蛋清源抗氧化肽对HEK293细胞氧化应激损伤的抑制作用及机制

论文摘要

食源性抗氧化肽以其安全性高,抗氧化能力好,逐渐成为多肽研究领域的热点。本文以蛋清卵黏蛋白胃蛋白酶水解产物为原料,以蛋清源五肽作为研究对象,首先,采用基于不同机理的体外抗氧化活性化学测定方法,对8条蛋清源五肽的抗氧化活性进行评价。DPPH自由基清除活性最强的为五肽CFDVF,浓度为1.0 mmol/L时,其自由基清除率为50.14%±2.1%;ABTS+·自由基清除能力最强的为五肽VYQFL,浓度为100μmol/L时,TEAC值为（94.66±0.37）μmol/L TE/100μmol/L;ORAC活性最强的为五肽WNWAD,TEAC值为（2.53±0.18）μmol/L TE/μmol/L。接着,利用HEK293细胞氧化损伤模型评价8条五肽的抗氧化活性,其中五肽WNWAD（Trp-Asn-Trp-Ala-Asp）的氧化应激抑制活性最强。同时,细胞毒性试验证明,五肽本身对细胞无毒副作用,也无促进增殖作用。最后,综合体外化学和细胞试验结果,筛选出WNWAD进行蛋清肽氧化应激抑制机制研究。首先采用试剂盒方法检测细胞内LDH活性和MDA含量,以及抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,结果表明H2O2可导致细胞LDH释放率上升,MDA含量增高,而WNWAD可以抑制脂质过氧化进程,维持细胞膜完整性,提高细胞内LDH活性,降低MDA含量;H2O2可以抑制细胞内抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,而经过WNWAD预处理,可以显著增强其活性;随着肽浓度的升高,3种酶的活性均有所提高,呈浓度依赖型关系,尤其在肽的浓度为1.0μmol/L时,过氧化氢酶（CAT）活力为（20.63±0.51） U/mg蛋白、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力为（179.39±5.73）U/mg蛋白,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）为（33.97±5.02）个活力单位,较对应损伤组的酶活性均有显著性提高（P<0.01）;最后,利用蛋白质免疫印迹技术检测细胞内抗氧化酶相关蛋白表达水平,结果表明:WNWAD预处理可在一定程度上恢复H2O2诱导损伤的HEK293细胞中抗氧化酶CAT、SOD和GSH-PX的蛋白表达水平。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.2 仪器与设备

1.3 试验方法

1.3.1 蛋清肽DPPH自由基清除活性测定

1.3.2 蛋清源活性肽对ABTS自由基清除活性测定

1.3.3 蛋清肽氧化自由基吸收能力（ORAC）测定

1.3.4 蛋清肽对HEK293细胞的毒性作用

1.3.5 蛋清源活性肽对H2O2氧化损伤的HEK293细胞的保护作用

1.3.6 HEK293细胞LDH、MDA、CAT、T-SOD和GSH-PX检测

1.4 统计学处理

2 结果与分析

2.1 蛋清源五肽DPPH自由基清除能力

2.2 蛋清源五肽ABTS+·自由基清除能力

2.3 蛋清源五肽氧自由基吸收能力（ORAC活性）

2.4 蛋清源五肽对H2O2诱导损伤HEK293细胞存活率的影响

2.5 蛋清肽对HEK293细胞的毒性作用

2.6 蛋清肽对HEK293细胞中LDH、MDA、CAT、T-SOD和GSH-PX活性的影响

2.7 蛋清肽对HEK293细胞中抗氧化酶CAT、SOD和GPX-1表达的影响

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张燕,陈志飞,赵颂宁,张婷,刘静波

关键词: 蛋清源活性肽,细胞,抑制氧化应激,抗氧化酶活性,蛋白质免疫印迹技术

来源: 中国食品学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 吉林大学食品科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31471597),中央高校基本科研业务费专项(451170301197),吉林省科学技术厅重点实验室项目(20160622030JC)

分类号: TS201.2

DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.10.002

页码: 11-22

总页数: 12

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蛋清源抗氧化肽对HEK293细胞氧化应激损伤的抑制作用及机制

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