎后的离心沉淀中,重组人胰岛素原蛋白占总沉淀蛋白的49.9%。这表明人胰岛素原主要以包涵体的形式存在。(2)提取人胰岛素原包涵体,分别用尿素和包涵体洗涤液溶解。SDS-PAGE分析显示,包涵体中人胰岛素原的纯度为84.4%。来自洗涤和重新溶解的包涵体的人胰岛素原的纯度为99.8%。融合蛋白的产量约为197.12mg/L。(3)提取1~6株转基因巴斯德毕赤酵母GS115 scFv-EGFP的核DNA,用一对引物SEP1和SEP2扩增,scFv-EGFP编码片段的1208~1724bp(总长516bp)。结果显示,巴斯德毕赤酵母GS115 scFv-EGFP 1-6菌株呈现出清晰的特异性条带,大小为500bp。(4)通过荧光显微镜分析转基因巴斯德毕赤酵母scFv-EGFP-6和巴斯德毕赤酵母GS115菌株的细胞。重组蛋白的荧光在整个细胞质中可见。(5)将巴斯德毕赤酵母GS115 scFv-EGFP 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11和12号菌株在30℃和220rpm下培养96小时。通过SDS-PAGE电泳分析来自沉淀的发酵液和来自破碎的细胞沉淀的蛋白质。电泳结果显示菌株1~12的特异性条带接近54.6 kDa(scFv-EGFP的理论分子量)。带蛋白分别占30.3%,11.1%,19.1%,60.6%,63.2%,68.1%,35.4%在通过超声破碎(按1至12号菌株的顺序)破碎后,细胞沉淀中总蛋白质的含量为3.8%,4.1%,10.8%,7.1%和15.9%。来自发酵液的蛋白质首先通过丙酮沉淀,然后通过SDS-PAGE分析。蛋白质条带接近54.6kDa,占发酵液中总蛋白质的30.0%,14.8%,23.3%,31.7%,30.4%,27.3%,35.3%,18.4%,14.1%,0.0%,5.9%和0.0%(按1至12号菌株的顺序)。(6)通过蛋白质印迹检测含有scFv-EGFP融合蛋白的样品,发现scFv-EGFP样品可以与抗GFP的抗体结合。(7)用30%,40%和50%硫酸铵沉淀巴斯德毕赤酵母GS115 scFv-EGFP-6细胞的上清液。离心后,在Ni-NTA亲和柱上进一步纯化分级沉淀后制备的溶液。结果显示,接近54.6kDa的蛋白质条带未出现在洗脱缓冲液中。这些结果表明重组融合蛋白scFv-EGFP可能不与Ni-NTA结合。(8)根据(7)结果,我们重新检查了pGAPαA-scFv-EGFP载体序列,发现scFv-EGFP编码片段末端出现了移码突变,在Myc和His的标签前面出现终止密码子TAG。重组融合蛋白scFv-EGFP不含有6×His标签。其他菌株的纯化结果与6号菌株的纯化结果相似,表明终止密码子在构建转基因酵母之前出现。(9)根据(7)和(8)的结果,我们使用离子交换树脂DEAE(DE-52)来纯化重组融合蛋白scFv-EGFP。将破碎的巴斯德毕赤酵母GS115 scFv-EGFP 6菌株上清液上柱,用40mM Tris-HCl(pH6.5)平衡。通过超过蛋白质等电点(pI)的1-2M NaCl缓冲液(pH 5.31)作为洗脱蛋白质,并测量280nm处的吸光度。最大吸收峰出现在管1中。根据管2-9的级分样品的SDS-PAGE分析显示,特异性条带接近54.6kDa(scFv-EGFP的理论分子量)带蛋白分别占62.3%,50.1%,28.8%,28.8%,17.7%,15.4%,7.4%,17.9%。此外,除了54.6kDa的蛋白质条带外,还存在其他蛋白质条带。(10)为了检测scFv-EGFP融合蛋白对胰岛素原的敏感性,我们使用scFv-EGFP检测不同浓度的人胰岛素原(4.1ng/ml,4.5ng/ml,5.9ng/ml和8.6ng/ml)(7.9ng/ml)并显示出良好的点荧光。阴性对照(大肠杆菌BL21(DE3))未显示暴露信号或荧光,这表明重组融合蛋白scFv-EGFP与人胰岛素原具有特异性结合。(本文来源于《兰州理工大学》期刊2019-04-05）
周孟能,陈文琼,陈颖,刘永东[4]（2018）在《门冬胰岛素原的酶切及产物分离纯化方法》一文中研究指出目的建立门冬胰岛素原的酶切及纯化方法,获得高纯度的活性门冬胰岛素。方法以大肠杆菌制备含有前导肽和折迭伴侣C肽的门冬胰岛素原为底物,采用胰蛋白酶和羧肽酶B对门冬胰岛素原进行酶切同时去除前导肽及C肽,酶切条件:酶与门冬胰岛素原的质量比为1:1000,室温反应30min。利用SPFF层析柱纯化酶切产物,获得高纯度的门冬胰岛素。结果电泳结果显示酶切产物与门冬胰岛素分子量相似,离子交换纯化可以分开门冬胰岛素及酶切的多余肽段。高效凝胶过滤层析分析洗脱峰纯度大于95%,蛋白收率为30%。MALDI-TOF检测纯化产物的分子量与门冬胰岛素的理论分子量完全一致。结论建立门冬胰岛素原酶切及分离纯化工艺可用于指导门冬胰岛素的规模制备。(本文来源于《西部医学》期刊2018年10期）
由露莎[5]（2018）在《胰岛素原与2型糖尿病合并高尿酸血症中医证型及影响因素分析》一文中研究指出目的:通过对胰岛素原(PI)与2型糖尿病(T2DM)合并高尿酸血症中医证型及影响因素的相关性分析,探讨两者之间的相互关系,为临床诊疗提供借鉴。材料与方法:随机选取辽宁中医药大学附属医院内分泌科2016年9月1日至2017年6月1日在院的T2DM患者,按照血尿酸水平分为T2DM合并高尿酸血症组(T2DM+HUA组)及单纯T2DM组(T2DM组)。并对T2DM+HUA组的患者进行中医辨证分析,按照四诊资料分为湿热内蕴证、痰瘀互结证、气阴两虚证及阴阳两虚证4个证型,对所有患者进行PI及其他相关相关理化指标检测,通过统计学方法进行分析,探讨相互间的关系。结果:1 T2DM+HUA组的4种证型中,以痰瘀互结证患者的血PI水平升高最为显着(P<0.05)。2 PI在T2DM+HUA组中与腹围呈正相关(P<0.05)。3 T2DM+HUA组较T2DM组患者PI水平更高(P<0.05)。4高PI血症为T2DM合并高尿酸血症的危险因素之一(P<0.05),同时T2DM病程的延长、BMI的增长及HDL-C的降低与尿酸水平的升高相关(P<0.05)。结论:1高PI血症与痰瘀互结证关系密切,PI可能与致病因素“痰”、“瘀”相关,并决定着各个证型的演变与转归。2 T2DM合并高尿酸血症患者普遍存在明显的高PI血症,其可能与胰岛素抵抗相关,并影响着尿酸的生成和排泄。3 PI可能为T2DM合并高尿酸血症的危险因素。(本文来源于《辽宁中医药大学》期刊2018-06-01）
由露莎,郑曙琴[6]（2018）在《胰岛素原与2型糖尿病合并高尿酸血症中医证型及相关危险因素分析》一文中研究指出目的:探讨胰岛素原(PI)与2型糖尿病(T2DM)合并高尿酸血症(HUA)中医证型及其影响因素的关系。方法:选取T2DM住院患者80例,按照其是否合并HUA分为两组进行对照研究,每组患者40例。其中将T2DM合并HUA者按中医辨证分型分为风寒湿热、痰瘀痹阻、气阴两虚、阴阳两虚4个证型,同时收集两组临床资料进行组间比较;并根据PI水平采用四分位数法将所有患者分为P1(246.78<pmmol/L)、P2(246.78~483.72 pmmol/L)、P3(483.72~720.66pmmol/L和P4(≥720.66 pmmol/L)4个亚组。结果:PI水平在T2DM合并HUA的4种证型中有显着性差异(P<0.05),其中阴阳两虚型的PI水平最高,同时PI与BMI、腹围、TG、UA、HDL-C相关(P<0.05);除P4亚组外,各亚组UA水平和HUA发病率随着PI水平逐渐升高。结论:T2DM合并HUA不同中医证型间PI水平存在差异,且PI与体型及脂代谢异常相关,同时为T2DM患者发生HUA的独立危险因素。(本文来源于《辽宁中医杂志》期刊2018年04期）
李一卉,孙璐,戴程婷,袁庆新[7]（2018）在《N-乙酰半胱氨酸对氧化应激所致胰岛素原成熟障碍的改善作用》一文中研究指出目的观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对氧化应激(OS)所致胰岛素原成熟及胰岛β细胞分泌胰岛素功能的影响,探讨减轻OS对改善胰岛β细胞的作用及机制。方法体外培养小鼠胰岛细胞系MIN6细胞,分为对照组、H_2O_2处理组、H_2O_2+NAC处理组。对照组在培养基中不加入H_2O_2及NAC;H_2O_2处理组在培养基中加入10μmol/L H_2O_2处理;H_2O_2+NAC处理组培养基中加入10μmol/L H_2O_2刺激4 h后,再加入250μmol/L NAC处理。各组细胞培养24 h后,采用台盼蓝染色法检测细胞死亡率,采用H2DCFDA荧光探针法检测细胞中活性氧簇(ROS)表达水平,采用Western blotting法检测细胞胰岛素原、构象未成熟胰岛素原复合物(CIPC)蛋白表达并计算胰岛素原/CIPC,采用放免法检测细胞上清胰岛素相对含量。结果 H_2O_2处理组细胞死亡率高于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞死亡率低于H_2O_2处理组(P均<0.05)。H_2O_2处理组细胞ROS表达水平高于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞ROS表达水平低于H_2O_2处理组(P均<0.05)。H_2O_2处理组细胞胰岛素原/CIPC比例低于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞胰岛素原/CIPC高于H_2O_2处理组(P均<0.05)。H_2O_2处理组细胞上清胰岛素相对含量低于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞上清胰岛素相对含量高于H_2O_2处理组(P均<0.05)。结论 NAC可以改善OS引起的胰岛β细胞损伤、胰岛素原成熟障碍及胰岛素的释放异常,有效地保护胰岛β细胞功能。(本文来源于《山东医药》期刊2018年14期）
郑曙琴,由露莎[8]（2017）在《胰岛素原与2型糖尿病合并高尿酸血症中医证型及相关危险因素分析》一文中研究指出目的探讨胰岛素原(PI)与2型糖尿病(T2DM)合并高尿酸血症(HUA)中医证型及其影响因素的关系。方法选取T2DM住院患者80例,按照其是否合并HUA分为两组进行对照研究,每组患者40人。其中将T2DM合并HUA者按中医辨证分型分为风寒湿热、痰瘀痹阻、气阴两虚、阴阳两虚4个证型,同时收集2组临床资料进行组间比较;并根据PI水平采用四分位数法将所有患者分为P1(246.78<pmmol/L)、P2(246.78～483.72 pmmol/L)、P3(483.72～720.66pmmol/L和P4(≥720.66 pmmol/L)4个亚组。结果 PI水平在T2DM合并HUA的四种证型中有显着性差异(P<0.05),其中阴阳两虚型的PI水平最高,同时PI与BMI、腹围、TG、UA、HDL-C相关(P<0.05);除P4亚组外,各亚组UA水平和HUA发病率随着PI水平逐渐升高。结论 T2DM合并HUA不同中医证型间PI水平存在差异,且PI与体型及脂代谢异常相关,同时为T2DM患者发生HUA的独立危险因素。(本文来源于《中华中医药学会糖尿病分会2017年学术年会暨第十八次中医糖尿病大会论文汇编》期刊2017-08-25）
吕丹,闫亚丽,景丽芳,张秋荣,常莉[9]（2017）在《重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达》一文中研究指出目前重组胰岛素主要用于糖尿病的治疗.通过大肠杆菌(E.coli)密码子优化,设计人胰岛素原基因,建立利用大肠杆菌表达可溶性重组胰岛素原的技术方法.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,重组质粒p His-Nus Ainsulin诱导表达的大肠杆菌可溶性表达融合蛋白His-Nus A-insulin.重组蛋白His-Nus A-insulin可溶性表达的最适条件为0.1,mmol/L IPTG作用下37,℃诱导4,h,重组蛋白产物经过Ni柱纯化、500,mmol/L咪唑洗脱,得到纯度较高的1.059,μg/μL的重组蛋白His-Nus A-insulin,重组蛋白His-Nus A-insulin经烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV)酶切作用后,获得可溶的人胰岛素原.(本文来源于《天津科技大学学报》期刊2017年06期）
胡元,张宇琛,徐焱成,刘天罡[10]（2017）在《无细胞蛋白合成体系实现胰岛素原可溶性表达》一文中研究指出胰岛素原(Proinsulin,Pins)是胰岛素的合成前体。在大肠杆菌表达系统中,其一般以包涵体的形式存在,需要经过变性复性等后续加工过程才能得到有活性的胰岛素。而无细胞蛋白合成体系(Cell-free protein synthesis,CFPS)作为一种新型体外蛋白合成手段,突破了细胞的生理限制,已成功应用于多种重组蛋白药物的生产。为了探索胰岛素合成的新方法以满足其在新型给药途径研发中的需求,本研究运用CFPS体系进行胰岛素原的可溶性表达。通过将胰岛素原与荧光蛋白进行融合来增加其可溶性,成功在CFPS体系中表达了胰岛素原融合蛋白。最后使用Western blotting对融合红色荧光蛋白的胰岛素原(Pins-mCherry)进行鉴定,利用酶标仪对融合绿色荧光蛋白的胰岛素原(Pins-eGFP)在上清中的表达进行定量分析,结果表明Pins-eGFP部分可溶,其表达量为(12.28±3.45)μg/m L。本研究首次实现了融合胰岛素原在CFPS系统中的可溶性表达,其融合荧光蛋白的策略显着提升了胰岛素原的可溶性,该结果为探究胰岛素合成新方法及开发基于CFPS系统的新型胰岛素给药途径奠定了基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2017年03期）
胰岛素原论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
高胰岛素血症和胰岛素抵抗(IR)导致2型糖尿病(T2DM)发病的分子病理学机制成为国内外研究的难点和热点。观察发现,临床应用放免法测定胰岛素,其测定值包括真胰岛素、胰岛素原(PI)及胰岛素中间代谢物。但是T2DM和糖耐量异常(IGT)的患者及动物模型中出现的高胰岛素血症,
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胰岛素原论文参考文献
[1].王晓红,王庆辉,杜娟,王锐.社区门诊老年2型糖尿病患者血清胰岛素原的检测及其与冠心病的相关性观察[J].中国实验诊断学.2019
[2].邵红,杜娟,王锐,黄毅.不同浓度胰岛素原对大鼠肝脏细胞胰岛素敏感性的影响及意义[J].中国实验诊断学.2019
[3].Alnoor,Hussein,Taha,Bagadi.抗人胰岛素原scFv-EGFP融合蛋白的制备及其活性分析[D].兰州理工大学.2019
[4].周孟能,陈文琼,陈颖,刘永东.门冬胰岛素原的酶切及产物分离纯化方法[J].西部医学.2018
[5].由露莎.胰岛素原与2型糖尿病合并高尿酸血症中医证型及影响因素分析[D].辽宁中医药大学.2018
[6].由露莎,郑曙琴.胰岛素原与2型糖尿病合并高尿酸血症中医证型及相关危险因素分析[J].辽宁中医杂志.2018
[7].李一卉,孙璐,戴程婷,袁庆新.N-乙酰半胱氨酸对氧化应激所致胰岛素原成熟障碍的改善作用[J].山东医药.2018
[8].郑曙琴,由露莎.胰岛素原与2型糖尿病合并高尿酸血症中医证型及相关危险因素分析[C].中华中医药学会糖尿病分会2017年学术年会暨第十八次中医糖尿病大会论文汇编.2017
[9].吕丹,闫亚丽,景丽芳,张秋荣,常莉.重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达[J].天津科技大学学报.2017
[10].胡元,张宇琛,徐焱成,刘天罡.无细胞蛋白合成体系实现胰岛素原可溶性表达[J].生物工程学报.2017
论文知识图
