人脐血内皮祖细胞高效提取技术及干性维持培养方法

论文摘要

目的:心血管疾病始终是近年来研究者关注的重点,而内皮祖细胞被认为是血管修复及重塑的主要来源细胞。本研究探寻了能高效分离培养人脐血来源内皮祖细胞的简便方法,并评估了内皮祖细胞的干性及生物学功能。方法:将血液等比加在离心液上层,改良密度梯度离心法获取脐血单个核细胞;以改良的内皮细胞培养基孵育EPCs;采用qRTPCR、流式细胞术分析内皮祖细胞相关标记分子及干性标记分子的表达;细胞双吞实验,共聚焦显微镜检测DiI-Ac-LDL及FITC-UEA-1双染情况;分别采用Matrigel基质胶、Boyden小室检测不同代数内皮祖细胞体外成血管与迁移的能力;通过HE、细胞骨架F-actin染色评估不同代数细胞形态学变化。结果:改良后的提取方法可获得较高数量及质量的单个核细胞,改良的内皮细胞培养基培养14天左右可获得成集落式生长的内皮祖细胞,形态呈典型的铺路石状;内皮标记分子CD31、VE-cadherin、vWF的表达以及双吞实验鉴定阳性;此外,晚期内皮祖细胞在不同代数（20代）内细胞形态学、成血管与迁移的能力未发生明显改变;其扩增能力强,可进行长期传代。结论:用改良后的分离技术及培养液可在短时间内获取大量纯度较高的人脐血内皮祖细胞,而且方法简单,细胞产量多,细胞增殖、生物学特性稳定。可为体外的一系列相关实验提供稳定的细胞模型。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 王美月,高雨,贺燕婷,李兰兰,李继凤,崔晓栋,李宏,官秀梅,张晓芸,成敏

来源: 2019年中国生理学会心血管生理学术研讨会 2019-08-19

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 潍坊医学院临床医学院

分类号: R329.2

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.066755

页码: 58

总页数: 1

文件大小: 56k

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