导读:本文包含了细菌内同源重组论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细菌,载体,基因治疗,腺病毒,基因,细胞,胰岛。
细菌内同源重组论文文献综述
陈竞,高砚春,蔡燕,李金穗,郭冬梅[1]（2016）在《细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体的研究》一文中研究指出目的:研究细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体及其体外扩增表达。方法:将survivin基因克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化,构建负载survivin片段的重组腺病毒载体。提取重组病毒基因酶切鉴定后,包装成病毒,并扩增到所需滴度。行Western blotting鉴定,观察重组腺病毒载体在真核细胞的表达。结果:(1)重组穿梭质粒的Mlu I酶切鉴定结果显示,酶切结果均与相应的载体及目的片段的大小相符合,基因测序结果基本一致。(2)凝胶电泳产生了两条大约15 kb和8.5kb的片段,由图2可知重组腺病毒质粒酶切充分完全,且回收率较高。(3)重组腺病毒载体转染AD293细胞24 h后已出现细胞病变效应,病变细胞细胞核变大。(4)D260/OD280的值为1.92,表明重组腺病毒纯度较高。(5)AD293细胞病毒上清中有能与抗Survivin单抗反应的蛋白,其相对分子质量与理论值相吻合,阴性对照组无对应条带出现。结论:本方法成功构建表达了含Survivin的重组腺病毒载体,为进一步进行Survivin基因功能的研究提供了实验基础和理论支持。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2016年17期）
杨献伟,杨瑞馥,崔玉军[2]（2016）在《细菌基因组同源重组:量化与鉴定》一文中研究指出同源重组(Homologous recombination)是塑造细菌群体多样性的重要原因之一。遗传物质通过同源重组在细菌不同种系间进行水平转移,打乱了克隆繁殖形成的竖向系统发育结构,从而为系统发育重建和种群结构判定带来困难。本文讨论了同源重组对系统发育分析和进化研究的影响,从实际应用的角度对量化重组程度和鉴定重组事件的常用软件及方法进行了综述,归纳了各软件工具和模型方法的优缺点,旨在对细菌重组分析和种群进化研究有所借鉴。(本文来源于《遗传》期刊2016年02期）
李玲,国蓉,常绪生,印慨,张晔[3]（2014）在《利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体》一文中研究指出目的构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体,最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠,为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型。方法以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体(retrieving vector),应用λ噬菌体Red重组酶介导的缺口修复(gap-repair)方法,通过细菌内的同源重组克隆长度约为12kb的小鼠胰岛素2(Ins2)基因组DNA,同时构建1个带有内部核糖体进入位点(IRES)序列、Cre重组酶序列和正负向筛选标记基因的微型打靶载体(mini-targeting vector),最后通过同源重组获得Ins2-Cre打靶载体。结果以Ins2基因的第3外显子为靶点,成功构建了受内源性Ins2基因启动子严格调控的表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体。结论成功构建了在胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体,为获得胰岛β细胞中基因特异性敲除小鼠模型提供了关键材料。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2014年02期）
王立良,王淼,王浩,张玉建,刘勇[4]（2010）在《利用细菌人工染色体同源重组对小鼠基因进行条件型敲除》一文中研究指出目的:探索通过细菌人工染色体(BAC)同源重组系统构建条件基因敲除载体的高效率方法,提高条件基因敲除小鼠(Flox小鼠)的构建效率。方法:利用作者自己构建的噬菌体重组酶系统,通过BAC同源重组进行条件型基因敲除载体构建工作。首先通过亚克隆构建了一系列载体含有同源臂的靶向质粒,线性化后,打靶片段经电穿孔法转入大肠杆菌内,与相应的BAC同源重组,再经过叁步同源重组和一步位点特异性重组,构建小鼠条件型基因敲除载体。结果:高效率构建了小鼠基因的最终条件基因敲除载体。结论:通过BAC同源重组高效构建条件基因敲除载体,为条件基因敲除载体的构建提供了全新思路,并为FLox小鼠的建立,及相应基因在发育、生理、致病机制等方面的功能研究奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2010年01期）
陈邦党,马翔,马依彤,杨毅宁,刘芬[5]（2009）在《细菌内同源重组法快速制备重组腺病毒》一文中研究指出目的:探讨细菌内同源重组两步转化法快速构建重组腺病毒质粒和制备重组腺病毒的方法。方法:将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183高效感受态,制备pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态,将线性化的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV转化至含pAdEasy-1的BJ5183感受态,筛选获得重组腺病毒载体pAdEazy-CMV。获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装、扩增出重组腺病毒RAd-CMV,氯化铯梯度离心法进行纯化,采用电镜负染鉴定重组腺病毒,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP的表达并检测重组腺病毒的滴度。继而用纯化的重组腺病毒感染HeLa细胞,测定转染效率。结果:成功构建了重组腺病毒载体pAdEazy-CMV,透射电镜和绿色荧光鉴定证实病毒包装成功,并且具有感染力,病毒的滴度可达2.0×1010pfu/ml。结论:细菌内同源重组两步转化法可以快速构建重组腺病毒质粒,为后续构建携带不同目的基因的重组腺病毒奠定基础。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2009年12期）
徐华敏,姜宏,谢俊霞[6]（2008）在《细菌内同源重组构建携带人DMT1基因的重组腺病毒》一文中研究指出目的利用细菌内同源重组法构建携带二价金属离子转运蛋白1(DMT1)编码基因的重组腺病毒。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从人胚近段小肠中获取人的全长DMT1-IRE的cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-DMT1-IRE,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy1同源重组,利用卡那霉素抗性平板初步筛选重组质粒阳性克隆,经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定获得到重组腺病毒载体pAdEasy1-DMT1-IRE。线性化的重组质粒转染HEK293细胞,获得高滴度的重组腺病毒。结果RT-PCR反应扩增出1841 bp的片段,重组质粒阳性克隆pAdEasy1-DMT1-IRE经PacⅠ酶切后获得一大于20 kb的大片段和4.5 kb的特征性片段,PCR鉴定扩增出DMT1的片段,证明重组腺病毒质粒中已成功插入目的基因DMT1-IRE。转染293细胞后细胞表达GFP荧光,显示293细胞稳定表达外源性的DMT1-IRE基因。结论携带DMT1-IRE基因的重组腺病毒质粒构建成功,获得高滴度的重组腺病毒,为DMT1基因进一步功能的研究提供基础。(本文来源于《青岛大学医学院学报》期刊2008年03期）
刘英鹏,田蕾,王国鹏,王建亭,李泽文[7]（2007）在《细菌内同源重组制备重组腺病毒及其初步应用》一文中研究指出目的通过细菌内同源重组方法构建重组腺病毒。方法质粒pAdTrack酶切线性化后,通过电转化方法转化AdEasier细菌,线性化的腺病毒重组质粒转染293包装细胞后获得重组腺病毒,观察腺病毒感染喉癌细胞Hep-2后的报告基因表达情况及病毒对培养细胞生长的影响。结果构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;扩增的腺病毒转染培养的Hep-2细胞8 h后即开始表达报告基因,48 h后全部细胞均有报告基因表达;该重组的腺病毒对培养Hep-2细胞生长无明显影响。结论通过细菌内同源重组方法构建重组腺病毒,方法简单、成功率高、实验周期短。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2007年04期）
谭艳,王家宁,郭凌郧,孔霞,唐俊明[8]（2007）在《细菌内同源重组法高效制备携带增强型绿色荧光蛋白与人内皮型一氧化氮合酶cDNA的重组腺病毒载体》一文中研究指出目的:利用细菌内同源重组法快速构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人内皮型一氧化氮合酶(he-NOS)cDNA的重组腺病毒质粒和制备表达EGFP和heNOS的重组腺病毒。方法:质粒载体pHCMV SP1A-heNOS用EcoRⅠ酶切,回收heNOS cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pShuttle-heNOS-EGFP;然后用PmeI线性化后的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定后经PacⅠ酶切,转入AD 293细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP,纯化,鉴定,滴度测定。结果:heNOS cDNA成功地插入到穿梭质粒中,pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ5183中成功发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组腺病毒经PCR检测表明携带有目的基因heNOS,滴度约为6.5×1015pfu/L。结论:细菌内同源重组法构建腺病毒载体具有高效、省时、省力的特点,制备出的高滴度重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP为勃起功能障碍的基因治疗奠定了基础,携带的EGFP标记基因可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况。(本文来源于《郧阳医学院学报》期刊2007年02期）
刘自明,严律南[9]（2007）在《细菌内同源重组法制备腺病毒介导TK基因对肝癌细胞的杀伤作用》一文中研究指出目的探讨用细菌内同源重组法制备含TK自杀基因腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用。方法将TK基因自载体中切出,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成质粒pAdT rack-GFP-TK,将其PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化BJ5183菌,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA,PacⅠ酶切后转染293细胞包装成腺病毒颗粒,观察其对肝癌细胞的感染效率和目的基因表达情况及肝癌细胞SMMC-7721感染含TK自杀基因腺病毒后加入丙氧鸟苷(GCV)的生存率和旁观者效应的体外观察。结果纯化所得腺病毒滴度约为2×1012efu/mL,当病毒感染复数(MOI)=100时,腺病毒感染SMMC-7721细胞的效率>90%,实验证实在感染重组体腺病毒的细胞中有相应基因产物的表达,SMMC-7721/Ad-TK细胞对GCV高度敏感,半杀伤浓度(IC50)仅为0.2μmol/L,HSV-TK/GCV系统在SMMC-7721细胞中存在明显的旁杀伤效应。结论细菌内同源重组法制备重组腺病毒介导的HSV-TK基因能够成功地在体外整合到肝癌细胞SMMC-7721中,并能高效表达,使其对GCV高度敏感。旁观者效应极大地提高了TK基因抗肿瘤活性,使TK基因制剂实际应用于临床治疗恶性肿瘤成为可能。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2007年02期）
唐俊明,郭凌郧,孔霞,杨建业,潘国栋[10]（2007）在《细菌内同源重组快速构建和制备表达hSDF-1α的重组腺病毒》一文中研究指出目的:利用细菌内同源重组快速构建携带hSDF-1αcDNA重组腺病毒质粒和制备表达hSDF-1α重组腺病毒.方法:制备感受态BJ5183,将pAdEasy-1转化BJ5183,制备含pAdEasy-1的BJ5183感受态,将线性化的pShuttle-EGFP-hS-DF-1α转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态菌.采用细菌中同源重组法构建重组腺病毒质粒pAd-EGFP-hSDF-1α.pAd-EG-FP-hSDF-1α用PacI线性化后,再用LipoVec介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsCl密度梯度离心法纯化重组腺病毒Ad-EGFP-hSDF-1α.采用荧光显微镜下观察LipoVec介导的重组腺病毒质粒的转染效果及病毒包装情况.结果:pShuttle-EGFP-hSDF-1α成功地转化了含pAdEasy-1的BJ5183,并在其内发生了同源重组.荧光显微镜下观察证实了pAd-EGFP-hSDF-1α转染AD293后,产生了重组腺病毒Ad-EGFP-hSDF-1α.病毒滴度为4.1×1015pfu/L.结论:用细菌内同源重组法可快速、高效制备表达hSDF-1α的高滴度重组腺病毒.为研究hSDF-1α在动员骨髓源干细胞迁移到组织损伤部位修复组织损伤的研究奠定了基础.(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2007年05期）
细菌内同源重组论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
同源重组(Homologous recombination)是塑造细菌群体多样性的重要原因之一。遗传物质通过同源重组在细菌不同种系间进行水平转移,打乱了克隆繁殖形成的竖向系统发育结构,从而为系统发育重建和种群结构判定带来困难。本文讨论了同源重组对系统发育分析和进化研究的影响,从实际应用的角度对量化重组程度和鉴定重组事件的常用软件及方法进行了综述,归纳了各软件工具和模型方法的优缺点,旨在对细菌重组分析和种群进化研究有所借鉴。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细菌内同源重组论文参考文献
[1].陈竞,高砚春,蔡燕,李金穗,郭冬梅.细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体的研究[J].现代生物医学进展.2016
[2].杨献伟,杨瑞馥,崔玉军.细菌基因组同源重组:量化与鉴定[J].遗传.2016
[3].李玲,国蓉,常绪生,印慨,张晔.利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体[J].第二军医大学学报.2014
[4].王立良,王淼,王浩,张玉建,刘勇.利用细菌人工染色体同源重组对小鼠基因进行条件型敲除[J].生物技术通讯.2010
[5].陈邦党,马翔,马依彤,杨毅宁,刘芬.细菌内同源重组法快速制备重组腺病毒[J].新疆医科大学学报.2009
[6].徐华敏,姜宏,谢俊霞.细菌内同源重组构建携带人DMT1基因的重组腺病毒[J].青岛大学医学院学报.2008
[7].刘英鹏,田蕾,王国鹏,王建亭,李泽文.细菌内同源重组制备重组腺病毒及其初步应用[J].华中科技大学学报(医学版).2007
[8].谭艳,王家宁,郭凌郧,孔霞,唐俊明.细菌内同源重组法高效制备携带增强型绿色荧光蛋白与人内皮型一氧化氮合酶cDNA的重组腺病毒载体[J].郧阳医学院学报.2007
[9].刘自明,严律南.细菌内同源重组法制备腺病毒介导TK基因对肝癌细胞的杀伤作用[J].四川大学学报(医学版).2007
[10].唐俊明,郭凌郧,孔霞,杨建业,潘国栋.细菌内同源重组快速构建和制备表达hSDF-1α的重组腺病毒[J].第四军医大学学报.2007
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