活性维生素D对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34的调控作用研究

活性维生素D对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34的调控作用研究

论文摘要

目的探讨活性维生素D(VitD)对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34(Vps34)的调控作用。方法 (1)体外培养永生化小鼠足细胞,用高糖30 mmol/L培养0、3、6、12、24、36、48 h后,采用Western blot检测微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1和Vps34的蛋白表达,激光共聚焦观察足细胞骨架蛋白Synatopodin、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达变化;(2)1α,25二羟维生素D3[1α,25(OH)2D3](1、10、100 nmol/L)和高糖(HG,30 mmol/L)培养足细胞48 h,激光共聚焦观察Synatopodin、LC3-Ⅱ的表达变化,透射电镜下观察足细胞内自噬体的形成,Western blot及RT-qPCR半定量检测LC3-Ⅱ、Beclin-1和Vps34的蛋白和mRNA表达;(3)加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,10 mmol/L)作用48 h后,Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin-1和Vps34的蛋白表达。结果足细胞经高糖处理后LC3-Ⅱ表达增强,Beclin-1和Vps34的蛋白和mRNA水平也逐渐升高,24 h达高峰,随后表达逐渐降低(P<0. 05)。与高糖组相比,高糖+1α,25(OH)2D3(HG+VitD)组Beclin-1、Vps34蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性上调,抑制高糖长时刺激导致的自噬活性下降(P<0. 05);与HG+VitD组相比,HG+VitD+3-MA组足细胞Beclin-1、Vps34蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0. 05)。结论足细胞在高糖刺激下早期自噬活性增强,长期刺激自噬抑制;1α,25(OH)2D3可能是一种自噬活化剂,通过调控自噬相关蛋白Beclin-1、Vps34水平,促进自噬溶酶体形成,改善高糖诱导的足细胞损伤。

论文目录

  • 材料与方法
  •   一、实验材料
  •   二、实验方法
  •   三、统计学处理
  • 结果
  •   一、不同时间高糖处理足细胞对自噬的影响
  •   二、1α,25(OH)2D3对高糖环境下足细胞自噬的影响
  •   三、加入自噬抑制剂3-MA后各组Beclin-1、Vps34和LC3-Ⅱ的蛋白表达比较
  • 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 温影珍,肖厚勤,刘越存,刘双信,张鸿,柯贵宝,周燕梅,张晓艺,苏玉玲

    关键词: 二羟维生素,足细胞,自噬,空泡分选蛋白

    来源: 中国糖尿病杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 内分泌腺及全身性疾病,泌尿科学

    单位: 东莞市第五人民医院肾内科,广东省人民医院肾内科

    基金: 国家自然科学基金(81470950),东莞市社会发展项目(2015108101024)

    分类号: R587.2;R692.9

    页码: 909-916

    总页数: 8

    文件大小: 4660K

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