导读:本文包含了乳腺表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:高原鼠兔,瘦素蛋白,乳腺上皮细胞,乳腺特异表达载体
乳腺表达载体论文文献综述
庞礴,于鸿浩,张湑泽,谢玲,付林[1]（2019）在《高原鼠兔瘦素蛋白乳腺特异表达载体的构建及细胞表达》一文中研究指出瘦素(Leptin)蛋白是调节机体能量代谢的关键因子之一。前期研究显示高原鼠兔Leptin蛋白发生了适应性进化。功能实验表明,在温暖或寒冷条件下高原鼠兔Leptin通过减少食物摄取和增加能量消耗调节能量平衡,显示了其调节适应性产热过程的潜力。本研究以高原鼠兔Leptin cDNA为模板扩增高原鼠兔obese (ob)基因编码区序列504 bp,改造并构建哺乳动物真核细胞乳腺特异表达载体pBC1-lep,同时通过组织块法原代培养建立奶山羊乳腺上皮细胞系,并通过pBC1-lep质粒脂质体法转染及转基因细胞的筛选,成功获得转染Leptin的阳性细胞。本研究为利用转基因动物实现奶山羊乳腺中特异表达高原鼠兔Leptin提供了一条可能的途径,完成了乳腺特异真核表达载体的构建。(本文来源于《兽类学报》期刊2019年01期）
赵子骄,姜平,于海滨,房希碧,赵志辉[2]（2017）在《肉碱棕榈酰基转移酶2过表达载体构建及在奶牛乳腺上皮细胞中验证》一文中研究指出为进一步研究CPT2基因在脂质代谢中的作用,试验构建了绿色荧光CPT2过表达载体,将其转入奶牛乳腺上皮细胞,通过荧光定量方法,检测CPT2基因mRNA的表达水平差异,在细胞水平验证了CPT2过表达载体的表达效率。结果表明:过表达组的CPT2基因mRNA表达量与对照组(空载组)相比有所提高。说明CPT2过表达载体转染奶牛乳腺上皮细胞后,CPT2基因mRNA表达水平显着升高。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2017年21期）
徐洪龙,贡继尚,高珊,侯书宝,张全伟[3]（2017）在《人源抗菌肽LL-37真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达》一文中研究指出【目的】使人源抗菌肽LL-37在真核表达载体中获得高效表达.【方法】采用RT-PCR技术,从人的血样中扩增出LL-37基因片段,并将其连接至pcDNA3.1-His-V5(+)载体.通过脂质体介导法将重组质粒转入奶牛乳腺上皮细胞,G418筛选获得稳定阳性细胞株,并且利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因在转录及翻译水平的表达情况.【结果】RT-PCR结果显示,经转染的乳腺上皮细胞能够扩增出523bp的LL-37基因.qRT-PCR结果发现,LL-37mRNA在转染后的不同时期均有表达,经稳定转染的表达量最高.通过Western-blot检测,获得了约17kU的目的蛋白.【结论】结果表明,LL-37基因成功整合至奶牛乳腺上皮细胞并能够正确表达,这为构建分泌LL-37蛋白的奶牛乳腺生物反应器提供了依据.(本文来源于《甘肃农业大学学报》期刊2017年05期）
赵尧璐,于海滨,于仙忠,夏立新,吕文发[4]（2017）在《GPAM基因过表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达》一文中研究指出线粒体3-磷酸甘油酰基转移酶(GPAM,glycerol-3-phosphate acyltransferase)是一种具有编码蛋白质功能的基因,位于牛的26号染色体上。GPAM酶参与催化叁酰基甘油和磷脂生物合成反应的第一步,继而对甘油叁酯的量进行调控,是生物体内一个必不可少的酶。试验以中国荷斯坦牛RNA反转录成cDNA,继而PCR扩增出GPAM片段,并连入pBI-CMV3载体,构建了pBI-CMV3-GPAM真核表达载体,并验证了其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达情况。结果表明:成功构建了牛GPAM真核表达载体,并在体外奶牛乳腺上皮细胞中高效表达。(本文来源于《吉林农业大学学报》期刊2017年02期）
郝俊芳,黄凯,王月影,杜丽丽,钟凯[5]（2016）在《炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性反应中的表达及miR-223真核表达载体的构建》一文中研究指出小分子RNA(miRNA)是近年来发现的一类内源性、非编码单链小RNA,其在乳腺组织免疫防御过程中发挥的调控作用逐渐引起了人们的关注。作者拟用qRT-PCR检测炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应中的表达变化;构建3种miR-223真核表达载体并检验重组载体的转染效率。用不同浓度LPS处理小鼠乳腺上皮细胞(EpH4-Ev)48h,qRT-PCR检测miR-223、miR-146a、miR-181a和miR-155的表达变化。以EpH4-Ev细胞基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-223序列,以质粒Minicircle、pcDNA3.1(+)和转座子piggyBac为母本构建3种miR-223真核表达载体,将其转染EpH4-Ev细胞,通过观察荧光、qRT-PCR检测miR-223的表达,评价重组质粒转染效率。结果:qRT-PCR检测结果表明,LPS诱导EpH4-Ev细胞炎症反应时,4种炎症相关miRNAs的表达均显着(P<0.05或P<0.01)增加,并呈现不同程度的剂量依赖性;重组质粒转染EpH4-Ev细胞后,qRT-PCR检测结果显示,Mini-miR-223质粒转染组的miR-223表达水平无统计学差异(P>0.05);PBmiR-223和pcDNA-miR-223转染EpH4-Ev细胞后,miR-223的表达均极显着(P<0.001)增加。本研究表明炎症相关miRNAs参与LPS诱导小鼠EpH4-Ev细胞的炎性反应过程。成功构建3种miR-223真核表达载体,为后续miRNAs在乳腺炎症反应中的功能研究奠定基础。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2016年01期）
张小灵,葛俊伟,李玉龙[6]（2015）在《奶牛bTAP蛋白表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达》一文中研究指出奶牛气管抗菌肽是一种具有较强抗菌活性的抗菌小肽。实验从奶牛气管组织中提取总RNA,反转录成c DNA,以此为模板,用奶牛气管抗菌肽特异性PCR引物扩增奶牛气管抗菌肽基因,然后将其连入载体p CMV-C-e GFP中构建奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并将此载体转染进奶牛乳腺上皮细胞中,分别运用荧光蛋白观察和细菌记数等方法检测b TAP-GFP蛋白在细胞中的表达及其对大肠杆菌的抗菌活性。试验结果表明,试验成功的建立了奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并且此重组载体能在奶牛乳腺上皮细胞中正常表达具有抗大肠杆菌活性的b TAP-GFP蛋白。(本文来源于《畜牧兽医科技信息》期刊2015年05期）
罗婵,任艳萍,屈春凤,李海洋,李湘萍[7]（2015）在《启动子和PolyA序列对水牛乳腺特异性表达载体表达效率的影响》一文中研究指出为了获得能有效表达促乳素的乳腺特异性表达载体,本研究系统比较了不同长度的启动子和有/无PolyA序列对乳腺特异性表达载体表达标记基因绿色荧光蛋白(GFP)和目的基因促乳素(PRL)的影响。将不同载体瞬时转染Bcap37细胞后,分别用实时定量PCR和流式细胞仪检测PRL和GFP的表达水平。结果表明:长度为5.2 kb的β-酪蛋白(Beta casein,BCN)启动子启动PRL的表达量显着高于长度为3.8 kb启动子,前者的表达量约为后者的6倍;在BCN启动子长度均为5.2 kb情况下,添加PolyA的载体p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP-Neo组PRL的相对表达量为8.17,p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP组PRL的相对表达量为17.84,均显着高于p5.2BCNPRL-CMV-GFP-Neo组,可见添加PolyA后,PRL的表达量均显着增加;进一步比较发现,含PolyA的载体中GFP的表达水平也显着高于不含PolyA的载体。对比以上结果发现,添加PolyA能够有效解除启动子之间的转录干扰,使标记基因的启动子CMV和目的基因的启动子BCN均能顺利启动基因表达。经过优化的载体启动目的基因PRL表达的效率更高,可应用于下一步的研究工作中。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2015年09期）
张曼[8]（2015）在《奶山羊BLG基因调控序列指导的乳腺特异性表达载体的构建和优化》一文中研究指出乳腺生物反应器是用乳蛋白基因启动子和调控区指导外源基因在动物乳腺中定位表达。乳腺生物反应器的应用价值与外源基因表达水平的高低相关。乳腺生物反应器制备的关键是乳腺特异性表达载体的构建,而启动子的选择是乳腺表达载体构建的核心。为了使外源基因在转基因动物乳腺中能够高效特异地表达,本实验以西农萨能奶山羊β-乳球蛋白基因为研究对象,扩增了山羊的5ˊ侧翼区,内含子1、内含子2和3ˊ端调控区域序列,构建了真核表达载体,初步探讨了该启动子的活性和表达特异性。结果如下:(1)利用高保真PCR方法克隆了奶山羊β-乳球蛋白基因启动子(2.1 kb,包括5'侧翼区和部分第一外显子),3'端调控成分(最后一个不翻译外显子,内含子和3'侧翼区)及第一内含子和第二内含子。测序分析表明,与其他反刍动物相比较,奶山羊BLG基因5'端调控序列保守性优于3'端调控成分。(2)为了筛选出启动效率高的启动子片段,在下游引物相同的条件下,以克隆的β-乳球蛋白基因2.1 kb启动子为模板,进行删减分析。分别扩增了2081 bp(﹣2041/+40),1981 bp(﹣1941/+40),1881 bp(﹣1841/+40),1681 bp(﹣1641/+40),1481 bp(﹣1441/+40),1281 bp(﹣1241/+40),1081 bp(﹣1041/+40),881 bp(﹣841/+40),681 bp(﹣641/+40),481 bp(﹣441/+40),431 bp(﹣391/+40),381 bp(﹣341/+40)和331 bp(﹣291/+40)共13个片段,将其分别插入质粒PGL4.10的多克隆位点,并分别转染HC11、293T和山羊胎儿成纤维细胞,通过双荧光素酶报告基因检测发现,山羊BLG基因的启动子具有组织特异性,片段大小为431 bp(﹣391/+40)时启动子活性最高。(3)为了探究内含子在基因表达中的作用,我们以pEGFP-C1为骨架载体,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切,用431 bp(﹣391/+40)启动子替换pEGFP-C1的启动子CMV,以克隆的内含子1、内含子2和3ˊUTR为调控元件构建载体pE-BLGU11,pE-BLGIN1U11和pE-BLGINU。通过qRT-PCR和Western blot,在mRNA和蛋白质表达水平上检测内含子在基因表达中的作用。结果显示BLG基因的内含子具有增强基因表达的作用,且第一内含子的作用比第二内含子作用更为明显。本实验通过PCR克隆并分析了奶山羊β-乳球蛋白基因的启动子序列,通过梯度删减筛选出启动效率最高的启动子区域;以pEGFP-C1为骨架,证明了β-乳球蛋白基因的内含子具有增强子的作用。利用克隆的调控元件构建了山羊乳腺特异性表达载体,为提高外源基因在乳腺组织中的表达及乳腺生物反应器的制备奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
马兰,朱德儒,李金龙[9]（2014）在《奶牛乳铁蛋白肽真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达》一文中研究指出实验用奶牛乳铁蛋白肽特异性PCR引物从奶牛乳腺组织中扩增奶牛乳铁蛋白肽基因,然后将其连入p CMV-N-e GFP载体中,构建奶牛乳铁蛋白肽的真核表达载体GFP-Lfcin B,并将其转染进奶牛乳腺上皮细胞中,分别运用蛋白质免疫印记和牛津杯法等方法检测GFP-Lfcin B蛋白在细胞中的表达及其对金黄色葡萄球菌的抗菌活性。结果表明,试验成功的建立了奶牛乳铁蛋白肽的真核表达载体GFP-Lfcin B,并且此重组载体能在奶牛乳腺上皮细胞中正常表达具有抗金黄色葡萄球菌活性的GFP-Lfcin B蛋白。(本文来源于《畜牧兽医科技信息》期刊2014年09期）
王春生,李咏乐,仇雨歌,朴善花,安铁沫[10]（2014）在《转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选》一文中研究指出[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法;[方法]本研究将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以其获得转基因阳性细胞;[结果]当采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/mL)筛选获得转基因阳性细胞:转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞的形态和生长曲线;PCR鉴定结果,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十八次学术研讨会论文集》期刊2014-09-19）
乳腺表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为进一步研究CPT2基因在脂质代谢中的作用,试验构建了绿色荧光CPT2过表达载体,将其转入奶牛乳腺上皮细胞,通过荧光定量方法,检测CPT2基因mRNA的表达水平差异,在细胞水平验证了CPT2过表达载体的表达效率。结果表明:过表达组的CPT2基因mRNA表达量与对照组(空载组)相比有所提高。说明CPT2过表达载体转染奶牛乳腺上皮细胞后,CPT2基因mRNA表达水平显着升高。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乳腺表达载体论文参考文献
[1].庞礴,于鸿浩,张湑泽,谢玲,付林.高原鼠兔瘦素蛋白乳腺特异表达载体的构建及细胞表达[J].兽类学报.2019
[2].赵子骄,姜平,于海滨,房希碧,赵志辉.肉碱棕榈酰基转移酶2过表达载体构建及在奶牛乳腺上皮细胞中验证[J].黑龙江畜牧兽医.2017
[3].徐洪龙,贡继尚,高珊,侯书宝,张全伟.人源抗菌肽LL-37真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达[J].甘肃农业大学学报.2017
[4].赵尧璐,于海滨,于仙忠,夏立新,吕文发.GPAM基因过表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达[J].吉林农业大学学报.2017
[5].郝俊芳,黄凯,王月影,杜丽丽,钟凯.炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性反应中的表达及miR-223真核表达载体的构建[J].畜牧兽医学报.2016
[6].张小灵,葛俊伟,李玉龙.奶牛bTAP蛋白表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达[J].畜牧兽医科技信息.2015
[7].罗婵,任艳萍,屈春凤,李海洋,李湘萍.启动子和PolyA序列对水牛乳腺特异性表达载体表达效率的影响[J].中国畜牧杂志.2015
[8].张曼.奶山羊BLG基因调控序列指导的乳腺特异性表达载体的构建和优化[D].西北农林科技大学.2015
[9].马兰,朱德儒,李金龙.奶牛乳铁蛋白肽真核表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达[J].畜牧兽医科技信息.2014
[10].王春生,李咏乐,仇雨歌,朴善花,安铁沫.转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选[C].中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十八次学术研讨会论文集.2014