导读:本文包含了转基因发根论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:毛状根,植株再生,生长素,DR5
转基因发根论文文献综述
肖璇[1]（2014）在《发根农杆菌介导的柑橘遗传转化体系建立及转基因柑橘溃疡病抗性分析》一文中研究指出柑橘作为世界重要果树在各产区地方经济中占据重要地位。本研究以‘早金’甜橙及枳无菌苗上胚轴为外植体,建立了发根农杆菌介导的遗传转化和植株再生体系；在此基础上,将生长素应答体系DR5::GUS-YFP融合基因成功导入枳,获得转化毛状根及再生植株；借助生长素报告体系对枳毛状根及其再生植株内源生长素分布进行了观察和阐述。本研究还对已获得的转水稻Xa21基因‘暗柳’甜橙(Citrus sinensis Osbeck 'Anliu')进行了分子鉴定和抗病性分析。主要结果如下：1.以柑橘接穗品种‘早金’甜橙及砧木品种枳无菌苗上胚轴为试材,建立了发根农杆菌MSU440介导的红色荧光蛋白基因DsRED1转化柑橘及植株再生体系。发根农杆菌侵染20min,21℃共培养3d,上胚轴切段在添加400mg/L cef的无激素MT基本培养基上培养2-3W可获得毛状根；利用PCR扩增及荧光观察的方法对转化毛状根进行了鉴定并以毛状根为材料进一步获得了转基因再生植株。‘早金’甜橙毛状根再生植株表现出株型矮化、节间短缩及根系发达等特征；枳毛状根再生植株与非转化对照相比,地上部分表型无显着差异,部分植株不定根有所增多。2.利用发根农杆菌MSU440将生长素报告体系DR5::GUS-YFP导入枳,获得转化毛状根并再生植株。YFP荧光观察、GUS染色及PCR扩增均表明,双元载体及Ri质粒T-DNA已共整合到枳毛状根基因组；GUS染色表明,毛状根共转化率达68.3%。借助DR5::GUS-YFP报告体系,对毛状根及其侧根生长素分布进行观察表明,毛状根及其侧根根尖生长素分布最多,主要集中在根尖静止中心和根冠小柱；侧根发育过程中,侧根原基早期发育阶段在毛状根特定中柱鞘细胞中出现生长素积累；侧根原基形成过程中在原基顶端积累生长素,逐步形成生长素分布梯度。DR5::GUS-YFP在毛状根根尖的表达受生长素浓度调控,NAA处理增强其表达活性,TIBA处理则降低其表达活性。以毛状根为材料进一步建立了转基因植株再生体系。毛状根切段在含1mg/L6-BA的MT固体培养基上首先诱导出瘤状愈伤组织并进一步发育成丛生芽,经芽伸长和再生芽生根途径形成完整植株。Southern杂交及qRT-PCR表达分析表明DR5::GUS-YFP融合基因已稳定整合到枳再生植株基因组并均有表达。毛状根体系是枳根系发育研究的有效工具,发根农杆菌介导的遗传转化体系为柑橘遗传改良提供了新的方法。3.以转DR5::GUS-YFP融合基因枳再生植株为材料,对根、茎、叶内源生长素分布及应答进行了观察；结果显示在根尖、茎尖及幼叶边缘分泌结构及气孔均有生长素累积；推测局部生长素积累与根尖及茎尖分生组织细胞持续分裂能力的维持有关,生长素还可能参与了叶片气孔和分泌结构的分化。茎表皮及皮层未观察到生长素积累,茎韧皮部生长素分布明显,推测茎尖及幼叶合成的生长素主要通过茎韧皮部向根运输。对生长素类似物NAA或生长素极性运输抑制剂TIBA处理下根、茎等部位DR5启动子应答反应进行了观察。NAA处理可增加根尖末端生长素积累,从而增强DR5::GUS-YFP的表达；TIBA处理则减弱根尖生长素的积累,降低DR5::GUS-YFP的表达；不同转化系对外源NAA处理的应答强度不同,R54转化系根尖对NAA的响应比R28更灵敏；相同NAA浓度处理下,其DR5::GUS-YFP表达更显着。4.对转水稻Xa21基因‘暗柳’甜橙再生植株进行了分子鉴定和抗病性分析。利用聚合酶链式扩增反应(polymerase chain reaction, PCR),从转Xa21暗柳橙再生植株中扩增出1.4kb左右预期大小的Xa21基因片段；Southern杂交分析表明Xa21基因以单拷贝的方式整合到‘暗柳’甜橙基因组。对T1-T8等8个转基因株系进行了qRT-PCR表达分析,表明Xa21基因在8个检测株系中均有表达,表达量大致可分为低(T1、T2、T3、T7、T8)、中(T4)、高(T5、T6)叁个水平。离体叶片针刺接种试验表明,叁个转化系均增强了对柑橘溃疡病菌的抗性,其中T4转化系抗病性最强。对水稻Xa21基因诱导柑橘先天性免疫的机理进行了初步分析。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
杨致荣,王兴春,薛金爱,李润植[2]（2012）在《发根农杆菌介导的长春花高效转基因体系的建立》一文中研究指出以长春花幼叶为外植体建立了发根农杆菌介导的长春花高效遗传转化体系,主要技术环节为:用携带有基因表达载体的发根农杆菌R1000侵染幼嫩叶片,侵染的叶片外植体与发根农杆菌共培养2d,外植体移至除菌培养基除菌培养2～3周,切取外植体上诱导长出的毛状根置于筛选培养基上培养1～2周,最后对筛选出的阳性毛状根无性系进行扩繁。筛选出的阳性毛状根经GUS染色和PCR分子鉴定表明,该方法的发根诱导率和阳性转化率分别为82%±2.49%和100%。该转化方法所获得的毛状根系数量大、质量高、遗传稳定且所需时间短,明显优于现有的长春花遗传转化技术,是长春花遗传转化的高效便捷体系。(本文来源于《植物生理学报》期刊2012年10期）
曹庆丰[3]（2012）在《发根农杆菌K599侵染黄瓜形成转基因毛状根的初步研究及orf14基因的克隆》一文中研究指出发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)侵染植物外植体能诱导产生转基因毛状根(hairy root)。获得的毛状根起源于单细胞而无嵌合体,并能在无植物激素的培养基上自主性快速生长。毛状根可直接作为植物根部线虫等病虫害的宿主；还可应用于环境修复；也可以作为生物反应器,用于生产外源基因表达的蛋白产物和药用植物的活性成分。毛状根是发根农杆菌Ri质粒中的T-DNA插入、整合到植物细胞基因组中表达的结果。转基因植物中外源基因的稳定遗传和高效表达是毛状根具有利用价值的前提条件。本研究利用发根农杆菌K599侵染黄瓜不同外植体获得毛状根,对T-DNA在毛状根中整合的完整性进行了分析；并对长期培养的毛状根中外源基因的稳定性及其表达进行了分析；此外,从发根农杆菌K599中克隆了其T-DNA上的orf14基因,构建了pRI101-AN-orfl4-gfp植物表达载体,orf14基因与gfp形成融合蛋白,便于Orf14基因功能的分析。主要研究结果如下：1.利用发根农杆菌K599(属于黄瓜碱型,带内生质粒pRi2659和外源质粒pRI101-AN-gfp)侵染黄瓜不同外植体,其中活体下胚轴和上胚轴的生根效率最高,诱导率均达到了100%。同时获得了较细、分枝多、生长快(Ⅰ型),粗壮、分枝少、生长较慢(Ⅱ型)两种不同形态的毛状根。本研究建立了一种快捷、高效的毛状根诱导方法,而且为毛状根发生的分子机理的研究以及T-DNA整合规律与毛状根形态相关性的研究提供了材料。2.对30个独立培养的毛状根根系,进行了PCR检测,分析了T-DNA在毛状根中整合的完整性。内生质粒pRi2659T-DNA上的11个基因orf2、orf3、orf4、orf8、 rolA、rolB、rolC、rolD、rolE、orfl4、cus以及外源质粒pRI101-AN-gfp T-DNA上的外源基因gfp都插入整合到了植物基因组中。初步分析了发根农杆菌K599介导的转基因过程中T-DNA插入的完整性。3.对固体培养基上培养3y的黄瓜转gfp基因毛状根进行分析,由组成型启动子35S驱动的gfp基因在转录水平上能正常表达,而且能够翻译出编码蛋白；此外,培养3y后的毛状根,能扩增出与毛状根形态构成有关的rol系列基因。本研究结果表明长期培养的毛状根能保持其遗传稳定性,这为利用毛状根长期工厂化生产外源基因表达的蛋白产物和药用植物的活性成分提供了理论依据。4.从发根农杆菌K599成功克隆了其T-DNA上的orf14基因,并构建了pRI101-AN-orfl4-gfp植物表达载体,其中ORF14能与GFP形成融合蛋白,这为进一步分析orf14基因及功能提供了基础。(本文来源于《杭州师范大学》期刊2012-05-01）
刘娟,李杨,陈万生,张磊[4]（2010）在《植物转基因发根的研究方向和应用》一文中研究指出利用发根农杆菌转化药用植物建立发根培养体系,以其独有的优势可以大规模生产次生代谢物,有效解决天然植化产品资源短缺的问题。同时诱发植物产生毛状根的质粒(Ri质粒)还是植物基因工程理想的载体,可将抗虫、抗病基因或植物次生代谢物合成关键酶基因,进一步整合到植物宿主基因组并得到表达,从而达到改良植物性状、提高次生代谢物含量的目的。转基因发根培养体系的建立为进一步利用遗传代谢工程手段调控植物次生代谢物含量和进行药用活性成分的工业化生产奠定了基础。本文综述了该领域的最新研究进展和相关应用。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2010年04期）
于寒松[5]（2008）在《红景天糖基转移酶家族基因克隆、鉴定及转基因发根系统的建立》一文中研究指出红景天是景天科红景天属植物,其公认的有效成分为红景天苷,现代药理学研究表明,红景天苷具有提高免疫力、抗肿瘤、降血糖、耐缺氧、抗微波辐射、抗病毒、抗疲劳等功能,具有很高的经济价值和广阔的开发前景,现在红景天作为保健药物资源和食品资源已得到了国家的承认。但是,野生红景天植物资源日渐濒危,人工大面积栽培由于根腐病等原因还不成功,同时因为红景天中红景天苷含量极低,所以不但导致红景天苷售价极高(每克纯度为98%的产品价格为5000元左右),而且还满足不了市场的需求。因此,利用现代生物技术如基因工程、酶工程、发酵工程技术大量制备红景天苷是一个有效降低其成本的办法。在红景天中合成红景天苷的最后一步反应是酪醇糖基化反应,催化这个反应的关键酶是UDP-葡萄糖基转移酶。所以提高这个关键酶表达量很有可能提高红景天苷的含量。本研究中应用CODEHOP简并引物设计方法结合RACE方法,同时在茉莉酮酸甲酯对植物材料进行诱导的情况下,在红景天中克隆得到了2个糖基转移酶基因,命名为UGTC2和UGTR,加上本实验室已经克隆的UGTC1叁个基因分别通过大肠杆菌异源表达、鉴定,结果表明:叁个酶对酪醇都具有催化活性,其中UGTR对酪醇的催化能力最强。然后构建了植物高效表达载体pCAUGTC1、pCAUGTC2和pCAUGTR并利用发根农杆菌ATCC15834介导分别建立了高山红景天转基因毛状根系统,结果表明,体内试验与体外试验的结论是一致的。经HPLC测定,利用UGTR转化得到的发根中红景天苷含量最高。综上,通过对红景天苷生物合成关键基因的分离、鉴定和比较研究,进一步建立了红景天的转基因发根系统,为利用生物反应器大规模工业化生产红景天苷奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2008-05-20）
曹燕燕,杨业华[6]（2007）在《发根农杆菌Ri质粒及rol转基因植物研究》一文中研究指出发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes,Ar)是一种寄主范围非常广泛的土壤细菌,植物受其侵染后常在侵染部位产生许多不定根。据统计,目前已有数百种植物感染 Ri 质粒后产生毛状根,其中大部分是双子叶植物和裸子植物,单子叶植物报道甚少。(本文来源于《中国棉花学会2007年年会论文汇编》期刊2007-08-01）
徐子勤,马洪军,郝建国,贾敬芬[7]（2000）在《发根农杆菌LBA9402 Bin19转化红豆草及再生转基因植株(英文)》一文中研究指出用含pBin19和pRi1855的发根农杆菌菌株对红豆草下胚轴切段进行遗传转化,种苗年龄和下胚轴切段的预培养时间明显影响转化频率。纸电泳分析表明70%的发状根培养系能够合成农杆碱。发现发状根诱导愈伤组织比发状根具有更强的再生力;发状根切段在含0—9.05μmol/L 2,4-D和0—2.22μmol/L 6-BA的MS培养基上诱导产生愈伤组织,然后在不含植物激素和卡那霉素的MS培养基上进行再生试验。愈伤组织诱导培养基中的植物激素组成和浓度显着影响愈伤组织后期的再生植株能力。再生频率和每块愈伤组织的芽点发生数随愈伤组织诱导培养基中2,4-D浓度的增加(4.52—9.05μmol/L)而下降,随6-BA浓度增加(0—2.22μmol/L)而上升。在附加4.52μmol/L 2,4-D和2.22μmol/L 6-BA的MS培养基上,愈伤组织的诱导频率只有14.2%,但愈伤组织在MS_0培养基上的再生频率高达58.1%,每块愈伤组织的芽点发生数平均为37.2。对来自8个发状根系的32株再生植株进行Southern分子杂交分析,25株整合有不同拷贝的nptⅡ基因。(本文来源于《实验生物学报》期刊2000年01期）
[8]（1990）在《发根土壤杆菌对钝叶天仙子的转化:转基因植物的产生》一文中研究指出发根土壤杆菌 (Agrobacteriumrhizogcnes)是一种土壤病原菌,它能将其Ri-质粒的一部分引入植物基因组转化植物细胞。已证实,许多感染了这种杆菌的双子叶植物在创伤处产生许多快速生长的不定根。RiT-DNA中的编码基因明显地调节转化细胞产生的内源性激素的平衡,这就使得产生的根能在没有外加植物激素的培养基中生长。转化根合成许多代谢物,俗称冠瘿碱(opines)。这些冠瘿碱在正常植物细胞中是不存在的。转化的钝叶天仙子根,叫做(本文来源于《国外医药(植物药分册)》期刊1990年06期）
转基因发根论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以长春花幼叶为外植体建立了发根农杆菌介导的长春花高效遗传转化体系,主要技术环节为:用携带有基因表达载体的发根农杆菌R1000侵染幼嫩叶片,侵染的叶片外植体与发根农杆菌共培养2d,外植体移至除菌培养基除菌培养2～3周,切取外植体上诱导长出的毛状根置于筛选培养基上培养1～2周,最后对筛选出的阳性毛状根无性系进行扩繁。筛选出的阳性毛状根经GUS染色和PCR分子鉴定表明,该方法的发根诱导率和阳性转化率分别为82%±2.49%和100%。该转化方法所获得的毛状根系数量大、质量高、遗传稳定且所需时间短,明显优于现有的长春花遗传转化技术,是长春花遗传转化的高效便捷体系。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转基因发根论文参考文献
[1].肖璇.发根农杆菌介导的柑橘遗传转化体系建立及转基因柑橘溃疡病抗性分析[D].华中农业大学.2014
[2].杨致荣,王兴春,薛金爱,李润植.发根农杆菌介导的长春花高效转基因体系的建立[J].植物生理学报.2012
[3].曹庆丰.发根农杆菌K599侵染黄瓜形成转基因毛状根的初步研究及orf14基因的克隆[D].杭州师范大学.2012
[4].刘娟,李杨,陈万生,张磊.植物转基因发根的研究方向和应用[J].第二军医大学学报.2010
[5].于寒松.红景天糖基转移酶家族基因克隆、鉴定及转基因发根系统的建立[D].吉林大学.2008
[6].曹燕燕,杨业华.发根农杆菌Ri质粒及rol转基因植物研究[C].中国棉花学会2007年年会论文汇编.2007
[7].徐子勤,马洪军,郝建国,贾敬芬.发根农杆菌LBA9402Bin19转化红豆草及再生转基因植株(英文)[J].实验生物学报.2000
[8]..发根土壤杆菌对钝叶天仙子的转化:转基因植物的产生[J].国外医药(植物药分册).1990