基于免疫彩色纳米微球的犬瘟热病毒抗体检测凝集试验

基于免疫彩色纳米微球的犬瘟热病毒抗体检测凝集试验

论文摘要

为建立以红色聚苯乙烯纳米微球为载体,快速检测幼犬犬瘟热病毒(CDV)母源抗体或免疫犬抗体水平的间接凝集试验,本研究表达纯化了CDV H截短的重组蛋白rsH2,并以rsH为致敏原与纳米微球偶联制备了免疫彩色纳米微球;通过间接凝集反应条件的优化,特异性、敏感性、稳定性试验和临床样品的检测,建立了一种快速检测CDV抗体的间接凝集试验。特异性结果显示,致敏微球仅与CDV阳性血清发生凝集反应,不与狂犬病病毒、犬腺病毒和犬细小病毒的阳性血清发生凝集反应,特异性强;凝集试验可检测血清中和抗体的最低效价为1∶35;不同批次制备的致敏微球和4℃保存90 d的致敏微球的凝集反应特异性一致,凝集程度无明显差异,重复性稳定性好;该凝集试验对45份血清样品的检测结果与CDV抗体检测试剂盒检测结果的阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的检测CDV抗体的间接凝集试验具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为CDV抗体检测提供了一种快速、简便、准确、经济的检测方法。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要试验材料
  •   1.2 引物的设计与合成
  •   1.3 sh基因的克隆与表达
  •     1.3.1 sh基因的克隆
  •     1.3.2 重组蛋白rsH的表达
  •     1.3.3 重组蛋白的纯化及鉴定
  •     1.3.4 rsH免疫兔血清中和抗体效价的检测
  •   1.4 CDV抗体间接凝集检测方法的建立
  •   1.5 特异性试验
  •   1.6 敏感性试验
  •   1.7 重复性、稳定性试验
  •   1.8 临床样品检测
  • 2 结果
  •   2.1 重组蛋白rsH的表达、纯化及鉴定
  •     2.1.1 基因sh的克隆与表达
  •     2.1.2 rsH的纯化及鉴定
  •   2.2 CDV抗体检测间接凝集方法的建立
  •   2.3 特异性试验
  •   2.4 敏感性试验
  •   2.5 重复性、稳定性试验
  •   2.6 临床样品检测结果的比较
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 苏瑞红,冯启峥,唐毓,侯美佳,孙思萌,董秀梅,张萍,姜岩,师东方

    关键词: 犬瘟热病毒,彩色聚苯乙烯纳米微球,间接凝集试验,抗体检测

    来源: 中国兽医科学 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 东北农业大学动物医学学院,农业部动物疫病病原生物学东北科学观测实验站

    基金: 国家科技支撑计划项目(2012BAD12B03),农业部动物疫病病原生物学东北科学观测实验站观测项目

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0145

    页码: 947-953

    总页数: 7

    文件大小: 1128K

    下载量: 158

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