硫氧还蛋白促进人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中高效可溶表达

论文摘要

为实现人胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor-1,IGF-1）在大肠杆菌中的高效可溶表达,获得大量具生物活性的IGF-1。应用融合PCR技术构建trx-igf1融合基因,克隆至p ET30a载体。重组载体pET30a-Trx-IGF-1转化大肠杆菌C43（DE3）,并进行条件优化大量表达可溶性蛋白Trx-IGF-1。利用His标签纯化表达产物,对纯化蛋白进行Western blot与生物活性分析。构建的pET30a-Trx-IGF-1重组载体转化大肠杆菌C43（DE3）后,在30℃培养条件下1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,获得大量以可溶形式表达的融合蛋白Trx-IGF-1;采用Ni离子亲和层析,获得纯度达90%以上的融合蛋白,经Western blot检测具有IGF-1抗原活性。生物学活性检测显示,融合蛋白Trx-IGF-1能明显促进NIH3T3细胞增殖及细胞周期进展。本研究应用的载体蛋白Trx,能实现在大肠杆菌中高效可溶表达具生物活性的IGF-1,为包涵体蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达提供借鉴。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 万爱妮,徐栋生,蔡燕飞,陈蕴,金坚,李华钟

关键词: 胰岛素样生长因子,硫氧还蛋白,大杨杆菌,可溶,生物活性

来源: 食品与生物技术学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学药学院

基金: 国家863计划项目(2014AA021003)

分类号: Q78

页码: 50-57

总页数: 8

文件大小: 2067K

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