导读:本文包含了长度谱型论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:长度,淋巴细胞,白细胞,论文,腺病毒,GeXP,TCR。
长度谱型论文文献综述
王腾[1]（2013）在《GeXP多基因遗传表达系统检测人TCRVα和TCRVβ链CDR3谱型及长度的方法建立以及初步应用》一文中研究指出目的：利用GeXP多重基因表达系统建立两种多重逆转录-聚合酶链式反应(mRT-PCR)的方法，分别检测TCR Vα和TCR Vβ链的CDR3谱型及长度，用于分析T细胞克隆增殖情况。分析肺癌患者胸水中TIL的TCR Vα和TCR Vβ家族的克隆增殖情况，并克隆具有寡克隆或单克隆增生现象的TCR Vα和TCR Vβ基因构建重组嵌合型腺病毒pDC315-TCRVα-IRES-TCRVβ。研究此TCR Vα和TCRVβ基因修饰的PBMC对不同肿瘤细胞的杀伤作用，确定是否为肺癌相关的TCR基因，为以后发现肿瘤特异性TCR基因并利用特异性TCR基因修饰T细胞进行过继免疫治疗打下基础。方法：一、收集正常人外周血，分离出单核细胞，提取总RNA，利用GeXP多重基因表达系统建立多重逆转录-聚合酶链式反应的方法检测人PBMC中22个TCR Vβ家族的CDR3的谱型和长度，用于分析亚家族的比例以及克隆增殖情况。二、收集正常人外周血，分离出单核细胞，提取总RNA，利用GeXP多重基因表达系统建立多重逆转录-聚合酶链式反应的方法检测人PBMC中32个TCR Vα亚家族的CDR3的谱型长度，用于分析亚家族的克隆增殖情况。叁、收集肺癌患者胸水，分离出单核细胞，提取总RNA，利用上述建立的两种方法分析肺癌患者胸水中TIL的TCR Vβ家族和TCR Vα家族的克隆增殖情况。四、提取肺癌患者胸水单核细胞的总RNA，克隆肺癌患者胸水TIL中呈现寡克隆增殖的的TCR Vβ基因和TCR Vα基因，并构建腺病毒穿梭质粒pDC315-TCRVα-IRES-TCRVβ。五、通过Lipofectamine2000脂质体转染的方法，将腺病毒骨架质粒与构建的腺病毒穿梭质粒pDC315-TCRVα-IRES-TCRVβ共转染HEK293细胞，包装表达目的基因的重组腺病毒。获得的初病毒提取病毒基因组DNA，PCR扩增目的基因。用病毒转染淋巴细胞，检测目的基因表达情况。将鉴定正确的重组嵌合型腺病毒进行大量扩增，过滤TCID50法测病毒滴度。用重组腺病毒感染PBMC，36小时后分别作用于肺癌细胞株NCI-H1299（HLA-A2+）、NCI-H1299（HLA-A2-）、肝癌细胞株HepG2（HLA-A2+），7402（HLA-A2-）。用MTT法在12h、24h、36h叁个时间点检测杀伤效果。结果：成功地利用GeXP多重基因表达系统建立两种多重逆转录-聚合酶链式反应(mRT-PCR)的方法，检测出22个TCR Vβ家族以及32个TCR Vα家族CDR3长度以及谱型情况。GeXP检测5例肺癌患者胸水中TIL的TCR Vβ家族和TCR Vα家族的CDR3谱型，结果显示除P2病人所有家族均为多克隆外，其余四例患者均出现单克隆性或寡克隆性增生的现象，通过测序，P1寡克隆增生的TRBV21(TRBV21-TRBD2-TRBJ2S1)和TRAV26(TRAV26-TRAJ20)；P3寡克隆增生的TRBV21(TRBV21-TRBD1-TRBJ2S1)和TRAV17(TRAV17-TRAJ20)；P4寡克隆增生的TRBV21(TRBV21-TRBD1-TRBJ2S1)和TRAV7(TRAV7-TRAJ5)；P5单克隆增生的TRBV17(TRBV17-TRBD2S2-TRBJ2S1)和TRAV5(TRAV5-TRAJ27)。从P5患者中成功克隆获得TCR Vα5和TCR Vβ17基因，并正确构建了重组腺病毒穿梭质粒pDC315-TCR Vα5-IRES-TCR Vβ17。通过Lipofectamine2000脂质体转染的方法，利用腺病毒包装细胞包装重组腺病毒。提取重组腺病毒基因组，PCR扩增得到Fiber35和TCR Vβ17基因，说明目的基因已经整合到病毒基因组中。病毒感染PBMC后流式检测，目的基因得到有效表达。用重组腺病毒感染PBMC后，进行抗肿瘤细胞实验，发现经TCRVα5-TCRVβ17基因转染的PBMC的抗肿瘤能力为NCI-H1299(HLA-A2+)>HepG2(HLA-A2+)>NCI-H1299(HLA-A2-)>7402(HLA-A2+)。结论：GeXP检测五例肺癌患者TIL，均出现了TCR Vα和TCR Vβ家族的寡克隆或单克隆增生的现象（除P2），推测可能是由于在肿瘤局部的特异性抗原诱导产生的。从肺癌患者胸水中克隆获得TRAV5（TRAV5-TRAJ27）和TRBV17(TRBV17-TRBD2S2-TRBJ2S1)基因，并成功构建了重组腺病毒载体。杀伤实验显示重组TCR腺病毒感染的PBMC对两株肺腺癌细胞株均具有杀伤效果，但对HLA-A2+肺腺癌细胞的杀伤效率明显高于HLA-A2-肺腺癌细胞，并且对非肺癌细胞7402细胞没有杀伤效果，说明该寡克隆增生的TCR Vα和TCR Vβ家族是由肺癌引起的特异性增殖T细胞。(本文来源于《广东药学院》期刊2013-03-31）
李健为,朱平[2]（1999）在《建立TCRγ基因长度谱型方法分析疾病中淋巴细胞克隆的消长》一文中研究指出γ／δＴ淋巴细胞具有重要的免疫功能［１］。我们建立了分析Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因谱系的方法，分析病情中γ／δＴ淋巴细胞各个克隆的消长变化及这些变化与疾病的关系。利用不同克隆的ＴＣＲγ基因重排后的ＣＤＲ区长度不同，建立一种分析淋巴细胞各个不同克隆的方法，(本文来源于《中华血液学杂志》期刊1999年11期）
长度谱型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
γ／δＴ淋巴细胞具有重要的免疫功能［１］。我们建立了分析Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因谱系的方法，分析病情中γ／δＴ淋巴细胞各个克隆的消长变化及这些变化与疾病的关系。利用不同克隆的ＴＣＲγ基因重排后的ＣＤＲ区长度不同，建立一种分析淋巴细胞各个不同克隆的方法，
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
长度谱型论文参考文献
[1].王腾.GeXP多基因遗传表达系统检测人TCRVα和TCRVβ链CDR3谱型及长度的方法建立以及初步应用[D].广东药学院.2013
[2].李健为,朱平.建立TCRγ基因长度谱型方法分析疾病中淋巴细胞克隆的消长[J].中华血液学杂志.1999
论文知识图
