表达绿色荧光蛋白的重组鸡痘病毒的构建

论文摘要

[目的]旨在构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组鸡痘病毒。[方法]使用overlap PCR进行表达载体质粒的构建,使用菌液PCR和测序技术进行了鉴定;使用鸡胚成纤维细胞作为重组鸡痘病毒同源重组的介质,尝试了可能影响重组鸡痘病毒构建的不同条件;最后使用PCR和Western Blot方法对重组病毒进行了鉴定。[结果]将人工合成的痘苗病毒早晚期启动子SP与绿色荧光蛋白基因一同插入到鸡痘病毒载体质粒的多克隆位点,挑取LA平板上的重组子,菌液PCR及测序验证鉴定结果为阳性;利用重组质粒转染被野生鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞制备重组病毒,利用倒置荧光显微镜观察到含有重组病毒的在激发光下呈绿色的细胞;改进重组质粒转染的条件以达到更好的重组病毒包装成效,研究得出被野生痘病毒感染的细胞进行重组质粒传染制备重组病毒的效率是用野生痘病毒感染已转染重组质粒的细胞的6倍,且感染用野生病毒滴度高时重组病毒的制备效果更好;最后,用PCR方法和Western Blot方法对重组病毒进行鉴定,鉴定结果为阳性。[结论]成功构建了表达GFP的重组鸡痘病毒。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郑阳臣,尹丽娟,刘大才

关键词: 鸡痘病毒载体,基因,重组病毒包装

来源: 生物技术 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学生命科学学院

基金: 中山大学实验室开放基金项目(KF201326),国家自然科学基金项目(J1310025)

分类号: Q784

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.05.0072

页码: 426-433

总页数: 8

文件大小: 1049K

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标签：鸡痘病毒载体论文;  基因论文;  重组病毒包装论文;