孙建国[1]2004年在《Livin异构体在NSCLC中的表达及其基因沉默诱导肺癌细胞凋亡研究》文中指出目前,非小细胞肺癌(NSCLC)疗效不佳,其中重要的原因是肿瘤组织抗凋亡相关基因表达上调,癌细胞凋亡减少,癌细胞整体耐药增加。通过反义核酸技术抑制肿瘤抗凋亡基因表达,选择性诱导肿瘤细胞发生凋亡,对于迅速有效地清除肿瘤细胞具有重要意义,是肿瘤基因治疗的一项重要策略。然而,诱导凋亡的靶向性差和特异性差是目前限制其疗效的两个重要因素。选择肿瘤细胞特异表达基因并特异性地抑制其表达,是靶向诱导肿瘤细胞凋亡的关键。RNA干涉(RNAi)技术阻断基因表达具有高稳定、高效率和高特异的特点,可望作为反义核酸的优化方式成为肿瘤基因治疗的新手段。人类凋亡抑制蛋白家族新成员,Livin,存在相差仅54bp却具有不同抗凋亡功能的两种异构体(isoform)Livinα和Livinβ,在胚胎组织和肿瘤组织中限制性表达。因此,分析Livin与肺癌发生、发展、治疗、预后的关系,并建立Livin异构体特异的RNAi表达体系对研究Livin异构体生物功能和靶向诱导癌细胞凋亡具有重要意义。研究目的1、研究Livin两种异构体在NSCLC中表达情况,分析Livin表达与肿瘤分型、和肿瘤治疗的关系。2、建立Livin基因异构体表达体系,探讨其在肿瘤放化治疗中不同的抗凋亡功能。3、建立Livin异构体特异的小干涉RNA(siRNA)表达体系,探讨其在诱导肺癌细胞凋亡中的价值及其临床意义。研究内容和方法1、Livin基因异构体在NSCLC中的表达及其意义收集临床NSCLC的手术切除标本及完整临床病历资料,采用RT-PCR和western blot方法检测肺癌组织及两种肺腺癌细胞株A549和SPC-A1中Livin基因的表达,分析其表达与肿瘤病理分型、术前放化疗之间的关系。2、Livin基因异构体在A549细胞中的表达及其功能研究提取SPC-A1细胞总RNA,RT-PCR扩增Livin基因异构体全长cDNA序列,构国家自然科学基金资助项目,编号:30200282
郝伶俐[2]2009年在《Livin与Caspase 9在非小细胞肺癌中的表达及相关性分析》文中进行了进一步梳理背景肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,是癌症死亡的主要原因,严重威胁人类健康,其发生机制是一个多基因、多阶段的复杂过程,与细胞增殖及凋亡失衡密切相关。凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)是一类内源性凋亡抑制因子家族,其过度表达引起细胞凋亡缺陷与肿瘤发生密切相关。Livin是最近几年发现的IAP家族中的一个新成员,已有研究表明Livin特异性表达于人的胚胎组织及大多数人类实体瘤细胞,具有很强的抑制凋亡作用。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)家族是执行细胞凋亡的主要酶类,活化的Caspase通过降解细胞的结构蛋白和功能蛋白,导致细胞凋亡。Caspase9作为该家族中的启动因子,其在肺癌中的表达情况研究甚少。Livin具有凋亡抑制蛋白家族的特征性结构---BIR结构域,这一结构域介导了Livin与Caspase 3、7、9的直接结合,从而阻断Caspase凋亡作用的发挥达到抑制细胞凋亡的作用。目前Livin蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)组织中特异性高表达的现象已引起许多学者的关注,但Livin的表达与NSCLC患者的病理分型、肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期等的相关关系尚未完全阐明,Livin与癌基因、抑癌基因和其他凋亡相关基因在肺癌中的相互关系等尚不清晰,Livin作为NSCLC的分子标志物成为诊断和治疗NSCLC新靶点的可能性已倍受关注。目的检测人非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织及正常肺组织中Livin和Caspase9蛋白的表达情况,探讨二者在NSCLC发生、发展中的作用,并分析两者相互之间的相关性,为Livin作为肺癌分子标志物应用于临床提供一定的实验依据。方法采用免疫组化SP法分别检测58例NSCLC组织、50例癌旁肺组织、8例正常肺组织中Livin和Caspase9蛋白的表达水平,并分析二者与肺癌的组织类型、分化程度、临床分期及淋巴结转移的关系,以及两种蛋白表达的相关性。结果NSCLC组织中Livin蛋白的阳性表达率(65.5% )明显高于癌旁组织的(26.0%,p< 0.05)和正常肺组织的(0%,p< 0.05);Livin蛋白在腺癌中的表达(87.5%)明显高于鳞癌(46.5%,p< 0.05)和腺鳞癌(66.7%,p< 0.05),Livin蛋白在有淋巴结转移的肺癌组织中阳性表达率(83.3%)高于无淋巴结转移的肺癌组织中阳性表达率(46.4%),差异均有统计学意义( p< 0.05);Livin蛋白的阳性表达率与NSCLC的分化程度、临床分期无显着相关性( p> 0.05),与组织学类型、淋巴结转移情况有关( p< 0.05)。NSCLC组织中Caspase9蛋白的阳性表达率(31.0%)明显低于癌旁肺组织(82.0%,p< 0.05)和正常肺组织的阳性表达率(87.5%,p< 0.05);Caspase9蛋白的阳性表达率与NSCLC组织的淋巴结转移情况有关( p< 0.05),与组织学类型、分化程度、临床分期无关( p > 0.05)。NSCLC组织中Livin与Caspase9蛋白的表达呈显着负相关(R2 = 0.1447,p=0.003)。结论1 Livin蛋白主要定位于细胞浆,在NSCLC中高表达,且与肺癌病理类型和淋巴结转移有关,提示Livin可能通过某种机制参与了肺癌尤其是腺癌的发生,有望作为一种分子标记物应用于肺癌的诊治;2 Caspase9蛋白在NSCLC中的表达明显低于癌旁及正常肺组织,提示Caspase9蛋白的失表达与肺癌的发生、发展有关;3 Livin蛋白与Caspase9蛋白在NSCLC中的表达呈负相关,Livin蛋白可能通过抑制Caspase9蛋白的活性抑制细胞凋亡和促进细胞增殖,加速细胞的恶性转化和肺癌的发生、发展,二者在肺癌的发生发展中可能起到重要作用。
董凌云[3]2008年在《凋亡抑制因子Livin在人非小细胞肺癌中的表达及与Caspase-3、Ki-67相关性的实验研究》文中研究指明目的研究凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)Livin两种异构体Livinα、Livinβ在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达及临床意义,并分析Livin与磷酸化Caspase-3及增殖相关抗原Ki-67表达的相关性,初步探讨Livin的作用机制和在靶向治疗中应用的价值。方法(1)取NSCLC组织48例、癌旁肺组织29例和良性病变肺组织13例。肺癌患者中腺癌21例、鳞癌24例、大细胞肺癌3例;高分化6例、中分化29例、低分化10例、未分化3例;TNM临床分期为Ⅰ期11例、Ⅱ期18例、Ⅲ期14例和Ⅳ期5例;有淋巴结转移34例,无转移14例。(2)采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述组织中Livin mRNA并同时用组织微阵列(TMA)结合免疫组织化学(IHC)SP法检测Livin蛋白、磷酸化Caspase-3和增殖相关抗原Ki-67的表达水平,并结合临床病理资料进行分析。结果(1)Livin在NSCLC组织、癌旁和良性病变肺组织中的表达阳性率分别为66.67%、6.90%和0.00%,差异具有显着性(P<0.05),Livin在NSCLC组织中有特异性的高表达。(2)Livin的两种异构体Livinα和Livinβ在NSCLC组织中多同时表达,两者在NSCLC组织中的表达无显着性差异(P>0.05),Livin mRNA和Livin蛋白的表达水平基本一致。(3)在淋巴结转移组,Livin的表达阳性率高于无转移组(P<0.05),而与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤大小、吸烟史、病理类型、分化水平和临床分期等临床特征均不相关(P>0.05)。(4)肺癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织和良性病变组织(P<0.0125),并且Caspase-3的阳性表达与肺癌组织的分化程度有关(P<0.05),Livin的表达水平与Caspas-3呈负相关(r=-0.344,P=0.017)(5)肺癌组织中的Ki-67指数(LI)显着高于癌旁组织和良性病变肺组织(P<0.05),并且与肺癌组织的分化、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05),Livin的表达水平与Ki-67抗原呈正相关关系(r=0.602,P=0.000)。结论(1)Livin在NSCLC组织中有特异性的高表达,两种异构体基因在大多数NSCLC组织中同时表达,Livin mRNA和Livin蛋白的表达水平基本一致。(2)Livin的异常表达可能对NSCLC细胞的浸润、转移起重要作用。(3)Livin可能通过抑制凋亡过程中活化的Caspase-3蛋白而发挥抑制细胞凋亡的作用,并且Livin可能具有调节细胞有丝分裂,促进细胞增殖的作用,使NSCLC细胞呈现无限制的生长。(4)Livin有可能成为NSCLC靶向治疗新的靶点。
严丽荣, 李坚[4]2008年在《Livin基因在非小细胞肺癌中表达的分子生物学特性》文中认为原癌基因和抑癌基因所编码的蛋白存在于细胞的各个组成部分中,包括细胞核、细胞质、线粒体和细胞膜。通过对原癌和抑癌基因蛋白结构和功能的分析,发现许多原癌基因和抑癌基因位于信号通路中的不同部位,参与许多重要的细胞活动过程,如细胞生长和分化、DNA复制和损伤修复
杨松华[5]2008年在《食管癌EC9706细胞Livin和MTA1双基因沉默的实验研究》文中提出背景和目的:Livin是新近发现的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis protein,IAP)成员之一,可以和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)直接结合起到凋亡抑制作用。Livin主要在胎盘组织中表达,在胎儿发育过程的多种组织中其表达量较高,而在正常人终末分化组织中呈低表达或不表达。研究发现在多数肿瘤组织中存在Livin高表达现象;它的过度表达可引起凋亡不足而与肿瘤发生密切相关;同时在肿瘤的化疗中,IAP的表达可以有效介导肿瘤的凋亡抵抗。近年来对Livin的研究表明,Livin有可能作为诱导肿瘤凋亡治疗的一个新靶点而倍受关注。肿瘤转移相关基因(metastasis associated gene,MTA)是一个不断快速增长的基因家族。现已发现该基因包含3类(MTA1,MTA2,MTA3)及6个亚型(MTA1,MTA1s,MTA-ZG29p,MTA2,MTA3,MTA3L)。MTA1被认为是细胞核重构和脱乙酰基复合物(nucleosome remodeling and histone deacetylase,NuRD)的组成部分之一,它通过影响染色质的状态来调整转录复制过程,调控组蛋白脱乙酰基从而发挥其生物学作用。目前多数研究认为MTA1的高表达与一些上皮源性肿瘤的侵袭转移密切相关。MTA1可能是通过参与信号传导与基因表达调控一系列有关浸涧转移的蛋白而起重要作用。MTA1基因的作用将为恶性肿瘤侵袭转移的调控提供一个有效的作用靶点和控制手段。在基因治疗方面,RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一个崭新的技术,它是由双链RNA引发的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)现象。该技术能够有效使转录后基因沉默,甚至可以代替基因敲除,为高效特异地阻断致病基因表达提供了强有力的手段。已经有许多研究者们通过RNAi技术来干扰某些致病基因的表达使肿瘤的生物学行为发生一定程度的逆转。但肿瘤的发生与致病都是一个多因素和多基因参与的过程,往往只依靠解决单一的一种异常分子往往不能够完全达到预期的目的。鉴于凋亡抑制基因和肿瘤转移基因均是肿瘤发生以及肿瘤致死的主要因素,已经有学者利用RNAi技术沉默MTA1或Livin,并且取得了一定的肿瘤的抑制效果。有关MTA1和Livin基因在食管鳞癌组织中的表达以及在EC9706细胞诱导Livin和MTA1双基因沉默的实验研究,迄今国内外均未见报道。因此,本研究拟通过探讨:食管癌组织中Livin和MTA1基因的表达情况,及其与浸润转移的关系;构建Livin和MTA1双基因沉默慢病毒型siRNA载体,建立Livin和MTA1双基因沉默食管癌细胞模型;研究Livin和MTA1双基因沉默对食管癌细胞生长、凋亡、侵袭、转移等方面的作用;进而为食管癌靶向治疗提供理论和实验基础。本研究共分以下四个部分。第一部分:Livin、MTA1基因在食管鳞癌组织中的表达分析方法:收集45例食管癌手术标本,每例标本分别取癌灶及远端5cm处正常粘膜组织(即远癌正常组织)两部分。采用实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应(Real-time RT-PCR)分别检测食管癌组织和对应正常粘膜组织中Livinα、Livinβ和MTA1 mRNA的表达;同时采用免疫组化方法分析食管癌组织和对应正常粘膜组织中Livin和MTA1蛋白的表达。结果:1.45例食管癌组织中Livinα和Livinβ的mRNA相对表达量显着高于对应远癌正常组织中Livinα和Livinβ的mRNA相对表达量(P＜0.01);食管癌组织中LivinβmRNA平均表达量高于LivinαmRNA,但差异无显着性(P＞0.05)。2.45例食管癌组织中Livin蛋白表达阳性率为95.6%(43/45),对应远癌正常组织中Livin蛋白表达阳性率仅为6.7%(3/45),二者差异有高度显着性(P＜0.01)。3.45例食管癌组织中MTA1 mRNA相对表达量显着高于对应远癌正常组织中MTA1 mRNA的相对表达量(P＜0.01);有淋巴结转移标本中MTA1mRNA表达量显着高于无淋巴结转移标本,差异有高度显着性(P＜0.01)。4.45例食管癌组织中MTA1蛋白表达阳性率为55.6%(25/45),对应远癌正常组织中却未见MTA1蛋白表达阳性表达。18例伴有淋巴结转移食管癌组织中MTA1蛋白的阳性表达率为100%(18/18);而无淋巴结转移27例食管癌组织中MTA1蛋白的阳性率为25.9%(7/27),两组问差别有显着性(P＜0.05)。第二部分:构建针对MTA1和Livin基因的siRNA载体及其沉默效果的分析方法:利用Takara、Ambion和Promega siRNA靶序列分析设计系统,扫描人MTA1 cDNA编码序列(NM-004689)和Livin cDNA编码序列(NM_139317),依据siRNA靶序列设计原则,经BLAST同源性分析,最终MTA1基因确定5个靶序列,Livin基因最终确定2个靶序列,同时随机组合出一条无关对照siRNA序列。分别合成8对编码短发卡RNA序列的DNA单链,两端分别加入BamHI和XhoⅠ的酶切残基。将合成的8对发卡DNA分别退火,分别克隆入siRNA载体(pRNAT-U6.2/Lenti),通过PCR筛选和DNA序列分析,得到重组子pRNAT-U6.2/Lenti-M286、pRNAT-U6.2/Lenti-M481、pRNAT-U6.2/Lenti-M533、pRNAT-U6.2/Lenti-M1018、pRNAT-U6.2/Lenti-M1332、pRNAT-U6.2/Lenti-L440、pRNAT-U6.2/Lenti-L652和pRNAT-U6.2/Lenti-Con。与辅助包装质粒共转染293FT细胞,进行病毒包装;收集、纯化得到重组慢病毒颗粒。分别感染食管癌EC9706细胞,G418筛选得到稳定感染细胞株。分别用荧光定量RT-PCR和Western blot检测MTA1或Livin基因表达沉默效果。结果:1.筛选得到5个针对MTA1基因的siRNA靶序列,286-304nt,481-499 nt,533-551 nt,1018-1036 nt,1332-1350 nt;2个针对Livin基因的siRNA靶序列,分别为440-458 nt和652-470 nt。2.成功构建5个针对MTA1基因、2个针对Livin基因和1个无关序列慢病毒siRNA表达载体(pRNAT-U6.2/Lenti-M286、pRNAT-U6.2/Lenti-M481、pRNAT-U62/Lenti-M533、pRNAT-U6.2/Lenti-M1018、pRNAT-U62/Lenti-M1332、pRNAT-U62/Lenti-L440、pRNAT-U6.2/Lenti-L652和pRNAT-U6.2/Lenti-Con),包装纯化得到重组慢病毒颗粒。3.经过G418筛选感染细胞,得到5株稳定感染沉默MTA1表达的EC9706细胞株(siM286、siM481、siM533、siM1018和siM1332),得到2株稳定感染沉默Livin表达的EC9706细胞株(siL440和siL652)。4.感染靶向MTA1基因重组siRNA慢病毒的实验组食管癌EC9706细胞中MTA1 mRNA和蛋白表达都受到抑制,但抑制程度不同。其中pRNAT-U6.2/Lenti-M481包装产生的慢病毒,感染EC9706细胞的抑制效果最佳,MTA1mRNA和蛋白表达几乎完全抑制。5.感染靶向Livin基因重组siRNA慢病毒的实验组食管癌EC9706细胞中LivinmRNA和蛋白表达都受到抑制。pRNAT-U6.2/Lenti-L440包装产生的慢病毒,感染EC9706细胞的抑制效果强于pRNAT-U6.2/Lenti-L652,Livin表达几乎完全抑制。第叁部分:RNAi干扰MTA1和Livin基因表达对食管癌EC9706细胞凋亡和侵袭迁移的影响方法:选用第二部分已构建出最有效沉默MTA1和Livin基因的siRNA载体,XhoⅠ和PmeⅠ双酶切pRNAT-U6.2/Lenti-Livin,回收XhoⅠ粘端和PmeⅠ平端线形化载体;AccⅡ和XhoⅠ酶切pRNAT-U6.2/Lenti-MTA1,回收475bp的MTA1siRNA单元:将MTA1 siRNA单元克隆入线形化pRNAT-U6.2/Lenti-Livin,经PCR筛选鉴定得到Livin和MTA1双基因沉默siRNA载体(pRNAT-U6.2/Lenti-Livin-MTA1)。与辅助包装质粒共转染293FT细胞,进行病毒包装;收集、纯化得到重组Livin和MTA1双基因沉默慢病毒颗粒。感染食管癌EC9706细胞,G418筛选得到稳定感染Livin和MTA1双基因沉默细胞株;荧光定量RT-PCR和Western-blot检测其沉默效果。对单一Livin基因沉默细胞株、单一MTA1基因沉默细胞株和Livin、MTA1双基因沉默细胞株,分别测定细胞生长曲线,Caspase-3活性,检测细胞凋亡和放射线敏感性的影响;测定细胞侵袭迁移能力。结果:1.构建出针对Livin和MTA1双基因沉默慢病毒siRNA载体pRNAT-U6.2/Lenti-Livin-MTA1,包装出Livin和MTA1双基因沉默慢病毒颗粒。2.筛选得到稳定Livin和MTA1双基因沉默的食管癌细胞株。3.Livin和MTA1双基因沉默慢病毒感染食管癌EC9706细胞,能够有效抑制细胞Livin和MTA1基因mRNA和蛋白的表达,与单一沉默Livin基因和MTA1基因的抑制效果相当。4.单一Livin基因沉默和Livin、MTA1双基因沉默,可使食管癌EC9706细胞生长速度显着减缓,凋亡率、Caspase-3活性和放射线敏感性显着增加,差异均有显着性(P＜0.05)。5.单一MTA1基因沉默和Livin、MTA1双基因沉默,可使食管癌EC9706细胞划痕愈合减缓和穿透胶能力降低。并且,Livin、MTA1双基因沉默细胞穿透胶能力降低的效果显着优于单一MTA1基因沉默细胞。第四部分:Livin和MTA1双基因沉默EC9706细胞裸鼠移植瘤的实验研究方法:用第叁部分建立的Livin和MTA1双基因沉默EC9706细胞株作为实验组,以第二部分建立的无关siRNA对照食管癌EC9706细胞株作为无关siRNA对照组,用未感染的食管癌EC9706细胞株作为空白对照组。培养上述3种细胞,分别接种5周龄的雌性BALB/c裸鼠。测量肿瘤大小绘制肿瘤生长曲线,28天后处死裸鼠,取肿瘤组织称重。荧光定量RT-PCR检测移植瘤组织中Livin、MTA1和PCNA mRNA的表达;免疫组化法检测移植瘤组织中Livin、MTA1蛋白的表达;流式细胞术检测移植瘤细胞的凋亡情况。结果:1.MTA1和Livin双基因沉默的食管癌EC9706细胞移植瘤,瘤体生长速度减慢。2.MTA1和Livin双基因沉默的食管癌EC9706细胞移植瘤平均重量为228.1mg,两个对照组分别为1265.6mg和1341.8mg,组间比差异有显着性(P＜0.05)。3.MTA1和Livin双基因沉默的食管癌EC9706细胞移植瘤细胞中PCNAmRNA表达量比两个对照组PCNA mRNA表达量显着降低,差异有显着性(P＜0.05)。4.MTA1和Livin双基因沉默的食管癌EC9706细胞移植瘤细胞凋亡率为12.75%,而2个对照组细胞凋亡率分别为1.53%和1.68%,差异有显着性(P＜0.05)。结论:1.食管癌组织中存在MTA1和Livin基因呈现高表达;MTA1基因表达与食管癌淋巴结转移密切相关。MTA1蛋白表达水平可能成为判断食管癌淋巴结转移的重要指标。2.成功构建出高效Livin和MTA1双基因沉默的慢病毒siRNA载体。3.筛选得到稳定Livin和MTA1双基因沉默的食管癌EC9706细胞株:Livin、MTA1单一基因沉默的食管癌EC9706细胞株。4.体外细胞实验证实,Livin和MTA1双基因沉默,可使食管癌EC9706细胞生长速度显着减缓,浸润和侵袭能力显着降低,肿瘤细胞凋亡率和放射线敏感性显着增加,并且效果优于单一基因沉默。5.裸鼠体内实验证实,沉默食管癌EC9706细胞MTA1和Livin双基因的表达后,可以有效的抑制移植瘤的生长,并且增加了肿瘤细胞凋亡。6.同时沉默Livin和MTA1基因的表达,有望成为食管癌靶向基因治疗的新方法。
陈星[6]2013年在《Livin、Survivin和Caspase-3在前列腺癌组织中的表达和意义及其相关性研究》文中指出目的：1.通过免疫组织化学染色方法，检测凋亡抑制蛋白Livin、Survivin在前列腺癌组织、前列腺增生组织中的表达情况，探讨Livin、Survivin在前列腺癌组织、前列腺增生组织中表达及其意义，判断Livin、Survivin是否为前列腺癌理想的瘤标，为前列腺癌的诊断和治疗提供新的靶点。2.分析前列腺癌组织中Livin、Survivin的表达与前列腺癌的临床分期、Gleason评分的关系以及Livin与Survivin的相关性，探讨通过Livin、Survivin的检测，辅助判断前列腺癌恶性程度和进展情况的可能性。3.通过检测Caspase-3在前列腺癌组织、前列腺增生组织中的表达，探讨Livin、Survivin与Caspase-3的相关性。方法：收集我院35例经直肠前列腺穿刺或手术切除病理证实的前列腺癌组织石蜡标本，15例经手术切除病理证实的前列腺增生组织石蜡标本，通过免疫组织化学染色方法，检测Livin、Survivin、Caspase-3在前列腺癌组织、前列腺增生组织中的表达情况。分析：（1）Livin、Survivin的表达在前列腺癌组织、前列腺增生组织的差异。（2）前列腺癌组织中Livin、Survivin的表达与前列腺癌的临床分期、Gleason评分的关系。（3）前列腺癌组织中Livin、Survivin与Caspase-3的相关性。结果1. Livin与前列腺癌的关系Livin在前列腺癌组织中的阳性表达率为94.29%（33/35）,在前列腺增生组织中的阳性表达率为80%（12/15）,前列腺癌组织中Livin的表达与前列腺增生组织的表达无显着差异性（P>0.05）。Livin在前列腺癌组织中的表达与患者的术前PSA、是否远处转移、Gleason评分、临床分期无关（P>0.05）。2. Survivin与前列腺癌的关系Survivin在前列腺癌组织中的阳性表达率为82.86%（29/35）,在前列腺增生组织中的阳性表达率为26.67%（4/15）,前列腺癌组织中Survivin的表达显着高于前列腺增生组织的表达（P<0.05）。Survivin在前列腺癌组织中的表达与患者的术前PSA、是否远处转移，Gleason评分、临床分期无关。（P>0.05）。3. Caspase-3与前列腺癌的关系Caspase-3在前列腺癌组织中的阳性表达率为20%（7/35）,在前列腺增生组织中的阳性表达率为60%（9/15）,前列腺癌组织中Caspase-3的表达显着低于前列腺增生组织的表达（P<0.05）。Caspase-3在前列腺癌组织中的表达与患者的术前PSA、是否远处转移、Gleason评分、临床分期无关（P>0.05）。4.Livin与Survivin的相关性在前列腺癌组织中Livin的表达与Survivin的表达无相关关系(P>0.05)。5.Livin与Caspase-3的相关性在前列腺癌组织中Livin的表达与Caspase-3的表达呈负相关关系(P<0.05)。6.Survivin与Caspase-3的相关性在前列腺癌组织中Survivin的表达与Caspase-3的表达呈负相关关系(P<0.05)。结论1.Livin在前列腺癌组织中的表达与前列腺增生组织中的表达均上调，但无显着差异性。提示Livin通过抑制细胞凋亡，对前列腺癌和前列腺增生的发生可能起重要的作用。但对鉴定前列腺组织的良、恶性方面无明显作用。Livin在前列腺癌中的表达与患者的术前PSA、是否远处转移、Gleason评分、临床分期无关。提示可能与前列腺癌的恶性程度、发展趋势及预后因素无关。2.Survivin在前列腺癌组织中的表达显着高于前列腺增生组织中的表达。提示Survivin在前列腺癌的发生中可能起重要的作用。Survivin在前列腺癌组织中的表达与患者的术前PSA、是否远处转移、Gleason评分、临床分期无关。提示可能与前列腺癌的恶性程度、发展趋势及预后因素无关。3.Caspase-3在前列腺癌组织中的表达显着低于前列腺增生组织中的表达。提示Caspase-3在前列腺癌组织中低表达，其促凋亡作用在前列腺癌的发生中可能受到抑制。Caspase-3在前列腺癌中的表达与患者的术前PSA、是否远处转移、Gleason评分、临床分期无关。提示可能与前列腺癌的恶性程度、发展趋势及预后因素无关。4.在前列腺癌组织中Livin的表达与Survivin的表达无相关关系，提示它们在抑制细胞凋亡过程可能有不同的机制。5.在前列腺癌组织中Livin的表达与Caspase-3的表达呈负相关关系，提示它们在细胞凋亡过程可能有共同的机制。6.在前列腺癌组织中Survivin的表达与Caspase-3的表达呈负相关关系，提示它们在细胞凋亡过程可能有共同的机制。
严玉霞[7]2008年在《靶向PKCα的反义核酸和siRNAs对肺癌A549细胞的作用》文中提出目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)介导的人蛋白激酶Cα(proteinkinase Cα,PKCα)基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响;筛选靶向PKCα的有效siRNAs序列,并检测其对A549细胞的作用,以期为PKCα反义核酸和PKCαsiRNAs应用于肺癌的基因治疗提供实验依据。方法:第一部分探讨PEI介导的人PKCαASODN对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响1.采用改良MTT法(WST法)和克隆形成抑制实验分析细胞生长增殖结果。2.流式细胞术(PI单染色和Annexin V+PI双染色)检测细胞凋亡。3.Hoechst33258染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变。4.RT-PCR和Western blot检测PKCα的表达水平。第二部分筛选靶向PKCα的有效siRNAs序列,并检测其对A549细胞的作用1.根据siRNA设计原则,综合利用多种siRNA设计软件,设计出6条靶向PKCα的siRNAs序列,blast排除同源序列,候选序列交由公司化学合成。同时化学合成阴性对照siRNA和阳性对照siRNA。2.以法国Polyplus Transfection公司的siRNA转染试剂Interferin~(TM)介导siRNAs转染A549细胞,通过WST法及RT-PCR筛选出有效的siRNAs序列。3.将3条效果较好的PKCαsiRNAs进一步转染A549细胞,采用克隆形成抑制实验检测A549细胞的克隆形成能力的变化;Hoechst33258染色观察凋亡细胞的形态学改变;PI单染流式细胞术检测细胞亚二倍体峰;Annaxin V/PI双染流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Western blot检测细胞PKCα的蛋白水平。结果:第一部分:1,PEI介导的PKCαASODN转染A549细胞后,细胞生长增殖和克隆形成均显着被抑制(P＜0.05),并呈浓度依赖关系。2.流式细胞术显示:空白对照组、PEI组、PEI介导的随机寡核苷酸(randomoligodeoxynucleotide,RODN)组亚二倍体百分率分别为2.0±0.1,4.5±0.3,5.8±0.7,而PEI介导的PKCαASODN(1.5μmol/L)转染组亚二倍体百分率为13.3±1.2(P＜0.05);空白对照组、PEI组、PEI介导的RODN组早期凋亡细胞百分率分别为2.7±0.5,2.8±0.2,3.0±0.4,而PEI介导的PKCαASODN(1.5μmol/L)转染组早期凋亡细胞百分率为17.1±1.0(P＜0.05)。3.Hoechst33258染色和电镜检测均可见PEI介导的PKCαASODN转染组A549细胞有核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化。4.RT-PCR和Western blot结果均表明:PEI介导的PKCαASODN转染A549细胞能明显下调PKCα的表达,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,有统计学意义(P＜0.05)。第二部分:1.设计出6条PKCαsiRNAs,分别命名为No.1、No.2、No.3、No.4、No.5、No.6PKCαsiRNA。2.WST法结果显示:6条PKCαsiRNAs(50 nmol/L)转染A549细胞48h后,除No.5siRNA外均显着地抑制了A549细胞增殖,与空白对照组,转染试剂Interferin~(TM)对照组和阴性对照组相比有统计学意义(P＜0.05)。3.RT-PCR检测显示:与空白对照组,转染试剂Interferin~(TM)对照组和阴性对照组相比,6条PKCαsiRNAs(50 nmol/L)转染A549细胞48 h均显着下调了PKCαmRNA水平(P＜0.05)。4.综合以上WST法和RT-PCR两实验结果,筛选出3条效果较好的PKCαsiRNAs序列,依次为No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNA。5.克隆形成抑制实验显示:1nmol/L No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNAs转染A549细胞7天,克隆形成明显受抑,抑制率(%)分别为69.44±4.12,56.82±4.95,49.75±3.21,与空白对照组,转染试剂Interferin~(TM)对照组和阴性对照组相比有统计学意义(P＜0.05)。6.Hoechst 33258染色可见50nmol/L No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNAs转染A549细胞48h均出现了核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化。7.流式细胞术显示:与空白对照组、转染试剂Interferin~(TM)对照组和阴性对照组相比,50nmol/L No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNAs转染组A549细胞亚二倍体百分率和早期凋亡细胞比例均明显增高(P＜0.01)。8.Western blot结果表明:50nmol/L No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNAs转染A549细胞72h均明显下调了PKCα蛋白的表达,与空白对照组、转染试剂Interferin~(TM)对照组和阴性对照组相比,有统计学意义(P＜0.05)。结论:1.PEI介导的PKCα反义寡核苷酸能下调PKCα基因的表达,显着抑制A549细胞增殖和克隆形成,并诱导A549细胞凋亡。2.本实验中设计的6条PKCαsiRNAs都能下调PKCα基因的mRNA水平,抑制A549细胞增殖,其中No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNAs效果较好。No.3、No.6、No.1 PKCαsiRNAs均能显着地抑制A549细胞克隆形成和PKCα蛋白的表达,并诱导A549细胞凋亡。3.PKCαsiRNAs的有效作用浓度(致A549细胞增殖抑制率达50%时的作用浓度为50nmol/L)远低于PKCαASODN(致A549细胞增殖抑制率达50%时的作用浓度约为1.0μmol/L),可以在低于反义寡核苷酸约20倍的浓度下发挥与反义寡核苷酸相同的作用。
张帆[8]2009年在《凋亡抑制基因Livin在子宫内膜癌中的表达及其与细胞增殖、凋亡相关性的研究》文中进行了进一步梳理目的通过检测Livin基因在子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中的表达,分析子宫内膜癌中Livin基因表达水平及其与临床病理参数的关系和对细胞增殖凋亡的影响,探讨其在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法用免疫组化S-P方法、RT-PCR和Western-blot方法检测35例子宫内膜癌和30例正常子宫内膜组织中Livin基因表达;用流式细胞术检测子宫内膜癌细胞的增殖活性和凋亡水平。结果1.Livin基因在子宫内膜癌组织中的表达情况:用免疫组化方法检测,Livin基因在35例子宫内膜癌组织中表达阳性率为62.86%(22/35),在30例正常子宫内膜组织中阳性率为0%(0/30),两者间差异具统计学意义(P＜0.01)。用RT-PCR和Western-blot方法检测,Livin基因在35例子宫内膜癌组织中表达阳性率为68.57%(24/35),在30例正常子宫内膜组织中阳性率为0%(0/30),两者间差异具统计学意义(P＜0.01);两种异构体基本同时表达;RT-PCR和Western-blot两种检测方法结果一致。2.Livin基因的表达与子宫内膜癌组织临床病理特征的关系:Livin基因的表达与子宫内膜癌组织临床病理分期有关(P＜0.05),而与患者年龄、病理类型、分化程度、浸润深度和淋巴转移无关(P＞0.05)。3.子宫内膜癌组织Livin基因表达与肿瘤细胞增殖的相关性:35例子宫内膜癌组织的细胞增殖指数(PI)平均为(29.42±5.58)%。24例患者Livin基因阳性表达,11例Livin基因阴性表达,PI分别为(31.55±6.19)%和(27.00±4.26)%,两者比较差异具统计学意义(t=2.598,P＜0.05)。4.子宫内膜癌组织中Livin基因表达与肿瘤细胞早期凋亡的相关性:35例子宫内膜癌组织的肿瘤细胞早期细胞凋亡率平均为(1.87±0.29)%。24例患者Livin基因阳性表达,11例Livin基因阴性表达,早期凋亡率分别为(1.79±0.25)%和(1.96±0.37)%,两者比较差异具统计学意义(t=2.146,P＜0.05)。结论1、Livin基因在子宫内膜癌中高表达,而在正常子宫内膜组织中不表达。2、Livin基因的表达与子宫内膜癌组织临床病理分期有关而与患者年龄、病理类型、分化程度、浸润深度和淋巴结转移无关。3、子宫内膜癌组织Livin基因表达与肿瘤细胞增殖有关。4、子宫内膜癌组织Livin基因表达与肿瘤细胞早期凋亡有关。
参考文献：
[1]. Livin异构体在NSCLC中的表达及其基因沉默诱导肺癌细胞凋亡研究[D]. 孙建国. 第叁军医大学. 2004
[2]. Livin与Caspase 9在非小细胞肺癌中的表达及相关性分析[D]. 郝伶俐. 安徽医科大学. 2009
[3]. 凋亡抑制因子Livin在人非小细胞肺癌中的表达及与Caspase-3、Ki-67相关性的实验研究[D]. 董凌云. 苏州大学. 2008
[4]. Livin基因在非小细胞肺癌中表达的分子生物学特性[J]. 严丽荣, 李坚. 江苏大学学报(医学版). 2008
[5]. 食管癌EC9706细胞Livin和MTA1双基因沉默的实验研究[D]. 杨松华. 郑州大学. 2008
[6]. Livin、Survivin和Caspase-3在前列腺癌组织中的表达和意义及其相关性研究[D]. 陈星. 福建医科大学. 2013
[7]. 靶向PKCα的反义核酸和siRNAs对肺癌A549细胞的作用[D]. 严玉霞. 暨南大学. 2008
[8]. 凋亡抑制基因Livin在子宫内膜癌中的表达及其与细胞增殖、凋亡相关性的研究[D]. 张帆. 苏州大学. 2009
标签：肿瘤学论文; 细胞凋亡论文; 肿瘤论文; 淋巴结转移论文; 肺癌转移论文; 肺癌论文; 基因合成论文; 细胞转染论文; 前列腺癌论文; 食管癌论文; 癌症论文;