TRPM2在H9N2猪流感病毒感染小鼠PMVEC损伤中的表达与作用

TRPM2在H9N2猪流感病毒感染小鼠PMVEC损伤中的表达与作用

论文摘要

目的:探讨瞬时受体电位阳离子通道M2(TRPM2)在H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的表达与作用。方法:采用H9N2-SIV感染小鼠PMVEC (每组设立3个重复),在病毒感染后24 h和48 h进行采样,根据试剂盒方法测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧簇(ROS)和一氧化氮合成酶(NOS)的变化;电镜观察PMVEC超微结构变化;利用Transwell培养PMVEC单层细胞,测定跨膜电阻及辣根过氧化物酶渗出率;real-time PCR和Western blot方法检测TRPM2 mRNA与蛋白的表达;采用Annexin V/PI双染法观察病毒感染细胞的凋亡情况。结果:H9N2-SIV感染后小鼠PMVEC中GSH-Px和SOD活性显著下降,而ROS水平和NOS活性显著高于未感染对照组(P<0.01);病毒感染细胞细胞器明显减少,出现空泡化结构,线粒体基质减少,细胞发生凋亡;病毒感染后跨膜电阻值明显降低,辣根过氧化物酶渗出率则显著增加;TRPM2 mRNA和蛋白表达随病毒感染时间增加显著升高(P<0.01);Annexin V/PI双染法显示病毒感染细胞的胞膜荧光显著增强,同时大量细胞的胞核显现红色,表明大量细胞发生凋亡现象。结论:TRPM2在H9N2-SIV感染PMEVC过程中表达明显增强,提示其参与了H9N2-SIV感染导致的PMVEC损伤和凋亡过程。

论文目录

  • 材 料 和 方 法
  •   1 材料
  •   2 主要试剂
  •   3 主要方法
  •     3.1 PMVEC培养
  •     3.2 H9N2-SIV感染
  •     3.3 H9N2-SIV感染PMVEC后SOD、GSH-Px、ROS和NOS水平的测定
  •     3.4 H9N2-SIV感染PMVEC超微结构的观察
  •     3.5 单层PMVEC跨膜电阻和通透性测定
  •     3.6 H9N2-SIV感染PMVEC中TRPM2 mRNA的表达
  •     3.7 H9N2-SIV感染PMVEC中TRPM2蛋白的表达
  •     3.8 H9N2-SIV感染PMVEC凋亡的观察
  •   4 统计学处理
  • 结 果
  •   1 H9N2-SIV感染PMVEC对NOS、ROS、GSH-Px和SOD水平的影响
  •   2 H9N2-SIV感染导致PMVEC超微结构损伤
  •   3 H9N2-SIV感染对单层PMVEC跨膜电阻和通透性的影响
  •   4 H9N2-SIV感染显著增加PMVEC中TRPM2 mRNA表达
  •   5 H9N2-SIV感染显著增加PMVEC中TRPM2蛋白表达
  •   6 H9N2-SIV感染对PMVEC凋亡的影响
  • 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 罗强,高晶萍,梁亭,张雅琪,李珮瑶,王少华,李军,张瑞华,徐彤

    关键词: 猪流感病毒,瞬时电位受体阳离子通道,肺微血管内皮细胞,细胞凋亡,氧化应激

    来源: 中国病理生理杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河北北方学院生命科学研究中心,河北北方学院预防兽医学重点实验室,河北北方学院基础医学院

    基金: 国家自然科学基金资助项目(No.31672522,No.31602030),河北省教育厅自然科学重点研究项目(No.ZD2019078),河北省第二期农业现代化产业体系蛋肉鸡创新团队专项经费(No.HBCT2018150207),河北省自然科学基金资助项目(No.C2019405060,No.C2019405076)

    分类号: S852.651

    页码: 2241-2246

    总页数: 6

    文件大小: 1280K

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