王晓云[1]2003年在《DPYD基因分型芯片的制备及应用基础研究》文中认为DPYD基因分型芯片的制备及应用基础研究 5-Fu对于肿瘤病人应用较为广泛，且疗效显着，但有时会出现严重的毒副作用甚至死亡。如果在使用5-Fu之前能够预测病人对它的反应，将减少病人的痛苦和损失，从根本上改变以前的治疗模式，实现个体化医疗。 由于85％以上的5-Fu通过DPD酶代谢而失去活性，故DPD酶活性下降或缺失的病人将遭受严重的毒副作用。目前随着分子生物学的发展，以及对DPYD基因的深入了解，使得从基因水平直接检测5-Fu的反应成为可能。研究发现，DPD酶是由DPYD基因编码的，该基因EXON2T85C(DPYD9)位点的突变的人体内的DPD酶活性完全缺失，故当接受5-Fu治疗时可能发生严重的毒副反应。 本实验以基因芯片为手段通过检测DPYD基因的EXON2T85C(DPYD9)位点突变直接预测5-Fu的反应。同时也检测了DPYD基因中文献报道的突变较高的EXON13A1627G(DPYD5)位点及中国人群中尚未报道的EXON2G62A(DPYD12)，EXON13G1601A(DPYD4)，EXON14deleteC1897(DPYD3)，和EXON14intron14GIA(DPYD2)。目前已完成了DPYD基因分型芯片的制备及条件的优化，同时首次在中国人群中对肿瘤病人、正常人及肾病病人的临床标本进行了基因分型。 第一部分DPYD基因芯片的制备及条件的优化 我们检索了重要SNPs位点及其侧翼序列，并计算机辅助设计引物，探针，本室合成引物和探针。我们将靶DNA分别点在溴片及醛基片上制成芯片备用。同时优化了PCR及杂交条件，也对多重PCR进行了尝试。还以质粒为模板进行了重复性试验，结果显示该芯片杂交结果可靠。另外，我们也考察了紫外交联强度对杂交信号的影响。同时构建了标准模板和建立了分型标准。 第二部分利用DPYD基因芯片对临床样本进行基因分型 实验发现在中国人群中，EXON2T85C(DPYD9)位点的突变在肿瘤病人、正常人及肾病病人中分别为15/112，3/45，9/83，EXON13A1627G(DPYD5)的突变在上述人群中为40/112，14/45，23/83。另外，我们将307医院的肿瘤病人中肺军事医学科学院硕士论文癌与非肺癌及男女病人的上述位点的突变进行了比较，结果:肺癌与非肺癌的EXONZT85C归pYI)9)位点的突变分为6/72，9/40，EXoNl3A1627G(DpYD5)的突变为26/72，14/4o。男女病人中的EXo卜rZT85c(D pYDg)的突变为11/70，4/42，EXON13A1627G(DpYDS)的突变为25/70，25/42。 另外，我们将上述结果进行了统计学处理得出结论:肿瘤病人、正常人及肾病病人在EXONZT85C(DpYDg)和EX0N13A1627侧DpYDS)两个位点的突变均无显着性差异(P>0.05)。肺癌与非肺癌患者在Ex0N2T85C(DPYD9)位点的突变存在显着性差异(P<005)。肺癌与非肺癌患者在EXoNI 3A1627侧DPYDS)位点的突变不存在显着性差异(P>0.05)。男女病人在上述位点的突变不存在显着性差异(P>005)。 本实验还对肿瘤病人，正常人及肾病病人样本中EXONZG62A (DPYD12)，EXON13G160lA(DPYD4)，EXON14del以eC1897(DPYD3)，Ex0N14intronl4GIA(DPYD2)进行了分型，结果未发现突变。 另外，为验证基因芯片的准确性我们采用直接测序法将样本中17例PCR产物直接测序，发现与芯片的分型结果符合的有16例，符合率达到94.12%。证明基因分型芯片具有较高的灵敏性和准确性。 本实验为在中国人群中建立DPYD基因芯片的检测技术平台，发展个体化医疗奠定了基础。同时，对于今后进一步研究DPYD基因多态性与5一氟尿嚓陡药物疗效及毒副作用的关系具有十分重要的意义。
林莉[2]2006年在《RRM1和mdr1基因单核苷酸多态性及表达的研究》文中研究表明肺癌是美国癌症相关死亡的第一位原因(超过乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌死亡总数)，占癌症总死亡数的28％。由于缺乏有效的早诊早治手段，初诊肺癌患者中约3／4已失去手术机会，其主要治疗手段为化疗和放疗。进入90年代以来，随着第叁代药物健择等的出现，肺癌化疗效果有了一定的提高，但这些第叁代药物与铂类联合方案的有效率也才达30％—40％，并且这个水平已达到了一个新的平台阶段。研究显示，一些基因的异常或表达水平增高使肿瘤对化疗药物产生抗药性是影响药效的一个重要因素。实时荧光定量PCR技术和基因芯片技术是近年来发展并逐渐完善的一种程序化、规模化、高通量的基因表达分析与基因检测新技术，为现代生物医学等领域内的研究与探索提供了有力的资料获取与分析的技术平台，在基因检测、基因表达分析、突变检测、SNP筛查以及反义药物的筛选等研究领域得到越来越广泛的应用。本文我们应用这两种新技术对RRM1和mdr1基因的单核苷酸多态性及表达进行了检测并分析其相关性，期望对肺癌的个体化治疗提供理论依据。 第一部分：核糖核苷还原酶M1亚单位基因是健择的分子靶点，它是RNA合成的前体，参与核糖核苷酸还原成脱氧核糖核酸的过程，为DNA修复的限速酶；研究表明，RRM1启动子区域(-)37位点基因的多态性与健择的疗效有关。本章建立了一种简便和特异的对RRM1进行等位基因分型的方法。以RRM1基因为靶合成含突变位点的特异引物：野生型引物WF，突变型引物TF和共同的下游引物R。用DNA嵌入荧光染料SYBR Green Ⅰ进行荧光PCR扩增，在PCR后进行溶解曲线分析以确定得到产物的基因型，优化了引物浓度，对其灵敏度进行了分析，对10份PCR产物进行了验证。野生型基因组为模板时，WF和R组合有荧光响应，而TF，R组合无荧光响应；当以突变型基因组为模板时，TF和R组合有荧光响应，而WF和R组合无荧光响应，两者Ct值均为24，Tm值均为89℃。优化引物浓度为0.25μmol／L。PCR产物测序证实荧光PCR法与直接测序结果一致。AA型等位基因的在中国人群中的发生频率为31.3％。该方法能准确快速地区分RRM1的基因型，其敏感性和特异性强。 第二部分：建立了实时荧光定量PCR方法检测健择耐药相关的5种基因
张青松, 朱传卫, 王叁六, 赵吉光, 沈俊[3]2019年在《整合素基因多态性与胃癌发病风险的相关性》文中指出目的 研究整合素6个基因多态性位点与胃癌发病风险及与胃癌病理特征的相关性。方法 采用Mass?array基因分析平台检测253例胃癌患者和307例健康者6个基因多态性位点;采用免疫胶体金法检测幽门螺杆菌感染。结果 ITGA1rs2447867位点在病例与对照组的分布差异有统计学意义,其中TC(校正后OR=1.69,95%CI:1.16～2.45,χ~2=7.574,P=0.006)、TT(校正后OR=2.23,95%CI:1.25～4.00,χ~2=7.303,P=0.007)及TC/TT(校正后OR=1.75,95%CI:1.23～2.50,χ~2=9.411,P=0.002)基因型与胃癌的发病风险相关。ITGA1rs2447867位点经亚组分析显示,在年龄> 60岁组,各基因型均胃癌的发病风险相关(均P <0.05)。此外在肿瘤部位分组中亦显示,在非贲门癌中,各基因型均与胃癌的发病风险相关(均P <0.05),而未见与贲门癌相关。结论 ITGA1rs2447867多态性位点与胃癌发病风险相关,且风险在年龄> 60岁人群中增大,该位点与非贲门胃癌发病风险相关。
参考文献：
[1]. DPYD基因分型芯片的制备及应用基础研究[D]. 王晓云. 中国人民解放军军事医学科学院. 2003
[2]. RRM1和mdr1基因单核苷酸多态性及表达的研究[D]. 林莉. 中国人民解放军军事医学科学院. 2006
[3]. 整合素基因多态性与胃癌发病风险的相关性[J]. 张青松, 朱传卫, 王叁六, 赵吉光, 沈俊. 实用医学杂志. 2019