噬菌体phi29末端酶gp16蛋白C端结构域在溶液中的构象分析

论文摘要

噬菌体phi29是一种双链DNA病毒,它的增殖和成熟过程需要将较大的子代DNA包装入一个空间极其有限的新生病毒衣壳中,这一步骤由其转运马达完成.转运马达具有三个部分:头颈连接器蛋白（the connector）、pRNA和ATP水解酶蛋白（gp16）.在结构预测中发现gp16蛋白的C端结构域可能与pRNA或DNA结合,但尚未有相关文献可以证明这种相互作用,因此其结构的解析成为研究其功能的关键.本文利用大肠杆菌SUMO表达系统,对噬菌体phi29 gp16蛋白的C端结构域进行重组构建并诱导表达后,通过Ni-NTA亲和层析纯化,再用分子排阻色谱获得高纯度的目的蛋白质单体,纯度达到95%左右.最后用X射线小角散射技术（small angle X-ray scattering）对其构象进行分析,收集小角散射数据,当目的蛋白的浓度为1.3 g/L、所得到的目的蛋白的三维结构与同源蛋白FtsK的晶体结构高度拟合,且通过CRYSOL软件反推计算的曲线与实验曲线高度重合.通过原核表达、纯化及结构分析,成功获得了该结构域在溶液中的状态信息.这一研究不仅为后续关于该结构域的功能研究奠定基础,也为病毒感染的诊断和治疗提供新思路.

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 武飞飞,蔡汝洁,陈婷,张云龙,陆昌瑞

关键词: 噬菌体,蛋白,端结构域,射线小角散射

来源: 生物化学与生物物理进展 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 东华大学化学化工与生物工程学院

基金: 国家自然科学基金(31300603),中央高校基本科研基金(17D310512,2232014D3-39),励志计划(18D210501)资助项目~~

分类号: Q939.4

DOI: 10.16476/j.pibb.2018.0235

页码: 305-312

总页数: 8

文件大小: 2827K

下载量: 100

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