改进的多片段重叠延伸PCR制作基因多位点突变

论文摘要

为在研究工作中提高制作目标基因多位点突变体的效率,对常规重叠延伸PCR进行适当改进:对于相距较近的两个突变位点,只需设计一对突变引物各自涵盖其中一个位点即可一次突变;对于相距较远的两个位点,可以采用三片段重叠延伸PCR的办法解决;两者结合则可一次性突变多个位点。以制作RBCT的6位点突变体PSM6为例,利用上述策略,设计两对突变引物;采用OE-PCR法,第一轮PCR扩增出三个片段,第二轮PCR同时利用三片段重叠延伸产物作为模板扩增出目标基因突变体,再按常规分子克隆方法将其连入质粒载体。经测序检测,发现得到了预期的目标基因多位点突变体。因此,采用灵活的引物设计策略,结合多片段重叠延伸PCR即可一次性制作基因的多位点突变体,此方案可解决研究工作中大多数多位点突变问题。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨林,王柳月,李慧美,陈华波

关键词: 重叠延伸,多位点突变,磷酸化位点突变体

来源: 中国生物工程杂志 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 湖北文理学院医学院

基金: 湖北省自然科学基金(2016CFB318)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20190807

页码: 52-58

总页数: 7

文件大小: 497K

下载量: 270

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