基于巯基-炔基点击化学的苯硼酸功能化材料的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用研究

基于巯基-炔基点击化学的苯硼酸功能化材料的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用研究

论文摘要

硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟。硼酸亲和材料的选择性、生物相容性、制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题。本研究针对硼酸亲和材料开发的关键问题,设计并制备了一种新型苯硼酸功能化材料(TYBA材料)。此材料采用基于巯基-炔基的无铜催化点击化学方法进行合成,生物相容性好,制备方法简便。红外光谱表征结果证明材料合成成功。采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测试TYBA材料的糖肽富集选择性,结果表明,TYBA材料能够分别从辣根过氧化物酶(HRP)和免疫球蛋白G(Ig G)酶解液中鉴定出11个和8个糖肽;以HRP-牛血清白蛋白(BSA)酶解液(1∶10,n/n)混合物作为研究对象,富集后能够鉴定出8个糖肽信号。采用SDS-PAGE凝胶电泳考察TYBA材料的糖蛋白富集选择性,以HRP、Ig G、核糖核酸酶B(RNase B)作为考察对象,结果表明,TYBA材料对不同类型糖蛋白具有较好的富集选择性。以实际人血清样品为测试对象验证TYBA材料在实际生物样品中的应用价值。结果表明,富集后非糖蛋白得到较大程度去除,糖蛋白得以富集。所制备的材料和方法具有大规模分离处理实际蛋白质样品的应用前景。

论文目录

  • 1 引言
  • 2 实验部分
  •   2.1 仪器与试剂
  •   2.2 巯基-炔基硼酸功能化材料 (TYBA) 的制备
  •   2.3 糖肽富集
  •     2.3.1 蛋白质酶解
  •     2.3.2 标准糖蛋白酶解物的富集
  •     2.3.3 糖蛋白与非糖蛋白酶解液混合物的富集
  •   2.4 糖蛋白富集
  •     2.4.1 糖蛋白与非糖蛋白混合物的富集
  •     2.4.2 多种糖蛋白与非糖蛋白混合物的富集
  •     2.4.3 血清样品中糖蛋白的富集
  • 3 结果与讨论
  •   3.1 TYBA材料的表征
  •   3.2 TYBA材料用于糖肽富集
  •     3.2.1 标准糖蛋白酶解物的富集
  •     3.2.2 糖蛋白与非糖蛋白酶解物混合物的富集
  •   3.3 TYBA材料用于糖蛋白的富集
  •     3.3.1 糖蛋白富集选择性考察
  •     3.3.2 多种糖蛋白与非糖蛋白混合物的富集效果
  •     3.3.3 实际样品中糖蛋白的富集效果
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张丽媛,王立恒,王丽莉,董佩佩,刘和真,赵艳艳

    关键词: 硼亲和色谱,糖肽,糖蛋白,分离,富集

    来源: 分析化学 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 化学,材料科学

    单位: 大连医科大学基础医学院,大连市第二人民医院骨科康复中心,大连医科大学药学院

    基金: 国家自然科学基金项目(Nos.21105007,21505015),辽宁省教育厅科学研究重点项目(No.LZ2016001),大连市支持高层次人才创新创业计划(No.2016RQ041),辽宁省自然科学基金(No.20170540286)资助~~

    分类号: TB34;O652.6

    DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.181511

    页码: 155-162

    总页数: 8

    文件大小: 1214K

    下载量: 353

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