导读:本文包含了喹赛多论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:层析,核蛋白,蛋白,羧基,模型,嘌呤,核糖。
喹赛多论文文献综述
刘艳清,曾东文,汪洪武,姚夙,朱培杰[1]（2019）在《羧基化碳纳米片电化学传感器的研制及其在喹赛多灵敏检测中的应用》一文中研究指出本文构筑了一种基于羧基化碳纳米片修饰电极的喹赛多电化学传感器,该传感器对喹赛多的电化学还原具有优良的催化性能。与金电极相比,其电流增幅达到30余倍。通过优化羧基化碳纳米片涂覆量,Na_3PO_4浓度,电解液pH,富集电位,富集时间,搅拌速度等测试条件,建立了基于羧基化碳纳米片修饰电极的喹赛多超高灵敏度分析方法,其检出限可达3.79×10~(-9) mol·L~(-1)(S/N=3)。利用该方法对加标猪肉样品进行检测,结果令人满意。(本文来源于《化学研究与应用》期刊2019年05期）
斯琴朝克图,章爱群,毛清黎,杨新河,袁宗辉[2]（2018）在《喹赛多及其两种代谢产物在鸡体内消除规律研究》一文中研究指出通过喹赛多(Cyadox,CYX)的不同给药方式,研究CYX及其两种重要代谢产物在鸡体内消除规律,了解其对食品安全的影响,并为今后的药理学和毒理学研究提供较为详细的数据基础。建立并优化了喹赛多、脱二氧喹赛多(BDCYX)和喹啉-2-羧酸(QCA)在鸡血浆、胆汁、可食性组织和粪便中的提取、纯化及HPLC检测方法,并通过按推荐剂量连续混饲给药7 d和一次性灌胃给药两种不同给药方式,研究喹赛多及其两种代谢产物在鸡体内消除规律。结果表明,连续混饲给药7天后在血浆、肝脏、肾脏、肌肉、脂肪中均未检测到CYX,停药后6 h和24 h的肝脏样品中检测到BDCYX。除了胆汁以外,所检测的其它上述5种组织中均检测到QCA,肝脏和肾脏中持续检测到72 h。一次性灌服CYX后的鸡排泄物中CYX原形和BDCYX在给药后2 d便无法检出,QCA可检测到第3天。研究结果为喹赛多药理学和毒理学研究提供了可直接借鉴的参考数据。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2018年01期）
张雪伟[3]（2017）在《喹赛多对猪痢疾和鸡大肠杆菌病的PK-PD同步模型研究》一文中研究指出猪痢疾短螺旋体和致病性大肠杆菌在大型集约化养殖场中广泛存在,而且不易根除,导致畜禽死亡率升高,生产性能下降,给畜禽养殖业造成了重大的经济损失。体外药敏试验表明新兽药喹赛多对猪痢疾短螺旋体和大肠杆菌抗菌活性较好,在治疗鸡大肠杆菌病和猪痢疾方面有较大潜力。本实验主要内容是研究喹赛多对猪痢疾和鸡大肠杆菌病的防治作用,通过PK-PD模型预测并制定合理的用药方案,进一步阐明喹赛多对于畜禽养殖业中常见疾病的临床防治效果,为喹赛多的申报提供理论依据。将其发展成为喹恶啉类药物的替代产品,对于养殖业的发展意义非凡。1喹赛多在健康和感染猪回肠内的药动学研究本实验选取15 kg左右的断奶仔猪安装回肠瘘管,并将12头猪随机分为两组,对照组和试验组各6头。试验组猪人工接种猪痢疾短螺旋体B204,建立猪痢疾疾病模型。对照组和试验组猪均按30 mg/kg体重单次灌服喹赛多,分别在给药后0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、24 h取回肠内容物3～4 mL,样品经前处理后用高效液相色谱法检测回肠内容物中喹赛多浓度。采用Winnonlin软件对药动学数据进行拟合,得到喹赛多在健康猪和患病猪回肠内的药动学参数。结果显示,给药2h喹赛多在健康猪和患病猪回肠内的药物浓度最高,药物在健康猪回肠内的峰浓度Cmax为34.55 μg/mL,药时曲线下面积AUC为123.56 h·μg/mL,半衰期T1/2为3.25 h,清除率CL-F为0.24 L/h/kg,滞留时间MRT为4.20 h;药物在患病猪回肠内的峰浓度Cmax为 33.36 μg/mL,药时曲线下面积 AUC 为 120.27 h·μg/mL,半衰期 T1/23.01h,清除率CL-F为0.25 L/h/kg,滞留时间为4.08 h。2喹赛多在健康和感染鸡回肠内的药动学研究将120羽一月龄体重1.2 kg左右的叁黄鸡随机分为2组,每组60羽。试验组鸡人工接种大肠杆菌AH245构建鸡大肠杆菌疾病模型。按30 mg/kg体重对鸡单次灌喹赛多,分别在给药后0.5、1、2、3、4、6、8、12、24 h取回肠内容物3～4mL,样品前处理后用高效液相色谱法对回肠内容物中喹赛多浓度进行检测。采用Winnonlin软件对药动学数据进行拟合,得到喹赛多在健康鸡和患病鸡回肠内的药动学参数。结果显示,喹赛多在健康鸡回肠内的达峰时间T为1.15 h,峰浓度Cmax为157.99μg/mL,药时曲线下面积AUC为392.83 h·μg/mL,药物浓度高于MIC的时间T>MIC为7.01h,半衰期T1/2为0.65h,清除率CL-F为0.076L/h/kg;喹赛多在患病鸡回肠内的达峰时间T为1.31 h,峰浓度Cmax为 111.12μg/mL,药时曲线下面积AUC为322.52 h·μg/mL,药物浓度高于MIC的时间T>MIc为7.65 h,半衰期T1/2为 0.74 h,清除率 CL-F 为 0.093 L/h/kg。3喹赛多药效学研究采用肉汤稀释法测定厌氧条件下喹赛多在肉汤培养基、空白无菌回肠液中对鸡大肠杆菌AH245和猪痢疾短螺旋体B204的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,体外和半体内条件下喹赛多对大肠杆菌AH245的MIC均为2μg/mL,MBC均为8 μg/mL;喹赛多对猪痢疾短螺旋体B204的MIC均为0.0625μg/mL,MBC均为0.25μg/mL。通过测定高浓度菌液在含药琼脂平皿上是否生长,测得喹赛多对大肠杆菌AH245的最小防突变浓度(MPC)为128 μg/mL,耐药选择突变窗(MSW)为2～128 μg/mL;喹赛多对猪痢疾短螺旋体B204的MPC为0.25 μg/mL,MSW 为 0.0625～0.25 μg/mL。根据 MIC 结果,设置 0 MIC、1/2 MIC、1 MIC、2 MIC、4 MIC、8 MIC、16 MIC、32 MIC 一系列不同浓度的药物,测定喹赛多对大肠杆菌AH245和猪痢疾短螺旋体B204的杀菌效果。结果表明,随着药物浓度的增加,喹赛多杀菌所需时间变短。当喹赛多浓度高于4 MIC时仅用4 h就可以将AH245完全杀灭,在喹赛多浓度为1 MIC时,18 h时大肠杆菌出现恢复生长现象;喹赛多浓度高于8 MIC,2～4 h内可达到完全杀灭B204的效果,1～2MIC能明显抑制B204的生长。取各时间点过滤除菌的含药回肠内容物,分别接种同浓度的AH245和B204菌液,37℃厌氧条件下进行孵育,在不同的时间点进行涂板计数,绘制半体内杀菌曲线。结果表明,喹赛多在猪和鸡肠内容物中都呈现明显的浓度依赖特性,与体外试验结果一致。4半体内PK-PD模型拟合与给药方案制定利用抑制型Sigmoid Elax模型对健康组和感染组的AUC24/MIC与细菌数量变化的对数值进行拟合。由体外药效学试验结果可知,喹赛多呈浓度依赖性,故选择参数AUC24/MIC进行Sigmoid Emax方程的拟合。结果显示患病鸡的半体内PK-PD方程为:E=2.69-8.63*C1.97/200.791.97+C1.97,当E=0、-3、-4(抑菌、杀菌、根除)时,对应的C值,即半体内AUC/MIC值分别为134.31、280.74、376.40。结合给药方程(Dose=(AUC24/MIC)×MCI×CL/fu×F可得不同条件下针对鸡大肠杆菌病的预防给药剂量为24.98 mg/kg/d,治疗给药剂量为52.22 mg/kg/d,根除给药剂量为70.01 mg/kg/d。患病猪的半体内PK-PD方程为:E= 2.43-7.87*C3.71/487.393.71+C3.71,当E=0、-3、-4(抑菌、杀菌、根除)时,对应的半体内AUC/MIC值分别为360.37、569.81、695.19。结合给药方程(Dose =(AUC24/MIC)×MIC× CL/fu×F,可得不同条件下针对猪痢疾的预防给药剂量为5.85mg/kg/d,治疗给药剂量为8.83mg/kg/d,根除给药剂量11.35 为 mg/kg/d。5模型验证用大肠杆菌AH245感染鸡建立鸡大肠杆菌疾病模型,将喹赛多按52.22 mg/kg/d(250 ppm)的剂量混饲,对试验组的患病鸡进行给药治疗,结果显示该剂量治疗.后喹赛多对试验组鸡的治愈率为88.89%。用猪痢疾短螺旋体B204感染猪建立猪痢疾疾病模型,将喹赛多按8.83 mg/kg/d(160 ppm)的剂量混饲,对试验组患病猪进行给药治疗,结果显示该剂量喹赛多治疗后试验组猪无死亡,保护率为83.33%。综上所述,本课题阐明了喹赛多对大肠杆菌和猪痢疾短螺旋体的抗菌作用特点,揭示了喹赛多在猪、鸡消化道内的药动学特征,通过半体内PK-PD模型的研究,确定了喹赛多在防治鸡大肠杆菌病和猪痢疾时的给药方案,为新兽药的申报和喹赛多的临床合理应用提供了科学依据。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-12-01）
王芳[4]（2017）在《喹赛多对鸡产气荚膜梭菌的药动学—药效学同步关系及临床疗效研究》一文中研究指出鸡坏死性肠炎是由产气荚膜梭菌引起的以肠道黏膜出血性坏死为主要特征的消化道传染病,具有较高的发病率和死亡率,给禽类养殖业造成了严重损失。喹赛多作为喹恶啉类新品种药物,对产气荚膜梭菌有较好的抗菌活性,且灌服给药后鸡消化道内药物浓度远远高于血药浓度,加之其毒副作用小,休药期短,适宜用作鸡坏死性肠炎的治疗药物,具有巨大开发潜能。本课题研究了喹赛多对鸡源产气荚膜梭菌的体外和半体内抗菌作用及喹赛多在鸡消化道内的代谢动力学,通过建立喹赛多对鸡源产气荚膜梭菌的半体内PK-PD模型,制定了喹赛多用于治疗鸡坏死性肠炎的给药方案,并按照基于PK-PD制定的给药方案,开展了喹赛多对鸡坏死性肠炎的随机对照治疗试验,为指导喹赛多临床应用提供了理论依据与基础实践。1.喹赛多对产气荚膜梭菌的药效学研究参考临床实验室标准化研究所(CLSI)制定的相关标准文件,采用琼脂稀释法测定喹赛多对61株鸡源产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度(MIC),使用SPSS软件对MIC值进行统计,计算得到喹赛多对鸡源产气荚膜梭菌的MIC50和MIC90。筛选出MIC50附近且致病性较强的菌株,采用微量稀释法测定喹赛多在肉汤培养基和鸡回肠内容物中对该菌株的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),通过平板涂布法将浓缩至1010CFU/mL的产气荚膜梭菌菌液涂至含喹赛多的琼脂平板测定防突变浓度(MPC),采用药物去除的方法测定喹赛多对产气荚膜梭菌的抗菌后效应(PAE),分别用含有不同浓度喹赛多的培养基和各时间点采集的回肠内容物进行体外和半体外杀菌曲线试验。结果表明喹赛多对61株鸡源产气荚膜梭菌的MIC值介于1～16 μg/mL,MIC50为2.11μg/mL,MIC90为4.40μg/mL,选取MIC50附近且致病性较强的菌株cvcc2030,在体外和半体内条件下测得喹赛多对产气荚膜梭菌cvcc2030的抗菌活性相同,MIC均为2μg/mL,MBC均为4μg/mL。喹赛多对产气荚膜梭菌cvcc2030的MPC为20μg/mL,将产气荚膜梭菌cvcc2030暴露在不同浓度喹赛多溶液中1 h和2 h,诱导产生的PAE分别为0.88 ～ 1.24 h和1.01～1.89 h。体外和半体内杀菌曲线试验结果均显示喹赛多对产气荚膜梭菌的抗菌作用类型为浓度依赖型。2.喹赛多在鸡消化道内的药动学研究选用110羽4周龄叁黄肉鸡,随机分为2组,每组55只,其中一组攻毒产气荚膜梭菌cvcc2030,构建坏死性肠炎疾病模型。疾病模型构建成功后,对健康组和疾病组鸡只均按30 mg/kg体重进行单次灌胃给药。于给药后0.5 h、0.75 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h每个时间点分别取5只鸡进行定点宰杀,取其回肠内容物,采用高效液相色谱法(HPLC)测定各时间点回肠内容物中喹赛多的药物浓度。将测得的各时间点回肠内容物中喹赛多的药物浓度使用Winnonlin软件进行拟合,结果显示健康组和患病组的AUC分别为410.75 h·μg/mL和361.82 h·μg/mL,Cmax分别为172.89μg/mL和151.76μg/mL,T1/2λ分别为5.69 h和5.82 h,CL/F分别为72.44 mL/kg/h和82.27mL/kg/h,MRT分别为2.59h和2.49h。表明鸡灌服喹赛多后能在肠道达到较高浓度,但平均滞留时间较短,且健康组和患病组药动学参数并无明显差异。3.半体内PK-PD模型拟合与药给药方案制定利用Sigmoid Emax方程对半体内杀菌曲线试验中AUC24h、MIC值与产气荚膜梭菌浓度变化对数值进行拟合,计算当E = 0、-3、-4时PK/PD参数AUC24h/MIC折点值。采用平衡透析法得到喹赛多在鸡消化道的游离药物比例,结合给药剂量公式:DOse = CL×(AUC/MIC)Bp×MIC/E×f,利用 pK-PD 参数 AUC24h、MIC 折点值计算达到预防、治疗和根除效应的日给药剂量。半体内PK/PD模型拟合得到的方程为(?),当(?)E=0、-3、-4时计算得到的对应的抑菌、杀菌、根除作用的AUC24h/MIC折点值分别为27.71 h、78.93 h、165.14 h。测得喹赛多在鸡消化道的游离药物比例为0.47,结合给药剂量公式,针对本试验受试菌株,得到的预防、治疗和根除鸡坏死性肠炎的日给药剂量为9.70、27.63、57.81 mg/kg,将日给药剂量转化为饲料添加剂量分别为100、3 00、600 mg/kg。4.随机对照治疗试验将210羽3周龄科宝肉鸡随机分为6组:健康对照组35羽,不感染不给药;阴性对照组35羽,感染不给药;阳性对照组35羽,感染给予磷酸泰乐菌素预混剂200 mg/kg饲料混饲给药;试验组根据基于PK/PD制定的给药方案,低、中、高剂量组分别按150 mg/kg、300 mg/kg、600 mg/kg饲料混饲给药,每组35羽。对各组的疗效指标、肠道损伤程度及产气荚膜梭菌活菌菌落数进行统计。结果显示喹赛多低、中、高剂量组的死亡率分别为17.14%、11.43%、8.57%,有效率分别为 77.14%、85.71%、91.43%,治愈率分别为 71.43%、85.71%、91.43%,平均日增重分别为53.24 g、62.64 g、65.74 g,料重比分别为2.19、2.00、1.94,肠道病变记分分别为0.97、0.69、0.54,产气荚膜梭菌活菌菌落数(LogCFU/g)为6.25、5.45、4.67。喹赛多中、高剂量组各指标间无显着性差异,综合各方因素,当临床分离菌株MIC ≤ 2 μg/mL时,推荐以300 mg/kg饲料混饲治疗鸡坏死性肠炎。本课题阐明了喹赛多对鸡产气荚膜梭菌的抗菌特性,揭示了喹赛多在健康鸡和患病鸡消化道内的药动学特点,建立了喹赛多对鸡坏死性肠炎的半体内PK-PD模型,制定了喹赛多用于预防、治疗、根除鸡坏死性肠炎的给药方案,并开展随机对照治疗试验对给药方案进行验证,对有效控制鸡坏死性肠炎,同时丰富喹赛多的临床应用具有重要意义。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
邵羊阳[5]（2017）在《喹赛多与其靶蛋白hnRNP A2/B1相互作用研究》一文中研究指出喹赛多是喹恶啉类化合物饲料添加剂,兼有抑菌及促生长功效,且安全低毒、用药后迅速吸收及消除、残留期短、无蓄积,在畜牧生产中具有良好的应用潜力。本实验室通过连续亲和层析实验和生物质谱技术初步筛选出喹赛多在人正常肝细胞HL-7702(L-02)内的特异结合蛋白为核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1),并且用分子对接软件预测出它们之间的结合位点为Lys(101)、Arg(102)和Ala(105)。但是喹赛多与hnRNP A2/B1的具体相互作用及它们结合后引起的生物学效应并没有得到确证和研究,而喹赛多与靶蛋白之间作用位点、亲和力的研究对于弄清楚其药理机制具有重要的意义。本课题将通过体外重组表达hnRNP A2/B1蛋白及其突变蛋白,进行表面等离子体共振实验(SPR),研究喹赛多与hnRNP A2/B1之间的结合特性,并通过RNA干扰实验(RNAi)研究hnRNP A2/B1对喹赛多调节细胞内增殖相关基因表达的影响,分析喹赛多促生长的作用机理。1喹赛多与hnRNP A2/B1的相互作用针对分子对接中预测的喹赛多与hnRNP A2/B1的3个结合位点,Lys(101)、Arg(102)和Ala(105),根据氨基酸定点突变原则分别将其突变为Ala(101)、Ala(102)和Gly(105)。构建原核表达质粒pET28a-hnRNP A2/B1、Lys101Ala、Arg102Ala、Ala105Gly,通过大肠杆菌体外大量表达目的蛋白,利用His-tag亲和Ni柱纯化目的蛋白并用Western blot技术验证后,与喹赛多进行SPR实验。通过多循环方法检测到喹赛多与hnRNP A2/B1及突变蛋白R(R101A)和A(A102G)都能结合,具有浓度依赖性。同时喹赛多与野生型hnRNP A2/B1的亲和力要强于突变蛋白,因此Arg(102)对其结合有一定的影响,而对Lys(101)进行突变后蛋白与喹赛多完全失去相互作用,说明Lys(101)直接参与了喹赛多与hnRNP A2/B1的结合,是一个关键的结合位点。2喹赛多作用L-02细胞产生的生物学效应通过RNAi实验抑制L-02细胞内的hnRNP A2/B1后,用实时荧光定量qRT-PCR检测喹赛多作用前后hnRNP A2/B1、mki-67、c-myc、ccnd2、p21 mRNA的表达变化。结果发现将L-02细胞内hnRNP A2/B1干扰后5种基因的mRNA表达水平均有显着性下调,说明在L-02细胞内这4种基因与hnRNP A2/B1关系密切。同时,使用2mM喹赛多孵育L-02细胞1h后,空白加药组与干扰加药组之间各基因表达相比均有显着性差异,说明hnRNP A2/B1对喹赛多调节下游基因有重要的作用。结合SPR实验结果喹赛多在体外能直接与hnRNP A2/B1结合,推测喹赛多在L-02细胞内也很有可能通过与hnRNP A2/B1结合产生效应。用2mM喹赛多孵育L-02细胞1h后,通过qRT-PCR检测到hnRNP A2/B1、mki-67、c-myc、ccnd2、p21的mRNA水平均有显着性的上调,可以推测喹赛多作用于L-02细胞后,与细胞生长和增殖密切相关的mki-67和c-myc的mRNA水平随着hnRNP A2/B1的上调而上调,随着时间的延长,与细胞周期及凋亡相关的ccnd2及p21等基因出现了负反馈调节,控制细胞生长的速度。综上所述,本课题通过SPR和RNAi实验研究了喹赛多与hnRNP A2/B1的相互作用和喹赛多作用细胞后引起的生物学效应,发现hnRNP A2/B1在体外能与喹赛多直接结合,且Lys(101)是其相互作用中的关键结合位点,Arg(102)则对hnRNP A2/B1与喹赛多的结合有一定的影响。喹赛多作用于L-02细胞后,与细胞生长和增殖密切相关的mki-67和c-myc的mRNA水平随着hnRNP A2/B1的上调而上调,可能使细胞增殖加快。同时为了保持细胞内的动态平衡,避免出现异常的过度增殖,与细胞周期及细胞凋亡相关的ccnd2及p21基因出现了负反馈调节,减缓细胞增殖的速度。因此,喹赛多作用于L-02细胞后很有可能与hnRNP A2/B1相结合激活下游通路,通过调节与细胞生长、增殖、凋亡相关基因的表达发挥促生长作用。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
朱锋[6]（2017）在《喹赛多对DNA甲基化、组蛋白修饰和染色质结构的影响》一文中研究指出喹赛多是抗菌促生长作用较好的一种喹恶啉类药物,其对动物机体的生长发育产生重要影响,适合用于食品动物的养殖业。虽然目前已有大量关于喹赛多药理学机制的研究,但是喹赛多促生长作用的分子机制仍然不是很清楚。前期已经从喹赛多作用下基因的表达、蛋白和激素的分泌、表型的变化等方面进行了研究,但是由于生物体是一个复杂的体系,其生长受到很多因素的影响,为了更好的说明喹赛多促生长作用仍需从多方面进一步研究。表观遗传学变化主要是指遗传物质的修饰,如DNA的甲基化、组蛋白修饰和染色质重塑等,这些遗传物质的修饰可以通过影响基因的启动来对基因的表达变化产生调控,进而对机体的生长、发育产生影响。那么喹赛多作用于细胞后是否可以引起机体表观遗传学变化?喹赛多是否可以通过影响表观遗传学变化进而影响机体的生长发育?答案是未知的,仍需进一步研究。在动物机体的生长发育过程中,内分泌系统起着极其重要的作用,其中IGF-1(Insulin-like Growth Factor-1)是机体正常生长发育不可缺少的物质,而肝脏不但是IGF-1的主要分泌器官,而且还是各种不同药物与机体直接接触及在体内进行代谢的主要器官。为了进一步揭示喹赛多的促生长作用机理,本课题以重组生长激素(rGH)为对照药,以基因IGF-1为切入点,以大鼠的肝细胞(BRL细胞)为实验材料进行相应的表观遗传学实验。1.喹赛多于BRL细胞时间和剂量的确定(筛选对细胞生长最有利的条件)本课题采用MTT法,以细胞线粒体内产生的琥珀酸脱氢酶(SDH)的含量为指标,检测药物作用下细胞的活力,并结合细胞生长状态和IGF-1 mRNA表达量来确定喹赛多和对照药物rGH作用于BRL细胞的时间和剂量。实验结果表明,1μmol/L的喹赛多和0.163×2-8 IU/ml的rGH分别作用于BRL细胞4 h后细胞中SDH的含量相对较高,且细胞的生长状况良好,基因IGF-1 mRNA表达水平上调明显,且与生长相关的基因GHR mRNA表达水平和IGF-1R mRNA表达水平也上调明显,对细胞生长发育有利,由此确定可以用1μmol/L的喹赛多和0.163×2-8 IU/m L的rGH分别作用于BRL细胞4 h进行后续的实验。2.喹赛多对BRL细胞内DNA甲基化的影响用1μmol/L的喹赛多和0.163×2-8 IU/mL的r GH(对照药)分别作用于BRL细胞4h,发现喹赛多和rGH都可以引起BRL细胞基因组DNA甲基化水平增加,不利于某些基因的表达,而且BRL细胞基因组DNA甲基化水平会随着喹赛多剂量的增加而改变,不会随着时间的改变而发生变化。用BSP法检测基因IGF-1启动子区域甲基化水平却发现1μmol/L的喹赛多和0.163×2-8 IU/m L的rGH分别作用于BRL细胞4 h后可以引起基因IGF-1启动子区域大部分CpG位点甲基化水平降低,这一现象是有利于转录因子与基因IGF-1启动子区域结合形成转录起始复合物,有利于基因IGF-1的转录,促使IGF-1 mRNA表达水平增加。通过RT-PCR实验发现细胞内DNA甲基化水平的变化可能与DNA甲基化相关酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B有关,可能是药物通过影响DNA甲基化相关酶的变化进而影响细胞内的DNA甲基化水平。3.喹赛多对BRL细胞内组蛋白修饰(H3K4me3和H3K27ac)的影响细胞内组蛋白H3K4me3修饰水平和H3K27ac修饰水平与基因的转录水平有关,对细胞的生长发育产生重要影响。研究发现喹赛多和rGH都可以引起BRL细胞内H3K4me3修饰水平和H3K27ac修饰水平明显降低,且在0~4 h内随着细胞与药物接触时间的增加,BRL细胞内H3K4me3修饰和H3K27ac修饰水平逐渐降低,这一现象对某些基因的转录表达是不利的。通过ChIP-qPCR实验发现,喹赛多和rGH都可以引起BRL细胞内基因IGF-1启动子区域H3K4me3修饰和H3K27ac修饰水平明显增加,促进IGF-1 m RNA表达水平。而且研究发现这些组蛋白H3K4me3修饰水平和H3K27ac修饰水平的增减可能与H3K4me3修饰酶和H3K27ac修饰酶密切相关。4.喹赛多对BRL细胞内染色质结构的影响为了进一步观察喹赛多和对照药rGH作用于BRL细胞后对细胞内染色质结构的影响,我们以细胞内染色质上组蛋白H3K4me3修饰和H3K27ac修饰为参照,结合激光共聚焦显微镜观察喹赛多和对照药物rGH对染色质结构的影响,结果发现,BRL细胞在喹赛多和对照药物rGH作用下BRL细胞核中可见空间变小,染色质之间的空隙变得更大。添加抑制剂5-氮杂-2脱氧胞嘧啶核苷后,与喹赛多处理组和rGH处理组相比,细胞中细胞核内可见空间变大,细胞中染色质之间的空隙变得更小。由此可以推测BRL细胞在喹赛多和rGH作用下染色质结构发生了变化,变得更加疏松,有利于转录起始复合物的形成,可能更有利于基因(如基因IGF-1)的转录和表达。通过对研究结果进行分析,可知:第一,喹赛多和rGH都可能通过调控DNMTs影响细胞内DNA甲基化程度,一方面,引起BRL细胞内基因组DNA甲基化水平增加,抑制某些基因表达,另一方面,却可以引起基因IGF-1启动子区域大部分CpG位点甲基化水平降低,促进基因IGF-1 mRNA表达;第二,喹赛多和rGH都可能通过影响H3K4me3修饰酶和H3K27ac修饰酶,引起BRL细胞内H3K4me3修饰水平和H3K27ac修饰水平在0~4 h逐渐降低,抑制某些基因的表达,但是却可以引起基因IGF-1启动子区域H3K4me3修饰水平和H3K27ac修饰水平明显增加,促进基因IGF-1的转录;第叁,BRL细胞在喹赛多和rGH作用下,染色质结构变得更加疏松,有利于转录起始复合物的形成,可能更有利于基因(如基因IGF-1)的转录和表达。本研究首次从表观遗传学变化的多个方面,以rGH为对照药,以细胞整体水平及单个基因IGF-1为切入点,探究喹赛多是否可以引起表观遗传学变化及这些表观遗传学变化与生长发育之间的关系,为进一步说明喹赛多的促生长作用机理提供理论依据,而且本研究也为抗生素促生长作用的研究提供思路和参考。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
丁晓聪[7]（2016）在《喹赛多调控大鼠垂体腺瘤GH3细胞生长激素表达的机理研究》一文中研究指出喹赛多是喹恶啉类新品种药物,具有明显的抗菌促生长作用,又兼具毒副作用小、安全性高、用药吸收快、消除迅速、无蓄积残留等优点。为了能够更好地推广喹赛多的注册使用,本实验室对其药理作用进行了大量的研究。前期研究发现喹赛多在体内外均能够上调GH表达水平,并以GH3细胞为模型,通过基因组和蛋白组的分析方法,筛选到了大量的差异基因和差异蛋白。其中喹赛多孵育细胞1h后的基因芯片结果显示,共有15个差异基因,早期生长反应因子1(early growth response factor 1,Egr1)的上调倍数最大。Egr1为锌指结构转录因子,属于即刻早期反应基因,能够调控细胞内多个靶基因的表达。因此,推测Egr1在喹赛多药理作用的发挥中扮演重要角色。此外,大量研究表明喹赛多能够上调GH的合成,但是喹赛多是通过哪些信号通路来调控GH基因的表达,Egr1是否参与喹赛多上调GHmRNA表达的过程,目前还不清楚,这也是本课题所要研究的问题。1.GH3细胞中喹赛多调控GH表达的信号通路的确定为确定喹赛多调控GH3细胞中GH表达的信号通路,本研究选择了 7种信号通路抑制剂,采用实时荧光定量PCR的实验方法,在药物(2μM)孵育1h后,运用相对定量分析方法,检测各个抑制剂处理组和药物共处理组中GHmRNA表达水平的变化。发现加入抑制剂 AG490、LY294002、PD98059、FTS、MDL-12,330A、H89 后,共处理组中GHmRNA水平显着下调,由此确定AC/PKA、Jak/PI3K、Ras/ERK这叁条信号通路为喹赛多调控GH合成的调控路径,其中,AC/PKA、ERK信号通路的作用最为明显。2.喹赛多调控Egr1表达的时效关系和信号通路的确定为了确定喹赛多调控Egr1表达的上游信号通路是否为ERK信号转导通路,本研究首先以2μM喹赛多与GH3细胞进行孵育,孵育时间分别为0.5h、1h、2h、4h和8h,然后运用实时荧光定量PCR相对分析方法,检测不同处理组Egr1 mRNA表达水平的变化,结果显示孵育1h时细胞中Egr1 mRNA的表达量最高,因此确定药物与细胞孵育的最佳时间为1h;然后,选用PD98059(20μM)预处理细胞1h,加入喹赛多处理1h,检测Egr1 mRNA表达水平,发现PD98059能够显着抵消喹赛多对Egr1的上调作用,由此确定喹赛多调控Egr1的通路为ERK信号转导通路。3.Egr1-siRNA转染GH3细胞条件的确定为了深入研究Egr1的功能作用,本研究采用RNA干扰实验技术使Egr1沉默表达。选用脂质体2000将自身带有荧光标记的FAM-siRNA转染入GH3细胞,观察荧光分布状态,判断转染效率。确定转染试剂的用量后,利用阴性阳性对照siRNA优化转染条件,通过分别检测内参基因和靶基因的表达水平,发现40pmol和60pmol的siRNA剂量均能满足实验要求。最后,分别将叁条甲基化的Egr1-siRNA转染GH3细胞,分别采用实时荧光定量PCR和Western-Blot实验方法,检测转染后Egr1 mRNA和蛋白水平的变化,最终筛选出Olig01183siRNA符合实验要求,在剂量为40pmol时均能在基因水平和蛋白水平使Egr1沉默,由此确定40pmol Oligo 1183siRNA为RNA干扰所需的序列。4.Egr1在喹赛多上调GH表达中的功能分析通过RNA干扰技术使Egr1沉默表达成功后,分别检测喹赛多处理组中GH mRNA表达水平和CREB磷酸化水平变化,结果显示两者均极显着下调,说明Egr1参与调控GH的合成过程,并且能够下调CREB的磷酸化作用;同时,检测细胞中锌离子转运蛋白(solute carrier family 30,member1,Slc30a1)、蛋白特异性磷酸酶(dual specificity phosphatase 6,Dusp6)、金属硫蛋白(metallothionein 1a,Mt1a)、孤核受体(nuclear receptor subfamily 4,member 1,Nr4a1)的表达情况,发现干扰组 Dusp6 表达变化不显着,Mt1a下调表达,Nr4a1和Slc30a1均显着上调表达,而加入喹赛多后,Dusp6、Slc30a1和Mt1a下调表达,而Nr4a1仍然显着上调表达。说明Egr1与其他差异基因之间的调控关系比较复杂,其中,Nr4a1作为即刻早期反应基因,其转录可独立于Egr1的调控。综上所述,喹赛多孵育GH3细胞后,通过AC/PKA、Jak/PI3K、Ras/ERK这叁条信号通路调控GH合成,通过ERK1/2调控Egr1的合成,并且,在喹赛多作用细胞初期,主要通过MAPK/ERK信号通路发挥药理作用,而Egr1通过调控CREB磷酸化进而调控GH合成,在喹赛多调控GH合成中起桥梁作用。对于Egr1与其他差异基因间的功能研究,发现Nr4a1与Egr1同为锌指结构转录因子,同为即刻早期反应基因,它们之间不存在上下游的调控方式,而Slc30a1和Mt1a与Egr1之间主要因为锌离子浓度变化存在相互调控的作用方式,Dusp6与Egr1之间主要是因为ERK信号通路的磷酸化状态存在一定的调控作用。本研究探讨了喹赛多调控GH合成的信号通路,完善了喹赛多在分子水平对GH合成的调控的机理研究;确定了喹赛多对Egr1的上游调控通路;重点分析了 Egr1在喹赛多调控GH合成中的作用,并首次确定了 Egr1通过对CREB磷酸化的调控来影响GH的合成,为今后有关Egr1与GH的研究提供了重要的理论依据,为系统阐明喹赛多的促生长机理提供重要的数据支持,也为喹赛多进一步的开发利用提供重要参考。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
黄玲利,林周梦,周璇,祝美玲,Ronette,Gehring[8]（2015）在《喹赛多在猪体内残留的生理药动学预测模型研究》一文中研究指出生理药动学模型(PBPK)是预测药物在食品动物体内组织分布与消除的有效工具。目前PBPK模型在食品安全领域的应用主要集中于预测原形药物的残留消除,对于代谢物的残留预测鲜有报道。本研究首次构建了能同时描述喹赛多(Cyadox,CYA)及其残留标志物脱二氧喹赛多(Bisdesoxycyadox,BDCYA)在猪体内残留消除动态过程的PBPK模型。该模型包括CYA和BDCYA两个子模型,各子模型分别设置7个房室,包括血液、肝脏、肾脏、胃肠道、肌肉、脂肪和其他组织。模型假设CYA和BDCYA的分布仅受到血流速率限制,肝脏和肠道均可代谢发生代谢,主要经粪、尿和胆汁消除。通过文献调研获得猪各项生理参数和部分药动学参数。采用平衡透析法和稳态给药法分别测定了CYA和BDCYA的血浆蛋白结合率与组织/血浆分配系数,通过静脉输注给药测定CYA和BDCYA的肾清除率。利用文献报道的喹赛多口服给药5天的药动学和残留消除数据构建出CYA和BDCYA模型,然后外推至连续2个月混饲给药的暴露方式,最后利用连续混饲给药14天的残留消除数据对模型预测的准确性进行验证。结果表明,模型能同时准确模拟喹赛多和脱二氧喹赛多在口服和混饲两种给药方式下肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中停药后24-120h的残留消除特征。模型对混饲给药后6-12h肌肉中CYA和肾脏中BDCYA残留量的预测偏高。灵敏度分析表明,体重、吸收速率常数、生物利用度、肝脏代谢速率常数、肠道代谢速率常数、肾清除率均对模型预测结构有显着影响。蒙特卡洛分析结果表明,模型预测的CYA和BDCYA在各组织中残留量的分布范围较好地涵盖了目前文献报道的实测结果,证明模型具有良好的适用性。本研究构建的PBPK模型为喹赛多在食品动物的残留监控提供了新型预测手段,同时为实现PBPK模型同时预测兽药原形及其代谢物在食品动物体内的残留奠定了良好的基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集》期刊2015-10-20）
戴梦红,涂名,邵羊阳,王旭,刘振利[9]（2015）在《喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定》一文中研究指出【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹恶啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测L-02细胞中EGF mRNA的表达水平,以验证结构改造物的生物活性。将喹恶啉-2-甲醛-1,4-二氧与富含氨基的树脂基质ToyopearlAF-Amino-650M偶联,并利用高效液相色谱(HPLC)检测偶联效率。将固定化配体喹恶啉-2-甲醛-1,4-二氧-亲和基质与L-02细胞各亚细胞组分蛋白裂解液分别进行连续亲和层析(SAC)实验,通过生物质谱技术鉴定差异蛋白,并利用WesternBlot技术验证质谱结果的可靠性。利用RT-qPCR方法检测喹赛多孵育L02细胞后hnRNPA2/B1 mRNA、原癌基因c-mycmRNA、细胞增殖抗原Ki-67蛋白的基因mki-67mRNA及细胞周期基因p21、ccnd2mRNA的表达变化。【结果】与喹赛多作用类似,2μM喹恶啉-2-甲醛-1,4-二氧孵育L-02细胞1 h后,即可显着(p<0.05)上调EGFmRNA的表达水平,而且将喹恶啉-2-甲醛-1,4-二氧作为配体与树脂基质进行偶联的效率能够达到75%以上。通过偶联得到的固定化配体捕获到5个差异蛋白,并成功鉴定3个,分别是核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)、核内不均一核糖核蛋白U(hnRNP U)以及核内不均一核糖核蛋白H(hnRNP H),均为细胞核蛋白。Western Blot结果显示,随着蛋白裂解液与固定化配体孵育次数的增加,hnRNP A2/B1蛋白丰度逐渐减小,因此说明hnRNP A2/B1蛋白是喹恶啉-2-甲醛-1,4-二氧的特异性结合蛋白。2μM喹赛多孵育L-02细胞1 h后,hnRNPA2/B1与mki-67基因分别出现显着性(p<0.05)下调与上调表达。10μM喹赛多作用细胞0.5 h后即可检测到mki-67 mRNA的表达水平上调显着(p<0.05),但是细胞周期蛋白D2相关基因ccnd2 mRNA在1 h时出现显着性(p<0.05)上调表达。因此我们推测喹赛多与hnRNP A2/B1蛋白结合后,通过调控细胞增殖与细胞周期等相关基因的表达,促进细胞生长。【结论】喹赛多能进入细胞核内与靶蛋白hnRNPA2/B1结合,调节下游基因的表达,从而促进细胞生长。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集》期刊2015-10-20）
程古月,陈持纲,郝海红,戴梦红,王旭[10]（2015）在《猪黄嘌呤氧化还原酶还原代谢喹赛多的机理研究》一文中研究指出黄嘌呤氧化还原酶(XOR)是一种存在于细胞浆的含钼蛋白,催化内源性的嘌呤和外源化合物的代谢。前期研究表明猪肝细胞中的XOR可以催化喹恶啉1,4-二-N-氧化物(QdNOs)的N-O基团的还原。为了探索该催化过程的分子机理,本研究克隆了猪XOR的cDNA并在杆状病毒-Sf9昆虫细胞中进行表达。以牛XOR的晶体结构为模板(氨基酸序列同源性为91%),利用同源建模技术构建了猪XOR的叁维结构。通过分子对接技术,筛选出猪XOR还原喹赛多的关键氨基酸残基。通过定点诱变技术和酶动力学分析,探究关键氨基酸残基的功能。结果显示Gly47、Asn352、Ser360、Arg427、Asp430、Asp431、Ser1227和Lys1230与喹赛多的距离小于4A。与野生型猪XOR相比,G47A、S360P、D431A、S1227A和K1230A在喹赛多还原代谢中的酶动力学参数发生改变,其变化趋势与黄嘌呤的氧化代谢一致,说明这些氨基酸影响了黄嘌呤的供电子过程,从而影响了喹赛多最后接受电子完成N-O基团的还原过程。与此不同的是,位于424-434环的R427E和D430H在喹赛多还原过程中分别展现较低的K_m值和较低的V_(max)值,表明Arg427可能与底物结合有关,Asp43可能与电子传递有关。本研究首次揭示了猪XOR还原代谢喹赛多的催化机制,为今后研究XOR还原外源二氮氧化物中的结构功能关系提供新思路。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集》期刊2015-10-20）
喹赛多论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过喹赛多(Cyadox,CYX)的不同给药方式,研究CYX及其两种重要代谢产物在鸡体内消除规律,了解其对食品安全的影响,并为今后的药理学和毒理学研究提供较为详细的数据基础。建立并优化了喹赛多、脱二氧喹赛多(BDCYX)和喹啉-2-羧酸(QCA)在鸡血浆、胆汁、可食性组织和粪便中的提取、纯化及HPLC检测方法,并通过按推荐剂量连续混饲给药7 d和一次性灌胃给药两种不同给药方式,研究喹赛多及其两种代谢产物在鸡体内消除规律。结果表明,连续混饲给药7天后在血浆、肝脏、肾脏、肌肉、脂肪中均未检测到CYX,停药后6 h和24 h的肝脏样品中检测到BDCYX。除了胆汁以外,所检测的其它上述5种组织中均检测到QCA,肝脏和肾脏中持续检测到72 h。一次性灌服CYX后的鸡排泄物中CYX原形和BDCYX在给药后2 d便无法检出,QCA可检测到第3天。研究结果为喹赛多药理学和毒理学研究提供了可直接借鉴的参考数据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
喹赛多论文参考文献
[1].刘艳清,曾东文,汪洪武,姚夙,朱培杰.羧基化碳纳米片电化学传感器的研制及其在喹赛多灵敏检测中的应用[J].化学研究与应用.2019
[2].斯琴朝克图,章爱群,毛清黎,杨新河,袁宗辉.喹赛多及其两种代谢产物在鸡体内消除规律研究[J].中国兽药杂志.2018
[3].张雪伟.喹赛多对猪痢疾和鸡大肠杆菌病的PK-PD同步模型研究[D].华中农业大学.2017
[4].王芳.喹赛多对鸡产气荚膜梭菌的药动学—药效学同步关系及临床疗效研究[D].华中农业大学.2017
[5].邵羊阳.喹赛多与其靶蛋白hnRNPA2/B1相互作用研究[D].华中农业大学.2017
[6].朱锋.喹赛多对DNA甲基化、组蛋白修饰和染色质结构的影响[D].华中农业大学.2017
[7].丁晓聪.喹赛多调控大鼠垂体腺瘤GH3细胞生长激素表达的机理研究[D].华中农业大学.2016
[8].黄玲利,林周梦,周璇,祝美玲,Ronette,Gehring.喹赛多在猪体内残留的生理药动学预测模型研究[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集.2015
[9].戴梦红,涂名,邵羊阳,王旭,刘振利.喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集.2015
[10].程古月,陈持纲,郝海红,戴梦红,王旭.猪黄嘌呤氧化还原酶还原代谢喹赛多的机理研究[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集.2015
论文知识图
