导读:本文包含了脯氨酸羟化酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:类风湿关节炎,骨关节炎,滑膜组织,脯氨酸羟化酶
脯氨酸羟化酶论文文献综述
宋小莉,苏娟,刘重阳,张广源,张鑫[1]（2019）在《类风湿关节炎滑膜组织中脯氨酸羟化酶及希佩尔林道肿瘤抑制蛋白的表达及意义》一文中研究指出背景:缺氧诱导因子在类风湿关节炎中的作用已经得到广泛证实,而作为缺氧诱导因子重要的调节因子脯氨酸羟化酶及希佩尔林道肿瘤抑制蛋白(von-Hippel-Lindau tumor suppressor protein,pVHL)是否在类风湿关节炎中作用国内外尚无明确报道。目的:分析类风湿关节炎和骨关节炎滑膜组织中脯氨酸羟化酶和pVHL的表达及其相互关系,探讨低氧信号蛋白在类风湿关节炎中的影响机制。方法:取行膝关节置换的类风湿关节炎患者滑膜组织11例,并取行膝关节置换的骨关节炎患者滑膜组织20例做对照。研究的实施符合青海大学附属医院医院对研究的相关伦理要求,患者对治疗过程及试验过程完全知情同意。采用免疫组织化学Envision二步法,检测2组滑膜组织中脯氨酸羟化酶1,2,3及p VHL的表达。结果与结论:①免疫组织化学结果显示,脯氨酸羟化酶1,2,3及p VHL在类风湿关节炎和骨关节炎滑膜组织中均有表达;脯氨酸羟化酶1在类风湿关节炎滑膜组织中的表达显着低于骨关节炎组(P <0.01),脯氨酸羟化酶2在类风湿关节炎滑膜组织中的表达显着高于骨关节炎组(P <0.05);脯氨酸羟化酶3、pVHL的表达2组差异无显着性意义(P> 0.05);②相关分析显示,类风湿关节炎组脯氨酸羟化酶2与脯氨酸羟化酶3(r_s=-0.875,P <0.01),脯氨酸羟化酶1与红细胞分布宽度标准差(r_s=-0.374,P <0.03),脯氨酸羟化酶2与血红蛋白(r_s=-0.457,P <0.01),脯氨酸羟化酶3与红细胞分布宽度标准差(r_s=-0.363,P <0.04)均呈负相关;脯氨酸羟化酶2与嗜酸性粒细胞(r_s=0.363,P <0.04),脯氨酸羟化酶2与球蛋白(r_s=0.405,P <0.02),均呈正相关;③类风湿关节炎组类风湿因子、C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A、球蛋白检测值均显着高于骨关节炎组(P <0.05);④结果说明,脯氨酸羟化酶1和脯氨酸羟化酶2与类风湿关节炎的发生、发展密切相关,抑制脯氨酸羟化酶2的表达及激活脯氨酸羟化酶1的表达可能在类风湿关节炎滑膜组织的病理改变中起到重要保护作用,或可为类风湿关节炎发生的分子生物学途径及临床之中提供有针对性的治疗措施。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年23期）
张峰[2]（2019）在《Aspergillus pachycristatus棘白菌素B合成中脯氨酸羟化酶的功能分析及CRISPR/Cas9基因编辑体系的构建》一文中研究指出丝状真菌可以产生结构多样的次级代谢产物,是天然药物的重要来源。但由于很多次级代谢产物的合成途径及机制并不清楚,且某些具有特定生物活性的次代产物产量低而难以实现高水平工业化生产,因此如何提高丝状真菌次级代谢产物的产量和活性成为当前研究的热点。棘白菌素类药物是目前用于治疗由念珠菌等真菌引起的入侵性感染最有效的药物,由某些特定的丝状真菌合成。目前已经上市的棘白菌素类药物包括卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。棘白菌素类药物价格昂贵,使其在临床上的广泛应用受到很大的限制。因此深入研究棘白菌素类抗生素的生物合成机制,从而提高棘白菌素类的产量和活性,降低其使用成本,对有效控制相关真菌感染性疾病尤为重要。棘白菌素B是由丝状真菌Aspergilluspachycristatus产生的环状酯肽类次级代谢产物,是合成阿尼芬净的前体物质。负责合成棘白菌素B的非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因簇中还包括可催化其多个组成氨基酸发生羟基化修饰的羟化酶,其中参与棘白菌素B环状六肽中脯氨酸和4-甲基脯氨酸羟基化的羟化酶尚未被鉴定和表征。本论文对棘白菌素B合成途径中的一个关键脯氨酸羟化酶(HtyE)进行探究。通过体内与体外相结合的方法对其酶学性质、功能及关键位点进行鉴定。同时由于A.pachycristatus 菌株的遗传操作相对困难,本论文在该菌株中建立了CRISPR/Cas9系统,并探索利用该系统对菌株进行基因组编辑。取得的主要结果如下:一、对棘白菌素类抗生素产生菌株A.Pachycristatus和A.aculeatus基因组测序,明确棘白菌素类抗生素合成基因簇的结构组成。A pachycristatus和A aculeatus可以产生两种不同的棘白菌素类抗生素,分别为棘白菌素B和aculeacin A。对菌株A.pachycristatus 和A aculeatus基因组测序,明确棘白菌素类抗生素的合成由两个连续的子基因簇ecd和hty负责。通过HPLC检测得知棘白菌素B的产量随着A pachycristatus的生长而不断积累。生长到第五天时,产量达到最大值,约为0.7 mg/g。A.pachycristatus 棘白菌素B合成基因簇各基因转录分析表明ecdA和ecdK的转录量较低,可能是棘白菌素B合成过程中的限制性因素。二、Ap-htyE在A.pachycristatus 合成棘白菌素B过程中具有重要功能。HtyE以脯氨酸为底物时可同时生成反式-4-羟基脯氨酸和反式-3-羟基脯氨酸,但不同来源的HtyE催化生成两种羟基脯氨酸的比例不同。利用同源重组原理在A.pachycristatus 菌株中敲除Ap-htyE基因,通过对敲除菌株发酵产物进行HPLC、LC-MS和抗白色念珠菌活性检测,结果显示Ap-htyE的敲除导致缺失菌株不能产生棘白菌素B,且发酵产物不具有抗白色念珠菌活性,说明Ap-hthE对棘白菌素B的合成及活性至关重要。通过氨基酸序列比对在A.pachycristatus 和A.aculeatus中找到可能的脯氨酸羟化酶HtyE,将其分别命名为Ap-HtyE和Aa-HtyE,氨基酸序列相似度为69.6%。通过异源表达纯化Ap-HtyE和Aa-HtyE,研究它们体外功能及酶学性质。发现在以脯氨酸为底物时,Ap-HtyE和Aa-HtyE均可以生成两种不同形式的羟基化氨基酸,分别为反式-4-羟基脯氨酸和反式-3-羟基脯氨酸。这两种氨基酸分别是棘白菌素B环状六肽第3和第6位的组成成分。Ap-HtyE也可以甲基脯氨酸为底物,但仅催化其生成3-羟基-甲基脯氨酸。值得注意的是,Ap-HtyE和Aa-HtyE生成两种不同形式的羟基脯氨酸的比例有很大的不同,分别为2.5:1和7.2:1。叁、Ap-HtyE Leu182是决定Ap-HtyE对脯氨酸区域选择性的关键氨基酸位点,Ap-HtyE对甲基脯氨酸C3位的羟基化效率不受脯氨酸修饰产物比例变化的影响。通过同源模建构建了 Ap-HtyE的结构模型,依此对活性中心氨基酸位点进行丙氨酸扫描、位点饱和突变以及组合突变。结果表明,Leu182是决定脯氨酸羟基化位置选择性的重要位点。将Leu182突变为天冬酰胺后,在以脯氨酸为底物时生成的反式-4-羟基脯氨酸和反式-3-羟基脯氨酸的比例由2.5:1变为7.4:1。突变结果进一步显示,Ap-HtyE对于甲基脯氨酸C3位的羟基化不受其催化脯氨酸修饰产物比例变化的影响。四、在A.pachycristatus菌株中引入CRISPR/Cas9系统,并利用该系统成功进行了pyrG和pksP的敲除。由于A.pachycristatus 菌株的同源重组效率较低,导致在A.pachycristaftus菌株的遗传操作比较困难,从而影响对棘白菌素B合成途径机制的深入探究。CRISPR/Cas9系统是提高基因组编辑效率的有效工具。本论文利用i.pachycristatus自身的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(PgpdA)启动子和终止子(TgpdA)驱动Cas9的表达,利用来源于黑曲霉的5s rRNA启动子驱动引导RNA的表达。进一步将此双元件表达载体导入i.pachycristatus 中以对尿苷合成途径关键基因pyrG进行失活。结果表明,CRISPR/Cas9系统可用于A pachycristatus基因组编辑中。在同时共转donor DNA时,对分生孢子色素聚酮合酶基因pksP进行失活,结果表明,当donor DNA的长度仅为40bp时,敲除效率为93.75%。从而显示CRlISPR/Cas9系统在A.pachycristatus 基因编辑中的有效性和可行性。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-27）
秦远,黄丹丹,付彬玉,罗杨坤[3]（2019）在《基于公共数据库分析脯氨酸羟化酶3在非小细胞肺癌中的表达及预后价值》一文中研究指出目的:探讨脯氨酸羟化酶3(prolyl hydroxylase 3,PHD3)在非小细胞肺癌中的表达及预后价值。方法:应用Oncomine和Gene Expression Omnibus (GEO)数据库对PHD3 mRNA在NSCLC中表达水平及其与临床病理参数的关系进行分析,通过Kaplan-Meier Plotter和SurvExpress分析PHD3 mRNA表达水平与NSCLC预后的关系。结果:PHD3 mRNA在NSCLC组织中高表达(P=0.028)。PHD3高表达与鳞癌亚型,较晚的临床分期和男性患者相关(P<0.001,P=0.001)。Kaplan-Meier Plotter分析显示PHD3高表达提示腺癌较差的总生存率(P=0.003),SurvExpress分析结果也显示PHD3主要影响腺癌的预后(P=0.013),且在高危组中其表达水平显着上调(P<0.001)。Kaplan-Meier Plotter和SurvExpress分析结果均显示PHD3 mRNA表达水平与鳞癌预后无相关性。结论:PHD3可以作为一个潜在的分子标记预测NSCLC主要是肺腺癌的预后。(本文来源于《肿瘤预防与治疗》期刊2019年05期）
周海岩,李会帅,王培,柳志强[4]（2018）在《定点饱和突变提高L-脯氨酸-4-羟化酶的酶活》一文中研究指出为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行叁维结构模拟和"热点"氨基酸分析,选择了7个位于"疏水口袋"附近的氨基酸残基(Y205,K207I241,F137,T142,V53和R45)进行定点饱和突变,得到P4H酶活力明显提高的突变型酶F137R和Y205K。采用F137R和Y205K催化转化0.35g/L L-脯氨酸产物4(Hyp质量浓度分别为55.09mg/L和52.29mg/L),比野生型酶分别提高了58%和50%。经过分子对接比较发现,突变型P4H的活性中心没有发生显着变化,酶活的提高可能是由于突变作用使蛋白构型发生了轻微改变,增加了该酶与底物或辅底物的亲和力引起的。该结果为进一步利用P4H生物合成4-Hyp提供了重要的理论基础。(本文来源于《发酵科技通讯》期刊2018年04期）
张光昊[5]（2018）在《脯氨酸羟化酶3在睡眠呼吸暂停低通气综合征导致的心脏纤维化中的作用及机制研究》一文中研究指出第一部分OSA动物模型构建与心脏功能的评估目的:睡眠呼吸暂停低通气综合征是指各种病因导致的每晚睡眠过程中呼吸暂停反复发作30次以上或睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)≥5次/小时伴有白天嗜睡等临床症状,以阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSA)最为常见。关于OSA的发病机制和并发症的研究,国内外主要是将小鼠、大鼠等小动物暴露于间歇性低氧环境中,从病理生理机制上模拟OSA造成的间歇性低氧。本部分研究的目的就是建立OSA动物模型并评估模型鼠的心脏功能。方法:购买C57-BL/6J雄性小鼠,利用我们前期设计的间断低氧培养箱(专利号:ZL 2014 2 0484878.2)进行模型的构建,间断低氧设置:每分钟60个循环,其中用5s的时间将容器中的氧浓度下降到5%,继而维持20s;随后40s通入空气,将氧浓度上调到21%,每天持续8小时。阴性对照组的小鼠也置入同样的容器中,在同样的8小时中维持常氧。模型建立时间为3个月。利用心脏彩超检测各组小鼠的心功能,HE染色检测心脏组织切片的大体结构,Masson染色、天狼星红染色检测胶原蛋白的表达,免疫组织化学染色检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达。结果:3个月后我们发现:(1)二维超声图像显示,相对于对照组,IH组并没有改变小鼠心脏舒张期室间隔厚度和左心室舒张末期直径(p>0.05),但是左心室的收缩末期直径增大(p<0.05)和左心室后壁舒张末期的厚度变薄(p<0.05)而且IH组的小鼠心脏功能(LVEF、FS、E/A、E’/A’)下降(p均<0.01);(2)HE染色显示,相对于对照组,IH组小鼠心脏微血管的管壁厚度(IMT)与管腔直径的比值增大(p<0.05);(3)Masson染色和天狼星红染色示,相对于对照组,IH组的小鼠的心脏微血管的管壁和周围胶原沉积水平明显增高(p<0.05);(4)免疫组织化学染色显示,相对于空白组,IH组的Collagen Ⅰ的表达量明显增高(p<0.05),但是并没有增加Collagen Ⅲ的表达量(p>0.05)。结论:OSA可以导致心功能下降和心脏微血管纤维化第二部分PHD3改善OSA导致的心脏纤维化目的:目前临床上治疗OSA的唯一有效方法为持续气道正压通气(CPEP),然而有研究认为CPEP不能改善OSA合并心衰患者的住院率、生活质量也不能改善OSA合并心脏病患者的预后和死亡,所以必须寻找一个新的作用靶点来改善OSA导致的心脏纤维化,从而联合CPEP治疗来改善病人的住院率和生活质量。脯氨酸羟化酶3(PHD3)是一种细胞氧感受器,主要表达在神经元、心肌及肌肉组织。研究显示PHD3的功能具有两面性:一方面,常氧状态下,PHD3的表达增加导致细胞凋亡,而另一方面,在低氧状态下,PHD3的高表达可以促进细胞的存活和增殖并且对心肌缺血反应有至关重要的调控作用。然而PHD3是否对OSA导致的心脏微血管纤维化有保护或者损伤作用,目前尚无相关报道。本部分研究旨在探索PHD3在OSA导致的心脏微血管纤维化中的作用。方法:具体实验方法包括:慢病毒(干扰和过表达)的构建和感染;心脏彩超检测各组小鼠的心功能;HE染色检测心脏组织切片的大体结构,Masson染色、天狼星红染色检测胶原蛋白的表达;免疫组织化学染色检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达。结果:(1)过表达PHD3(Lv PHD3)的表达可以明显改善左心室的收缩末期直径(p<0.05)、左心室后壁舒张末期的厚度(p<0.05)和小鼠的心脏功能:LVEF(p<0.05);FS(p<0.05);E/A(p<0.01);E’/A’(p<0.01)。然而干扰PHD3(sh PHD3)的表达并不能改善上述的心脏指标(p>0.05);(2)HE染色示:相对于Lv NC组,Lv PHD3组小鼠心脏微血管的管壁厚度(IMT)与管腔直径的比值有所改善(p<0.05);(3)Masson染色和天狼星红染色检测示:相对于Lv NC组,我们发现Lv PHD3组的小鼠的心脏微血管的管壁和周围胶原沉积水平明显降低(p均<0.05),然而sh PHD3不改变间断低氧导致的纤维化(p>0.05);(4)免疫组织化学染色显示,相对于Lv NC组,Lv PHD3组的Collagen Ⅰ的表达量明显降低(p<0.05),然而并没有改变Collagen Ⅲ的表达量(p>0.05),有意思的是sh PHD3不改变间断低氧引起的Collagen Ⅰ表达升高(p>0.05)。结论:PHD3可以改善OSA引起的心脏功能异常和心脏纤维化。第叁部分PHD3通过改善内皮细胞的间充质转化从而改善心脏微血管的纤维化目的:2007年,Zeisberg.EM等人首次报道了心脏纤维化与内皮细胞来源的成纤维细胞的出现密切相关,提示在心脏纤维化过程中发生了内皮间充质化(End MT),而且内皮间充质转化导致的心脏纤维化的位置往往发生在心脏血管的管周和内皮下。第一部分研究发现,OSA导致的心脏纤维化主要发生在心脏微血管的中层和管周。第二部分研究发现,过表达PHD3可以明显降低OSA导致的小鼠心脏微血管纤维化水平,并改善小鼠的心功能,然而机制并不清楚。因此我们推测:PHD3的过表达很可能通过抑制End MT的发生从而改善OSA相关的心脏纤维化。该部分研究目的旨在探索PHD3改善OSA导致心脏纤维化的机制。方法:具体方法包括:小鼠体内实验免疫组织化学检测CD31和α-SMA;WB检测PHD3、Twist、Snail、CD31、α-SMA、VE-cadherin、FSP 1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的表达;细胞免疫荧光染色检测CD31、α-SMA、HIF-1α、p-smad2/3、smad2/3;Transwell检测内皮细胞和间充质化的内皮细胞的迁移能力。结果:(1)体内实验证实间断缺氧(IH)导致End MT:免疫组织化学染色示,control组的CD31染仅仅表达于血管内膜,而IH组的CD31的表达出现了一定程度的弥散,即IH组的CD31不仅仅表达在微血管的内膜上,还在血管中膜有一定程度的表达,control组α-SMA仅仅表达于微血管的中膜,在内膜并没有表达,而IH组的α-SMA不仅表达于微血管的中膜,同时在内膜也有了一定的表达。Wb显示,相对于control组,IH组的snail和twist(End MT激活的相关基因)表达明显升高(p均<0.05);(2)体内实验PHD3可以改善IH导致的End MT:免疫组化示,Lv PHD3可以极大的改善IH导致的CD31的弥散表达和α-SMA的内膜表达。Wb显示相对于Lv NC组,Lv PHD3组的snail和twist的表达量明显降低(p均<0.05);(3)体外实验IH诱导End MT:免疫荧光示,control组的细胞仅仅表达内皮细胞标志物CD31,而对于间充质细胞或者肌成纤维细胞表型的标志物α-SMA则几乎不表达,经过72h的间断低氧后,IH组的CD31表达有下降的趋势,而α-SMA的表达明显升高。Wb示相对于control组,IH组的snail和twist的基因表达明显升高(p均<0.05);(4)体外实验PHD3改善IH诱导的End MT:Wb示,相对于control组,IH组可以升高间充质细胞标志物/肌成纤维细胞标志物α-SMA和FSP 1的表达(p均<0.01),并降低内皮细胞标志物CD31和VE-Cadherin(p均<0.01)的表达。Lv PHD3可以改善IH导致的上述指标的改变(p均<0.01)。为了进一步证明上述结果snail和twist的表达被检测,wb示相对于Lv NC组,Lv PHD3组的snail和twist的表达量明显降低(p均<0.05);(5)PHD3改善间充质化内皮导致的迁移能力和胶原分泌能力的增强:Transwell示,相对于control组,IH导致的间充质转化的内皮细胞迁移能力明显增强(p<0.05),而Lv PHD3可以改善内皮细胞间充质化导致的迁移能力增强(p<0.05)。为进一步探索细胞功能的改变,我们利用wb来检测内皮细胞分泌胶原的能力,wb示,相对于control组,IH组的细胞分泌Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的能力明显增强(p均<0.01),而Lv PHD3可以改善End MT导致的Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ分泌能力增强(p均<0.01);(6)PHD3可通过调节HIF-1α改善IH诱导的End MT:Wb示相对于control组,IH组的HIF-1α表达量明显的升高(p<0.05),然而Lv PHD3可以改善IH造成的HIF-1α表达升高(p<0.05)。免疫荧光示control组的HIF-1α主要表达于细胞质,少部分表达于细胞核,而IH组的HIF-1α主要表达于细胞核中,Lv PHD3可以抑制IH导致的HIF-1α核转位;(7)PHD3可通过调节Smad2/3改善IH诱导的End MT:免疫荧光示control组的p-smad2/3仅仅表达在细胞质中,smad2/3大部分表达于细胞质中少部分表达于细胞核中,而IH组的p-smad2/3和smad2/3出现了明显的核转位,Lv PHD3可以抑制IH导致的p-smad2/3和smad2/3核转位,为了进一步验证我们的结论,利用smad2/3的抑制剂来抑制p-smad2/3的活性。加入抑制剂阻断smad2/3后,wb示相对于IH组,CD31的表达升高(p<0.05),α-SMA(p<0.05)、snail(p<0.01)、twist(p<0.01)的表达降低。结论:(1)PHD3通过改善内皮细胞的间充质转化从而改善心脏微血管的纤维化;(2)PHD3改善IH导致的End MT与降解和灭活HIF-1α有关;(3)PHD3改善IH导致的End MT与灭活p-smad2/3有关。第四部分PHD3通过改善平滑肌去分化从而改善心脏微血管的纤维化目的:本研究的第叁部分认为PHD3通过抑制End MT的发生从而改善OSA导致的心脏纤维化。有研究推测,内皮细胞来源的肌成纤维细胞所占到的比例高达30%,也就是说还有其他来源肌成纤维细胞。体内实验我们利用慢病毒来干扰和过表达小鼠心脏的PHD3表达水平,然而慢病毒在感染心脏时并没有特异性,所以PHD3改善OSA导致的心脏纤维化可能不仅仅作用于内皮细胞。研究表明血管平滑肌细胞(VSMC)具有表型转化的功能,VSMC的过度增殖和胶原的分泌可能是血管管腔狭窄的一个重要的原因。本研究第一部分发现,OSA导致的心脏纤维化主要发生在心脏微血管的中层和管周,所以我们推测PHD3改善OSA导致的心脏纤维化可能与心脏血管的VSMC有关。该部分研究目的旨在进一步探索PHD3改善OSA导致心脏纤维化的机制。方法:具体方法包括:体内实验免疫组织化学检测OPN和α-SMA;WB检测PHD3、α-SMA、OPN、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的表达;细胞免疫荧光染色检测α-SMA、HIF-1α;si RNA的制备和转染;RT-q PCR检测HIF-1αm RNA水平。结果:(1)体内实验证实IH导致平滑肌去分化:免疫组织化学染色示,control组心脏微血管的中层几乎不表达OPN,而IH组的心脏微血管中层的OPN表达明显升高(p<0.01),相对于control组,IH组的α-SMA的表达几乎没有变化(p>0.05);(2)体内实验证实PHD3改善IH导致的平滑肌去分化:免疫组化示,相对于Lv NC组,Lv PHD3可以明显的改善IH导致的心脏微血管中层的OPN表达升高(p<0.01);(3)体外实验证实IH导致平滑肌去分化:免疫荧光示,空白组的细胞仅仅表达收缩型标志物α-SMA,而对于合成表型的标志物则几乎不表达,72h的间断低氧后,IH组的平滑肌细胞开始表达合成型的标志物OPN。(4)体外实验证实PHD3改善IH导致的平滑肌去分化:Wb结果显示,相对于control组,IH组可以明显的升高合成型细胞标志物OPN的表达(p<0.05),并降低收缩型标志物α-SMA的表达(p<0.01)而Lv PHD3可以改善IH导致的OPN表达升高(p<0.05)和α-SMA的表达降低(p<0.01);(5)PHD3改善平滑肌去分化导致的胶原分泌增强:Wb示相对于control组,IH组的细胞分泌Collagen Ⅰ的能力明显增强(p<0.05),然而并不能改变Collagen Ⅲ的分泌能力(p>0.05),Lv PHD3可以明显的改善平滑肌去分化导致的Collagen Ⅰ分泌能力增强(p<0.05);(6)PHD3通过抑制和灭活HIF-1α改善IH导致的平滑肌去分化:RT-q PCR示相对于control组IH组没有改变HIF-1αm RNA的水平,而sh PHD3和Lv PHD3也没有改变HIF-1αm RNA的水平(p均>0.05)。Wb示,相对于control组,IH组的HIF-1α表达量明显的升高(p<0.01),然而Lv PHD3可以改善IH造成的HIF-1α表达升高(p<0.01)。免疫荧光示,control组的HIF-1α主要表达于细胞质,少部分表达于细胞核,而IH组的HIF-1α则产生了明显的核转位,Lv PHD3可以有效抑制IH导致的HIF-1α核转位。为进一步验证上述结果,我们利用小干扰来干扰HIF-1α的表达,wb示,si HIF-1α组能很好的改善IH导致平滑肌去分化导致的α-SMA表达降低和OPN的表达升高(p均<0.05)。结论:(1)PHD3通过改善平滑肌细胞的去分化从而改善心脏微血管的纤维化;(2)PHD3改善IH导致的平滑肌去分化与调控转录后的HIF-1α有关。(本文来源于《东南大学》期刊2018-11-23）
商玲玲,葛少华[6]（2018）在《脯氨酸羟化酶在脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症因子的表达中发挥阳性调控作用》一文中研究指出目的:脯氨酸羟化酶(PHDs)在机体的氧传感系统中发挥着关键作用,然而,其在炎症中的调控作用尚未完全明确。牙龈卟啉单胞菌在牙周炎的发生和发展中发挥着重要作用,脂多糖(LPS)是其主要的毒力因子;而人牙龈成纤维细胞(HGFs)是牙周连接组织中最丰富的细胞,具有非常重要的免疫调控作用。因此,本实验旨在探讨脯氨酸羟化酶在牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症中的调控作用,并且进一(本文来源于《2018全国口腔生物医学学术年会论文汇编》期刊2018-10-12）
赵晰[7]（2018）在《低氧诱导因子稳定剂脯氨酸羟化酶在肾性贫血中研究进展》一文中研究指出低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)是上世纪九十年代初由Semenza等人发现的一类氧敏感性异二聚体蛋白,对机体在低氧条件下发生的一系列生理学改变起到关键性调控作用。其脯氨酸羟化酶域酶(PHD)是HIF降解反应的限速酶,可羟基化HIF的脯氨酸残基。因此,HIF-PHD抑制剂(PHI)可参与调控HIF介导的下游基因表达,继而发挥一系列的生物学效应,如PHI能够稳定HIF蛋白,增加促红细胞生成素表达水平。本文主要按照PHI的作用机制分类,综述了PHI的潜在适应证和几个小分子药物在治疗贫血的方面最新临床研究进展。(本文来源于《中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编》期刊2018-10-11）
曹婧媛,刘必成[8]（2018）在《低氧诱导因子-脯氨酸羟化酶轴在肾性贫血中的作用机制研究进展》一文中研究指出肾性贫血是慢性肾脏病患者最常见的并发症之一,主要由促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)缺乏和功能性铁缺乏(functional iron deficiency, FID)引起。低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor, HIF)是体内参与细胞低氧应答的主要转录因子,而氧依赖性的脯氨酸羟化酶(prolyl hydroxylase, PHD)是HIF降解反应的限速酶,可羟基化HIF的脯氨酸残基,使HIF被蛋白酶体降解,这就是HIF-PHD氧传感途径,亦称HIF-PHD轴。贫血情况下组织缺氧,通过调节HIF-PHD轴可刺激EPO生成、调节铁代谢等,这已成为治疗肾性贫血的新方法。近年来,几种作为选择性HIF-PHD抑制剂的创新药物被成功开发,其中一些药物正在进行临床试验。本文就HIF-PHD轴的概念、调节机制及其在肾性贫血中的作用机制研究进展进行综述。(本文来源于《生理学报》期刊2018年06期）
马乐辉,李存会[9]（2018）在《乳糖诱导脯氨酸羟化酶高效表达研究》一文中研究指出研究了乳糖诱导重组大肠杆菌表达脯氨酸羟化酶与L-脯氨酸生物转化。结果表明,将种子液按1%的比例接种于含有0.8%乳糖发酵培养基中,在28℃、140 r/m条件下,培养约2 h,在分光光度计波长为600 nm,OD值为0.6~0.8条件下,再诱导培养13 h,离心收集菌体,按质量体积比1 g∶100 m L(菌体量∶转化液)向菌体中加入转化液,在28℃条件下能高效进行L-脯氨酸转化生成L-羟脯氨酸,转化率达到98.6%。本研究为L-脯氨酸生物转化实现工业化生产奠定了基础。(本文来源于《煤炭与化工》期刊2018年07期）
李存会,马乐辉[10]（2018）在《脯氨酸羟化酶固定化酶与固定化细胞催化转化L-脯氨酸的研究》一文中研究指出为了实现L-脯氨酸的工业化生物转化,本文对脯氨酸羟化酶采用叁种不同的固定化方法进行转化分析,并且对脯氨酸羟化酶固定化酶与固定化细胞催化转化、使用频次进行比较。结果表明,海藻酸钠固定化酶效果最好,活收率为87.1%,比酶活为201;固定化细胞比固定化酶转化效果明显,固定化细胞的比酶活为298 U/g;固定化细胞使用频次50次后转化率仍在92%以上,而固定化酶使用频次50次后转化率降为71%以下。(本文来源于《产业与科技论坛》期刊2018年09期）
脯氨酸羟化酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
丝状真菌可以产生结构多样的次级代谢产物,是天然药物的重要来源。但由于很多次级代谢产物的合成途径及机制并不清楚,且某些具有特定生物活性的次代产物产量低而难以实现高水平工业化生产,因此如何提高丝状真菌次级代谢产物的产量和活性成为当前研究的热点。棘白菌素类药物是目前用于治疗由念珠菌等真菌引起的入侵性感染最有效的药物,由某些特定的丝状真菌合成。目前已经上市的棘白菌素类药物包括卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。棘白菌素类药物价格昂贵,使其在临床上的广泛应用受到很大的限制。因此深入研究棘白菌素类抗生素的生物合成机制,从而提高棘白菌素类的产量和活性,降低其使用成本,对有效控制相关真菌感染性疾病尤为重要。棘白菌素B是由丝状真菌Aspergilluspachycristatus产生的环状酯肽类次级代谢产物,是合成阿尼芬净的前体物质。负责合成棘白菌素B的非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因簇中还包括可催化其多个组成氨基酸发生羟基化修饰的羟化酶,其中参与棘白菌素B环状六肽中脯氨酸和4-甲基脯氨酸羟基化的羟化酶尚未被鉴定和表征。本论文对棘白菌素B合成途径中的一个关键脯氨酸羟化酶(HtyE)进行探究。通过体内与体外相结合的方法对其酶学性质、功能及关键位点进行鉴定。同时由于A.pachycristatus 菌株的遗传操作相对困难,本论文在该菌株中建立了CRISPR/Cas9系统,并探索利用该系统对菌株进行基因组编辑。取得的主要结果如下:一、对棘白菌素类抗生素产生菌株A.Pachycristatus和A.aculeatus基因组测序,明确棘白菌素类抗生素合成基因簇的结构组成。A pachycristatus和A aculeatus可以产生两种不同的棘白菌素类抗生素,分别为棘白菌素B和aculeacin A。对菌株A.pachycristatus 和A aculeatus基因组测序,明确棘白菌素类抗生素的合成由两个连续的子基因簇ecd和hty负责。通过HPLC检测得知棘白菌素B的产量随着A pachycristatus的生长而不断积累。生长到第五天时,产量达到最大值,约为0.7 mg/g。A.pachycristatus 棘白菌素B合成基因簇各基因转录分析表明ecdA和ecdK的转录量较低,可能是棘白菌素B合成过程中的限制性因素。二、Ap-htyE在A.pachycristatus 合成棘白菌素B过程中具有重要功能。HtyE以脯氨酸为底物时可同时生成反式-4-羟基脯氨酸和反式-3-羟基脯氨酸,但不同来源的HtyE催化生成两种羟基脯氨酸的比例不同。利用同源重组原理在A.pachycristatus 菌株中敲除Ap-htyE基因,通过对敲除菌株发酵产物进行HPLC、LC-MS和抗白色念珠菌活性检测,结果显示Ap-htyE的敲除导致缺失菌株不能产生棘白菌素B,且发酵产物不具有抗白色念珠菌活性,说明Ap-hthE对棘白菌素B的合成及活性至关重要。通过氨基酸序列比对在A.pachycristatus 和A.aculeatus中找到可能的脯氨酸羟化酶HtyE,将其分别命名为Ap-HtyE和Aa-HtyE,氨基酸序列相似度为69.6%。通过异源表达纯化Ap-HtyE和Aa-HtyE,研究它们体外功能及酶学性质。发现在以脯氨酸为底物时,Ap-HtyE和Aa-HtyE均可以生成两种不同形式的羟基化氨基酸,分别为反式-4-羟基脯氨酸和反式-3-羟基脯氨酸。这两种氨基酸分别是棘白菌素B环状六肽第3和第6位的组成成分。Ap-HtyE也可以甲基脯氨酸为底物,但仅催化其生成3-羟基-甲基脯氨酸。值得注意的是,Ap-HtyE和Aa-HtyE生成两种不同形式的羟基脯氨酸的比例有很大的不同,分别为2.5:1和7.2:1。叁、Ap-HtyE Leu182是决定Ap-HtyE对脯氨酸区域选择性的关键氨基酸位点,Ap-HtyE对甲基脯氨酸C3位的羟基化效率不受脯氨酸修饰产物比例变化的影响。通过同源模建构建了 Ap-HtyE的结构模型,依此对活性中心氨基酸位点进行丙氨酸扫描、位点饱和突变以及组合突变。结果表明,Leu182是决定脯氨酸羟基化位置选择性的重要位点。将Leu182突变为天冬酰胺后,在以脯氨酸为底物时生成的反式-4-羟基脯氨酸和反式-3-羟基脯氨酸的比例由2.5:1变为7.4:1。突变结果进一步显示,Ap-HtyE对于甲基脯氨酸C3位的羟基化不受其催化脯氨酸修饰产物比例变化的影响。四、在A.pachycristatus菌株中引入CRISPR/Cas9系统,并利用该系统成功进行了pyrG和pksP的敲除。由于A.pachycristatus 菌株的同源重组效率较低,导致在A.pachycristaftus菌株的遗传操作比较困难,从而影响对棘白菌素B合成途径机制的深入探究。CRISPR/Cas9系统是提高基因组编辑效率的有效工具。本论文利用i.pachycristatus自身的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(PgpdA)启动子和终止子(TgpdA)驱动Cas9的表达,利用来源于黑曲霉的5s rRNA启动子驱动引导RNA的表达。进一步将此双元件表达载体导入i.pachycristatus 中以对尿苷合成途径关键基因pyrG进行失活。结果表明,CRISPR/Cas9系统可用于A pachycristatus基因组编辑中。在同时共转donor DNA时,对分生孢子色素聚酮合酶基因pksP进行失活,结果表明,当donor DNA的长度仅为40bp时,敲除效率为93.75%。从而显示CRlISPR/Cas9系统在A.pachycristatus 基因编辑中的有效性和可行性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脯氨酸羟化酶论文参考文献
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[10].李存会,马乐辉.脯氨酸羟化酶固定化酶与固定化细胞催化转化L-脯氨酸的研究[J].产业与科技论坛.2018