刘艳红[1]2003年在《异氟醚和电针预处理诱导脑缺血耐受及其机制研究》文中指出近年来，脑血管疾病的发病率呈不断上升趋势，手术患者在围术期发生脑缺血或脑损伤的危险性升高，为避免由于手术或麻醉的因素导致术后神经系统功能障碍，尤其是对于高危患者，合理的麻醉管理及预防显得尤为必要。预处理现象的发现为脑损伤机制研究及预防开辟了新的途径。越来越多的实验证明吸入麻醉药异氟醚(Iso)具有明显的脑保护作用，在围术期预防脑缺血损伤中可能具有重要价值；电针己广泛应用于脑血管疾病的治疗，研究发现缺血前给予电针预处理可同样产生脑保护作用，减轻脑缺血的损伤作用。本实验在以前研究的基础上，进一步探讨脑缺血前给予Iso或电针预处理所诱导的脑保护作用及其机制，为预处理方案应用于临床提供依据。 目的： 1、探讨钠离子通道在Iso预处理诱导延迟相脑缺血耐受中的作用 2、探讨腺苷A1受体和细胞内Ca~(2+)浓度的变化在Iso预处理诱导快速相脑缺血耐受中的作用； 3、研究电针预处理诱导脑缺血耐受的时程及其可能机制。 第四里匠大学硕士学位论文 方法： l、钠离子通道在ISO预处理诱导延迟相脑缺血耐受中的作用 采用线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，缺血前ISO组动物给予吸入1．5％Iso预处理 lh，连续sd Lidocaine组给予盐酸利多卡因Omg·kg’，w）连续5天；Lidocaine刊So组在＊o处理乙前给予利多卡因：Control组，即单纯缺血再灌注络最弓一次处理24h后行MCAO模型。观察缺血 120min再灌注 24h后神经功能损害，并用 TTC染色技术测量脑梗死容积。 2、腺昔AI受体在ISO诱导的快速相脑缺血耐受中的作用 局灶性脑缺血模型同上。各组动物在缺血前lh分别接受不同处理：C。n汀。1组，动物吸入98％氧气lh：＊P＊PX组，动物在吸入98％氧气lh前给予腹腔注射腺昔 AI受体阻断剂 8－环戊基J，3－二丙基黄嘿吟（DPCPX）；卜。组动物给予吸入1．5％卜。和％％氧气lh：＊P＊P＊ns。组和＊＊S＊＋卜。组在接受吸入 l．5％IS。和 98％氧气 lh前分别给予腹腔注射 DPCPX和溶剂二甲基亚矾（DMSO）。缺血 120min再灌注 24后进行神经功能损害评分，测量脑梗死容积。 3、ISO预处理对缺血／再瀑注（k）损伤神经细胞内游离钙的影响 1／R组、ISO组和 DPCPX＋ISO组的动物均采用插线法制作 MCAO模型。Iso和 DPCPX＋ISo组，缺血前 lh给予 1．5％ISo预处理 60min，DPCPX＋ISo组动物在 Iso处理前给予 DPCPX。缺血 120min再灌注 Zh后取脑并切片，利用激光共聚焦扫描显微镜和 FlllO—3荧光探针标记技术检测活体脑片细胞内C4”含量的变化。 4、单次电针预处理诱导脑缺血耐受的时程 取大鼠百会穴，电针刺激30min后分别在 1／2、l、2、3和 24h给予短暂性局灶性脑缺血。并在阻断血流120min后给予再灌注。观察再灌注24h －3－ 第四军医人学硕士学位论文后神经功能损害程度，并利用TTC染色技术测量脑梗死容积。 5、腺苦AI受体参与单次电针预处理诱导的脑急性缺血耐受 电针刺激方法同前实验，并在电针预处理之后Zh行MCAO模型（ 20min），再灌注 24h后观察神经功能损害评分及脑梗死容积。同时观察了在电针预处理之前给予腺昔 AI受体阻断剂 DPCPX（ling·kg－‘，lp）对电针预处理诱导脑缺血耐受作用的影响。 结果： 1、再灌注24h时神经功能损害评分及脑梗死容积，Is。组均明显小于其余 3组（P＜0．05），而 Lidocaine＋Iso组及Lidocaine组的神经功能学评分及脑梗死容积与Cofltrol组均无明显差异（P＞0刀引。 2、Iso组动物神经功能损害较 Control组明显减轻（P＜0。of），脑梗死容积亦明显小于Control组（P＜0．001）。＊P＊P＊0so组动物神经行为学损害加重，脑梗死容积亦明显大于卜。组（P＜0刀1），与Conh＊组相比则无差异。DPCPX单独应用不增加缺血后神经功能损害及脑梗死容积。 3、脑W时缺血侧皮层及纹状体区域细胞内o”含量增加，非缺血侧无明显变化。缺血前给予IS。预处理可明显降低MCAO引起的皮层细胞内C／”含量增加o＜0．05人 DPCPX可阻断kO的上述作用，致 I／R后神经细胞内CaZ”含量与I／R组无差异。 4、电针刺激百会穴 30min后 Zh和 24h给予局灶性脑缺血，再灌注 24h时神经功能损害与对照组比较有明显减轻0功．05），脑梗死容积亦明显小于对照组（＜O．05），其它时间点与对照组相比均无显着差异。 5、电针预处理后可明显减轻缺血120min再灌注24h所致神经功能损害，减小脑梗死容积，电针预处理前应用DPCPX的动物神经功能损害评分和脑梗死容积均与对照组无差异。 －4－ 第四旱医人学硕士学位论文结论：1、重复吸入IS。可诱导产生延迟相脑保护作用，预处理前给予利多卡 因可减弱此保护作用；2
熊利泽[2]2006年在《脑和脊髓保护新措施的实验研究》文中认为外科手术病人在围手术期间可能发生中枢神经系统(脑和脊髓)的损害。损害的种类包括缺血性损害和麻醉药的毒性。前者可由脑外科手术如颅内动静脉畸形手术、颈总动脉内膜剥脱术和胸腹主动脉瘤手术等引起，后者可由局麻药引起。怎样预防和治疗围术期脑和脊髓损伤一直是医学研究的重点之一。缺血预处理可诱导脑和脊髓保护，这一现象的发现为防治缺血性神经系统损伤提供了新的切入点。但缺血预处理在临床应用中具有一定的不可操作性，因此，对非缺血预处理方法如吸入性麻醉剂、高压氧等进行了许多研究。我们以前的研究也探讨了高压氧、异氟醚和电针等预处理对脑和脊髓的保护作用，观察到这些预处理方法可模拟缺血预处理的效果，同时还对其初步的机制进行了研究。但这些研究远未解决围手术期脑和脊髓的保护问题，而对局麻药的神经毒性除尽量减少使用剂量外，目前缺乏更有效的预防手段。因此，从新的角度寻找有效的脑和脊髓的保护措施具有重要的临床意义。 本研究对可能应用于围术期的几种神经保护措施进行了观察：采用大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)模型和兔脊髓缺血模型，比较了电针刺激不同穴位预处理对脑缺血的保护效应，并观察了STAT3在电针刺激诱导脑缺血耐受形成过程中的作用；观察了远程预处理、缺血后处理和新一代羟乙基淀粉(130／0.4，万汶)急性等容血液稀释(ANH)的神经保护作用；并通过在体和离体实验模型，观察了中药制剂参附注射液减轻局麻药神经毒性的作用。
杜鹃[3]2009年在《电针预处理通过CB1受体调节ERK1/2通路诱导大鼠脑缺血耐受》文中研究说明防治脑缺血/再灌注损伤,寻找有效的治疗药物及措施,促进脑卒中后中枢神经系统功能恢复,一直是生命科学研究的重点和热点。研究发现,缺血前给予一定的预处理措施,能有效减轻缺血后的损伤,即缺血耐受(Ischemic tolerance,IT)。近年来,已发现众多不同的措施均能诱导产生缺血耐受效应。我们的研究已经证实电针预处理可以诱导大鼠产生脑缺血耐受。新近的研究发现电针预处理可以增加大鼠脑内源性大麻素2-AG和AEA的含量,并上调大麻素CB1受体,且CB1受体拮抗剂能够逆转电针预处理诱导脑缺血耐受。然而CB1受体是通过何种途径介导电针预处理诱导脑缺血耐受效应?越来越多的研究证明,CB1受体激活所介导的效应,如神经保护作用和抗焦虑作用均有ERK1/2通路的参与。已有大量研究证实,ERK1/2通路参与了许多预处理诱导的脑缺血耐受。那么CB1受体介导电针预处理诱导脑缺血耐受效应是否亦有ERK1/2通路的参与呢?本实验拟观察ERK1/2通路是否参与重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受,以及重复电针预处理是否通过CB1受体调节ERK1/2磷酸化水平诱导脑缺血耐受。第一部分:ERK1/2通路激活参与电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受实验一电针预处理对大鼠脑内ERK1/2磷酸化水平的影响目的:探讨电针预处理对大鼠脑内ERK1/2磷酸化水平的影响。方法:将20只雄性SD大鼠随机分为2组:假手术组(Sham组)和电针组(EA组)。Sham组:行戊巴比妥钠(40 mg/kg,i.p.)麻醉;EA组:腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后取“百会”穴,选用疏密波、频率2/15 Hz、电流强度1 mA,持续电刺激30 min,以上处理每天1次,重复5天。分别在最后一次预处理后2h和24h ,取大鼠右侧大脑行Western blotting检测ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)水平。结果:最后一次预处理后2h,EA组p-ERK1/2蛋白表达水平与Sham组相比明显增高(P <0.05);而最后一次预处理后24h,EA组p-ERK1/2蛋白表达水平与Sham组相比无统计学差异。结论:重复电针预处理可以增高大鼠脑内早期p-ERK1/2的表达水平。实验二电针预处理对大鼠脑缺血再灌注后p-ERK1/2水平的影响目的:研究重复电针预处理对大鼠脑缺血再灌注后p-ERK1/2水平的影响。方法:将25只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、对照组(CON组)和电针+缺血组(EA+MCAO组)。Sham组和CON组:行戊巴比妥钠(40 mg/kg,i.p.)麻醉;EA+MCAO组:腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后取“百会”穴,选用疏密波、频率2/15 Hz、电流强度1 mA,持续电刺激30 min,以上处理每天1次,重复5天。CON组和EA+MCAO组大鼠在最后一次预处理后24h,行短暂大脑中动脉阻塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型(缺血2h),再灌注2h和24h分别取右侧大脑行Western blotting检测ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)水平。Sham组大鼠栓线不插入大脑中动脉,其余操作同CON组。结果: CON组再灌注2h和24h p-ERK1/2蛋白表达水平较Sham组明显增高(p <0.05);EA+MCAO组再灌注2h和24h p-ERK1/2蛋白表达水平较CON组明显增高(p<0.05)。结论:缺血再灌注后脑内p-ERK1/2表达水平明显增高,重复电针预处理可以进一步增高缺血再灌注后大鼠脑内p-ERK1/2的表达水平。实验叁MEK1/2抑制剂对电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受的影响目的:探讨MEK1/2抑制剂U0126对重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受的影响。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为6组:假手术组(Sham组)、对照组(CON组)、电针+缺血组(EA+MCAO组)、U0126组、U0126+电针组(U0126+EA组)和DMSO+电针组(DMSO+EA组)。Sham组、CON组和EA+MCAO组的处理同实验二。U0126组腹腔注射MEK1/2抑制剂U0126 0.5mg/kg;U0126+EA组和DMSO+EA组电针预处理前30min分别腹腔注射U0126 0.5mg/kg或20% DMSO 0.6ml/kg。以上处理每天1次,重复5天。除sham组,其余大鼠均在最后一次预处理后24h,行短暂大脑中动脉阻塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型(缺血2h),再灌注24h后,行神经功能学评分(NFS)和脑梗死容积百分比测量。结果:(1)神经功能学评分(NFS):EA+MCAO组NFS明显优于CON组(p<0.01);U0126+EA组与EA+MCAO组相比明显下降(p<0.01);而U0126组与CON组相比无统计学差异。(2)脑梗死容积百分比:EA+MCAO组脑梗死容积百分比明显小于CON组(p<0.01); U0126+EA组脑梗死容积百分比与EA+MCAO组相比明显增加(p<0.01);而U0126组脑梗死容积百分比与CON组相比无统计学差异。结论:MEK1/2抑制剂可以逆转重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受,表明ERK1/2磷酸化参与重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受。第二部分电针预处理通过大麻素CB1受体激活ERK1/2诱导大鼠脑缺血耐受实验一CB1受体拮抗剂AM251对电针预处理后p-ERK1/2的影响目的:探讨CB1受体拮抗剂AM251对重复电针预处理后p-ERK1/2的影响。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、电针组(EA组)、AM251组和AM251+EA组。Sham组和EA组的处理同第一部分实验。AM251组:腹腔注射AM251 1mg/kg并麻醉;AM251+EA组:电针预处理前30min腹腔注射AM251 1mg/kg。分别在最后一次预处理后2h和24h取大鼠右侧大脑行Western blotting检测ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)水平。结果:在最后一次预处理后2h,EA组p-ERK1/2蛋白表达水平与Sham组相比明显增高(P<0.05);AM251+EA组与EA组相比,p-ERK1/2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);而AM251组与Sham组相比无统计学差异。结论:CB1受体拮抗剂AM251可以逆转重复电针预处理引起的大鼠脑内p-ERK1/2表达增强,表明重复电针预处理通过CB1受体激活ERK1/2通路。实验二AM251对脑缺血再灌注后p-ERK1/2水平的影响目的:CB1受体拮抗剂AM251对脑缺血再灌注后p-ERK1/2水平的影响。方法:研究雄性SD大鼠45只,随机分为5组:假手术组(Sham组)、对照组(CON组)、电针+缺血组(EA+MCAO组)、AM251组和AM251+EA组。各组处理同第二部分实验一。各组大鼠在最后一次预处理后24h,行MCAO致局灶性脑缺血(2h)模型,再灌注2h和24h分别取大鼠右侧大脑行Western blotting检测ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)水平。结果:缺血再灌注后2h和24h,EA+MCAO组p-ERK1/2蛋白表达水平与CON组相比明显增高(P<0.05);AM251+EA组与EA+MCAO组相比p-ERK1/2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);而AM251组p-ERK1/2蛋白表达水平与CON组相比无统计学差异。结论:CB1受体拮抗剂AM251可以逆转重复电针预处理引起的大鼠脑缺血再灌注后p-ERK1/2表达增强,说明重复电针预处理通过CB1受体激活ERK1/2通路诱导脑缺血耐受。小结1.重复电针预处理可增强早期大鼠脑内p-ERK1/2表达,而CB1受体拮抗剂AM251可以逆转重复电针预处理引起的大鼠脑内p-ERK1/2的表达水平增高,表明重复电针预处理通过CB1受体激活ERK1/2通路。2. MEK1/2抑制剂U0126可以逆转重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受,表明ERK1/2磷酸化参与重复电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受。3.缺血再灌注后脑内p-ERK1/2表达增强,重复电针预处理可以进一步上调p-ERK1/2的表达水平;而电针预处理的p-ERK1/2表达增强可被CB1受体拮抗剂AM251逆转,表明重复电针预处理通过CB1受体调节ERK1/2通路诱导大鼠脑缺血耐受。
张民, 刘剑波, 张宏亮, 王伯云, 王强[4]2003年在《单次电针预处理诱导大鼠局灶性脑缺血耐受的时程》文中研究说明目的 探讨单次电针预处理能否诱导局灶性脑缺血耐受及其时程。方法 48只健康雄性SD大鼠(280～320g),随机分为6组(n=8):对照组和电针1～5组(EA1～5)。对照组未行任何预处理;电针1～5组分别在电针刺激百会穴30min后0.5、1、2、3和24 h给予局灶性脑缺血。采用颈内动脉尼龙线线栓法致大脑中动脉栓塞(120 min)模型,观察再灌注后24 h时神经功能损害并取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积。结果术后动物均存活。电针刺激百会穴30 min后2 h和24 h给予局灶性脑缺血,再灌注24 h时神经功能缺陷评分明显低于对照组(P<0.05),脑梗死容积明显小于对照组(P<0.01),其它时间点与对照组差异无显着性。结论 单次电针刺激百会穴30 min,可诱导双相大脑局灶性缺血耐受,即急性缺血耐受出现在预处理后2 h,延迟缺血耐受出现在预处理后24 h。
路志红[5]2002年在《中医疗法对脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究》文中研究说明目前我国脑血管意外的发病率居高不下，现已成为叁大死亡原因之一。脑血管意外带来的后遗症给患者及其家庭带来了痛苦，增加了社会负担。对脑缺血/再灌注损伤的研究是医学研究的一大重点。自1990年Kitagawa等首次发现脑缺血耐受现象以来，对可诱导脑缺血耐受的预处理措施的研究成为当前的研究热点。但目前所研究的各种化学物质或措施在临床应用上均存在不同程度的局限性。刺五加(Acanthopanax senticosus，AS)被《神农本草经》列为上品，刺五加注射液为其精制水溶液，其活性成分刺五加甙具较强活血化瘀作用；电针(E1ectroacupuncture)技术是传统针灸在现代电子技术基础上的发展，二者均在脑血管疾病治疗中获广泛应用，取得较好临床效果。本研究探讨了刺五加注射液及电针刺激特定穴位预处理对脑缺血/再灌注损伤的保护作用，为寻找临床适用的脑保护及预处理措施探索新路径。 目的 1、研究刺五加注射液对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及量效关 第四军医大学硕士学位论文 系。 2．研究电针刺激穴位行预处理对脑缺血／再灌注损伤的保护作用 及部分机制。 方法 1．刺五加注射液对大鼠脑缺血l再灌注损伤的保护作用及量效 关系研究 40只雄性 SD大鼠，随机分为四组（各组 n。10），即对照组和 不同剂量处理组：AS－2．5。AS－5、AS－7．5组，分别在缺血前腹腔注 射生理盐水7．sml和刺五加注射液2．sml、sml（均用生理盐水稀释 至7．sml）、7．sml。采用颈内动脉尼龙线线栓法致右侧大脑中动脉 栓塞＊）模型，观察再灌注后24h时神经功能损害并取大脑行 TTC染色以测量脑梗死容积。 二．电针刺激百会穴对大鼠脑缺血l再灌注损伤的保护作用研究 30只雄性SD大鼠，随机分为叁组（各组n—10），即空白对照 组、异氟醚对照组和电针组，空白对照组末行任何预处理；异氟醚 对照组吸入1．5％异氟醚，30min／d，连续sd；电针组吸入1．5％异 氟醚，同时予电针刺激百会穴，30min／d，连续sd。采用颈内动脉 尼龙线线栓法致右侧大脑中动脉栓塞（120mi）模型，观察再灌注后 24h时神经功能损害并取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积。 3．电针刺激诱导脑缺血耐受的穴位特异性研究 40只雄性 SD大鼠，随机分为四组（各组 n＝10），即空白对照 组、戊巴比妥对照组、针刺肢体组和针刺百会穴组。空白对照组未 ．2－ 第四军医大学硕士学位论文 行任何预处理：戊巴比妥对照组腹腔注射戊巴比妥，40m旮蛇，连 续sd；针刺肢体和针刺百会组在戊巴比妥麻醉下分别予电针刺激百 会穴和左前肢，30min／d，连续sd。最后一次处理24h后采用颈内 动脉尼龙线线栓法致右侧大脑中动脉栓塞＊）模型，观察再灌 注后24h时神经功能损害并取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积。 4．电计刺激百会穴对脑缺血后HSP70表达的影响 20只雄性 SD大鼠，随机分为两组（各组 n—10），即空白对照 组和电针组，对照组未行任何预处理；电针组予电针刺激百会穴， 30min／d，连续sd。采用颈内动脉尼龙线线栓法致右侧大脑中动脉 栓塞口）模型，观察再灌注后24h时脑HSP70表达及病理学改 变。 结果 1．刺五加注射液对脑缺血l再灌注损伤的保护作用及量效关系 24h时神经功能损害评分对照组明显高于AS－2．5组、AS－5．0组 及AS刁．5组炉均＜0．05X各处理组间神经功能损害评分无差异（尸 均＞0刀引。再灌注24h时脑梗死容积，各处理组均明显小于对照组 （均叩．05〕 而各处理组间无显着差异（P均川刀5人 2．电针刺激百会穴对脑缺血l再灌注损伤的保护作用 再灌注24h时神经功能损害评分及脑梗死容积，电针组均明显 低于对照组，P＜0刀5。 3．电针刺激诱导脑缺血耐受的穴位特异性 再灌注24h时神经功能损害评分及脑梗死容积，针刺百会穴组 －3－ 第0军医大学硕士学位论文 均明显小于其余叁组，尸均＜0刀5。针刺肢体组与两对照组无明显 差异。 4．电针刺激百会穴行
高杨[6]2014年在《Peroxiredoxin6参与电针预处理脑保护作用及其机制研究》文中认为背景缺血性脑卒中严重威胁人类健康，是全球第2大死因，平均每4min就有一人死于中风。其存活者致残率高达90％，造成了巨大的社会和家庭负担。由于病因复杂多变，目前仍缺乏切实有效的干预和治疗措施。氧化应激是参与缺血性脑卒中的病理生理变化的重要机制之一。脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)后，大量的自由基及氧衍生自由基的产生伴随着抗氧化剂的大量消耗。氧化应激能够损伤细胞DNA、蛋白质和细胞膜，导致细胞损伤与死亡。因此，激活抗氧化系统对抗氧化应激损伤是减轻缺血再灌注损伤的重要途径。我们研究发现电针预处理（Electroacupuncture Pretreatment）能够诱导脑缺血耐受，减轻脑缺血再灌注损害。新近研究证实电针预处理能够激活神经细胞内的抗氧化系统，上调硫氧还蛋白（Thioredoxin，Trx）和谷胱甘肽（Glutathione，GSH）等物质的表达，减少丙二醛等氧化产物的生成，表明电针预处理的脑保护作用机制与激活抗氧化系统，减轻氧化应激损伤密切相关。我们的研究结果证实，电针预处理可能通过内源性大麻素系统产生脑保护作用，但其调节的下游分子机制有待阐明。研究已证实内源性大麻素系统在中枢神经系统疾病被广泛研究，已被证明是调制众多病理过程，氧化应激就是其中之一。有研究提示内源性大麻素配体2-花生四烯酸甘油（2-arachidonylglycerol,2-AG）可以修改H2O2和ROS刺激引起的胞内Ca2+动员和细胞骨架重排，并可以减少Ca2+诱导的线粒体细胞色素C释放，刺激呼吸链功能，表明内源性大麻素系统可以改善H2O2和ROS造成的氧化应激损伤。2-AG主要作用于内源性大麻素CB1受体，激活下游通路发挥作用。Peroxiredoxin6(Prdx6)属于抗氧化蛋白超家族Peroxiredoxins（Prdxs），主要分布于细胞质中，是一种新型的抗氧化剂。Prdx6是Prdxs家族唯一使用谷胱甘肽和抗坏血酸作为电子供体的成员，具有除去H2O2和磷脂过氧化氢的能力，并且能够减少磷脂氢过氧化物在质膜的积累。研究表明Prdx6在心脏和肝脏组织的缺血再灌注损伤中具有不可替代的作用，然而Prdx6在脑缺血再灌注损伤中的具体作用尚待阐明。因此本研究为了观察Prdx6的表达在脑缺血再灌注损伤过程中的具体机制，采用大脑中动脉闭塞模型（Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO）进行实验，并探讨Prdx6在电针预处理发挥脑缺血耐受效应中的机制。实验一电针预处理对脑缺血再灌注后Prdx6表达的影响目的：探讨脑缺血再灌注后Prdx6在缺血半暗带的表达变化，进一步研究经电针预处理脑缺血再灌注后Prdx6的表达变化。方法：SPF级雄性SD大鼠，体重280-320g，采用随机数字法分组。①脑缺血再灌注后Prdx6在缺血半暗带的表达变化雄性大鼠22只，分为假手术（sham）组（n=2）和脑缺血再灌注组（n=20）。其中脑缺血再灌注组的20只大鼠再次随机分为五组，即建立MCAO动物模型后，阻断血流时间为2h，于再灌注后的2h，6h，12h，24h和48h分别取脑（n=4），用Western blot方法检测梗死同侧半暗带脑组织中Prdx6表达量的变化。②电针预处理对脑缺血再灌注后Prdx6的表达影响雄性大鼠20只，随机分为假手术（sham）组（n=2）、局灶性脑缺血再灌注（MCAO）组、单纯电针（EA）组和电针预处理（EA+MCAO）组(n=6)。单纯电针组只进行电针刺激不制作模型。电针预处理组建立模型前2h给予电针刺激百会穴，30min，频率15/2Hz、强度1-2mA。每组3只进行western blotting检测，另3只行免疫荧光染色。结果：①Western blot结果显示脑组织缺血再灌注后24h Prdx6蛋白在脑组织缺血半暗带表达水平明显升高(P<0.05)；②Western blot结果显示再灌后Prdx6蛋白在EA+MCAO组相对于MCAO组明显升高(P<0.05)，免疫荧光双标染色结果显示Prdx6蛋白在缺血半暗带的星形胶质细胞有表达，且再灌注后24h Prdx6蛋白显着升高。结论：Prdx6蛋白在脑组织缺血再灌注后24h半暗带表达水平显着升高，并且给予电针预处理后Prdx6的表达进一步升高。实验二Prdx6参与电针预处理脑保护作用的研究目的：探讨电针预处理产生的神经保护作用能否通过下调Prdx6表达而逆转。方法：①侧脑室注射Prdx6-siRNA并进行效能验证雄性SD大鼠8只，随机分为正常对照组（sham）组（n=2），小RNA干扰（siRNA）组和乱序RNA（scrambled control RNA，scr RNA）组（n=3），其中siRNA组的大鼠均进行侧脑室注射Prdx6-siRNA，而scr RNA组则注射公司提供的scr RNA，注射72h后应用Western blotting方法检测梗死同侧相应半暗带脑组织中Prdx6的表达变化。②下调Prdx6表达后大鼠神经功能和形态变化雄性SD大鼠38只，随机分为假手术（sham）组（n=4）、局灶性脑缺血再灌注（MCAO）组、电针预处理（EA+MCAO）组、Prdx6的siRNA干扰（siRNA）组和对照乱序RNA（scr RNA）组(n=8)。siRNA组和scr RNA组在制作模型前3天行侧脑室注射，MCAO模型前2h电针预处理30min。每组大鼠缺血恢复灌注后24h按照盲法原则进行神经行为学评分。每组4只动物进行TTC染色，另4只快速取脑石蜡包埋行TUNEL染色。结果：①Western blotting效能验证:采用侧脑室注射，Prdx6-siRNA能够显着降低Prdx6的表达50%以上（P<0.05）。②神经行为学评分:与Sham组相比，其他各组评分均下降。电针预处理后MCAO模型再灌24h（EA+MCAO组）的神经行为学评分明显高于MCAO组。而侧脑室注射Prdx6-siRNA后，相较于EA+MCAO组，神经行为学评分明显降低，逆转了电针预处理产生的缺血耐受作用（P<0.05），siRNA组与MCAO组则没有明显统计学差异。③TTC染色和梗死容积：与MCAO组比较，EA+MCAO组大鼠再灌注24h的脑梗死容积百分比明显缩小（P<0.01vs.MCAO组）。Prdx6-siRNA组的脑梗死容积百分比则显着高于Sham组和EA+MCAO组（P<0.05vs. EA+MCAO组），同时scr RNA组与EA+MCAO组则没有明显的统计学差异，但是与MCAO组相比都有统计学意义（P<0.05）。④TUNEL染色：细胞计数结果显示，EA+MCAO组中的TUNEL阳性细胞(53.75±12.34)数量较MCAO组(76.75±14.64, P<0.01)明显减少，而siRNA组中的TUNEL阳性细胞(86.25±5.68)数量较EA+MCAO组(P<0.01)增高。siRNA组相对于MCAO组，scr RNA组相对于EA+MCAO组都没有明显统计学差异。结论：下调Prdx6表达可以显着逆转电针预处理产生的脑保护作用。实验叁Prdx6参与电针预处理抗氧化作用的研究目的：探讨电针预处理是否通过调控Prdx6能够发挥抗氧化作用。方法：雄性SD大鼠60只，随机分为假手术（sham）组、短暂局灶脑缺血再灌注（MCAO）组、电针预处理（EA+MCAO）组、Prdx6的siRNA干扰（siRNA）组和对照乱序RNA（scr RNA）组(n=12)。其中每组大鼠6只在MCAO模型恢复灌注后24h深麻醉取材提取组织蛋白用ROS，MDA和Nitrotyrosine ELISA试剂盒检测，其余大鼠取材后提取组织DNA用8-OH-dG试剂盒检测，按照试剂盒说明逐一操作。结果：Prdx6-siRNA增加了ROS的产生,升高了MDA,8-OH-dG和NT的水平,从而逆转了电针预处理的保护作用。(P <0.05vs. EA+MCAO组，n=6)。结论：电针预处理通过上调Prdx6从而发挥抗氧化作用。实验四电针预处理通过大麻素CB1R调节Prdx6的研究目的：探讨Prdx6是否通过激活CB1受体依赖途径发挥电针预处理的神经保护作用。方法：SPF级雄性SD大鼠15只，随机分为5组，CB1受体拮抗剂AM251组、SR141716组和CB1激动剂W55212-2组，ACEA组，和溶剂组（n=3）。Sham组、MCAO组、EA组和EA+MCAO组仍采用前面实验的蛋白样品。用CB1受体拮抗剂AM251和SR141716与激动剂W55212-2和ACEA，按照剂量AM251（1mg/kg）、SR141716（1mg/kg）、ACEA（2.5mg/kg）、WIN-55212-2（1.5mg/kg）和溶剂（DMSO,0.6ml/kg）在MCAO模型前半小时腹腔注射给药。再灌注后24h即刻深麻醉大鼠取脑组织缺血半暗带行Western Blotting检测。结果：Western blotting检测结果显示，与MCAO组相比， EA+MCAO组Prdx6蛋白表达水平增高。而与EA+MCAO组相比, AM251组或SR141716组Prdx6表达水平相对较低,溶剂组和EA+MCAO组之间没有区别（P<0.05vs. EA+MCAO组）。与MCAO组相比WIN55212-2和ACEA升高了Prdx6的蛋白表达，而溶剂组与MCAO组之间没有统计学差异（P<0.05vs. MCAO）。结论：电针预处理能够通过CB1R依赖途径调节Prdx6发挥神经保护作用。小结以上结果表明：Prdx6蛋白在脑组织缺血再灌注后24h半暗带表达水平显着升高，给予电针预处理可以进一步升高Prdx6的表达；电针预处理可以减少脑缺血再灌注后梗死容积，改善神经行为学功能评分并发挥抗氧化作用，然而下调Prdx6表达可以显着逆转电针预处理产生的一系列保护效应，表明Prdx6参与了电针预处理所产生的脑保护作用；进一步研究证实，给予CB1受体拮抗剂可以部分下调EA后Prdx6的表达，而给予CB1受体激动剂则可以模拟电针预处理的作用，说明电针预处理通过内源性大麻素系统CB1受体调节Prdx6产生脑保护作用。综上所述，电针预处理通过上调Prdx6从而发挥脑保护效应，这为EA预处理的抗氧化作用提供了新的机制。
杨静[7]2004年在《电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受效应及其机制研究》文中研究指明自1990年Kitagawa等首次发现脑缺血预处理现象以来，人们在探讨其机制和寻找具有临床可行性的预处理方法等方面进行了大量研究。本实验室首次发现重复电针灸(频率为2／15Hz的疏密波，1mA，30min／d，连续5天)刺激大鼠百会穴可模拟脑缺血预处理效应。电针刺激参数是影响针效和改变针效机制的重要因素，电针的不同刺激参数所引起的反应及其反应机制可能有所不同。因此，本实验对各种电针刺激参数进行全方位组合，研究不同刺激参数对脑缺血耐受效应的影响，寻找电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受效应的最佳刺激参数组合；在此基础上进一步研究阿片受体和内源性阿片肽在重复电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受机制中可能发挥的作用，为深入探讨电针灸预处理诱导脑缺血耐受机制提供科学依据。第四军医大学祠贞创匕学位论文 脑缺血耐受效应的影响，寻求最佳的刺激参数组合。2.探讨阿片受体是否参与重复电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐 受的形成，并研究可能参与作用的阿片肤种类。3.研究重复电针灸刺激大鼠百会穴能否刺激内源性阿片肤释放 增加，为证实内源性阿片肤参与重复电针灸预处理诱导的脑缺 血耐受效应提供实验依据。方法1.应用嵌套设计研究不同刺激参数及其组合对电针灸诱导大鼠 脑缺血耐受效应的影响 应用嵌套设计，将210只SD大鼠随机分为35组(每组=6只)，分别为空白对照组、戊巴比妥钠组、电针组:a连续波:lmA+ZHz，lmA+15Hz，lmA+3OHz，lmA+100Hz，ZmA+ZHz，ZmA+15Hz，ZmA+30Hz，ZmA+100Hz，3mA+ZHz，3n1A+15Hz，3mA+30Hz，3mA+100Hz:b间断波:lmA+2/OHz，lmA+15/OHz，lmA+30/OHz，lmA+100/OHz，ZmA+2/OHz，ZmA+15/OHz，ZmA+30/OHz，ZmA+1 00/OHz，3mA+2/OHz，3n1A+15/OHz，3mA+30/OHz3mA+100/OHz;e疏密波:lmA+2/15Hz，lmA+2/30Hz，lmA+2/100Hz，ZmA+2/15Hz，ZmA+2/30Hz，ZmA+2/100Hz，3mA+2/15Hz，3mA+2/30Hz，3mA+2/100Hz。最后一次处理24h后采用颈内动脉尼龙线线栓法致右大脑中动脉栓塞(MCAO) (12Omin)模型。再灌注24h行神经功能障碍评分(NDS)后取脑，经TTC染色计算脑梗死容积。第四军医大学周五d二学位.沦文2.阿片受体在重复电针灸刺激大鼠百会穴诱导脑缺血耐受效应中 的作用 雄性SD大鼠42只，随机分为空白对照组，戊巴比妥钠组，电针(EA)组，电针+6受体拮抗剂naltrindole(NTI)组，电针十K受体拮抗剂nor-binalto甲himine(nor-BNI)组，6受体拮抗剂naltrindole(NTI)组和K受体拮抗剂nor一binalto印himine(nor-BNI)组。空白对照组每日腹腔注射生理盐水4mL瓜g/d，连续5天;其余各组每日腹腔注射1%戊巴比妥钠40m叭留d，连续5天;戊巴比妥钠组不做其它处理，EA组、EA+NTI组和EA十nor一NBI组接受相同电针灸刺激(疏密波2八SHz，lmA，3omi可d)连续5天，EA+NTI组和EA+nor-BNI组分别于每次电针灸开始前给予NTI(1 mg瓜g)或nor一BNI(2 .smg瓜g)腹腔注射;NTI组和nor一BNI组单纯腹腔注射相同剂量的NTI或nor一BNI。最后一次处理24h后采用MCAO (12Omin)模型。再灌注24h进行神经学评分后取脑，经TTC染色计算脑梗死容积。3.重复电针灸预处理后大鼠脑内甲硫脑啡肤表达的免疫组织化 学研究 雄性SD大鼠12只，随机分为空白对照组，戊巴比妥钠组和电针灸预处理组。空白对照组每日腹腔注射生理盐水4mL瓜g/d，连续5天;其余两组每日腹腔注射1%戊巴比妥钠40m叭g/d，连续5天;戊巴比妥钠组不做其它处理，电针灸预处理组取大鼠百会穴进行电针灸刺激(疏密波2/15Hz，lmA，30mi可d)，连续5天。最后一次处理24h后灌注取脑，制作冰冻切片，利用甲硫脑啡肤的特异性抗体(R曲bit anti一RatE吐ephalin Met)按ABC法进行甲硫脑啡肤免疫组第四军医大学五灭士学位论文织化学的观察。并对不同脑片纹状体区的脑啡肚免疫阳性细胞进行肉眼记数。结果1.应用嵌套设计研究不同刺激参数及其相互组合对电针灸诱导 大鼠脑缺血耐受效应的影响 脑梗死容积:叁种电流强度(l mA、ZmA和3mA)间无统计学差异(P=0.3657)。叁种波形I旬有明显差异(P=0.004)。ZHz--100Hz各频率间有显着差异(P<0.0001)。33个电针组分别与空白组梗死容积比较，除连续波In1A+30Hz，ZmA+30Hz，lmA+100Hz，ZmA+1 00Hz，3mA+100Hz及间断波lmA+100/0 Hz，ZmA+100/0Hz，3mA+100/0 Hz无统计学差异外，其余均有统计学差异(P<0.05)。其中，疏密波2/15Hz，2/30Hz以及连续波ZHz刺激时脑梗死灶最小。 神经功能学评分:再灌注24小时后，各组神经学评分之间有统计学差异(P值<0.05)。电针组的神经功能评分都优于戊巴比妥钠对照组和空白对照组。2.阿片受体在重复电针灸刺激大鼠百会穴诱导脑缺血耐受效应 中的作用 脑梗死容积:再灌注24h后各组之间有显着差异(P=0.000)。电针灸组(84.5土20.3nun3)，明显小于空白对照组(286.5士28.8mm3)(P=0.000);电针灸+6受体拮抗剂naltrindole组(260.6士25.2 mm3)与空白组比较没有明显的统计学?
何二涛[8]2012年在《PI3K/Akt信号通路在电针预处理诱导脑缺血耐受中的作用研究》文中指出我国人口老龄化日益严重！最新数据显示，2050年80岁以上人口将几乎是现在的四倍，达到3.95亿人。缺血性脑卒中，是危害中老年人健康的“头号杀手”，然而，目前临床上仍然缺乏预防和治疗脑卒中的有效手段，因此预防和减轻脑缺血造成的神经损伤具有重大的临床和社会价值。文献报道，多种非缺血预处理可诱导“脑缺血耐受”，减轻缺血再灌注对神经细胞的损伤，减小脑梗死面积，改善神经功能。其中电针预处理因为安全方便、简单可靠，临床应用前景光明，但其作用机制仍未完全阐明。本实验小组前期研究表明，电针预处理可能通过上调Notch通路，进而激活脑内某些重要因子或者通路，调节神经细胞内凋亡与抗凋亡的平衡，促进细胞生存；PI3K/Akt信号通路是细胞内重要的抗凋亡通路，为心脑保护关键分子机制，介导包括电针在内多种预处理的神经保护作用；在神经干细胞和多种肿瘤细胞内发现，Notch通路的激活可促进PI3K/Akt激活，进而调节细胞的增殖、分化和存活。那么，重复电针预处理是否是通过Notch/PI3K/Akt途径诱导脑缺血耐受呢？第一部分电针预处理对缺血再灌注后大脑皮层中Notch和PI3K/Akt通路活性的影响1方法1.1电针预处理对Notch1-NICD，pAkt（Ser473）表达的影响雄性SD大鼠18只随机分为两组：缺血再灌注组（Con）和电针预处理组（EA）。EA组：重复电针刺激百会穴5天，最后一次电针24h后制备MCAO模型；Con组：重复戊巴比妥钠麻醉5天，不给予电针刺激，其余处理同EA组。两组分别于缺血前即刻、再灌后2h、再灌后24h随机取3只大鼠，Westernblot方法检测缺血半暗带[1]大脑皮层Notch1-NICD，pAkt（Ser473）的表达。1.2电针预处理后Notch1-NICD阳性细胞和pAkt（Ser473）的分布和细胞定位雄性SD大鼠18只，分组及处理方法同上。应用免疫荧光染色方法检测各组大鼠大脑皮层中Notch1-NICD和pAkt的组织定位和细胞定位。2结果2.1电针预处理对缺血再灌注后大脑皮层中Notch通路活性的影响NICD是Notch通路活化的标志之一。缺血再灌注(I/R)前，EA组与Con组Notch1-NICD含量比较无统计学差异；I/R后2h和24h，缺血侧皮层中Notch1-NICD持续升高，但EA组均明显高于Con组(P<0.05)。免疫荧光双标染色发现，再灌注后24h缺血侧皮层中，EA组Notch1-NICD阳性细胞明显多于Con组，EA组Notch1-NICD与NeuN双标的阳性细胞数也明显多于Con组。2.2电针预处理对缺血再灌注后大脑皮层中PI3K/Akt通路活性的影响EA组I/R前，Akt磷酸化水平明显较对照组增强（P＜0.05）；I/R2h时，Akt磷酸化水平达高峰，且明显高于相同时间点Con组（P＜0.05）；I/R24h时，EA组与Con组间Akt磷酸化水平相仿，均较I/R2h明显降低，但仍明显高于I/R前水平。免疫荧光双标染色发现，再灌注后2h缺血侧皮层中，EA组pAkt阳性细胞明显多于Con组，EA组pAkt与NeuN双标的阳性细胞数也明显多于Con组。第二部分阻断PI3K/Akt通路激活对电针预处理诱导的脑缺血耐受效应的影响1方法1.1验证侧脑室注射方法成年SD大鼠两只，侧脑室立体定位[2]：Bregma点旁开0.9㎜，向后1.5㎜，深度3.8㎜，侧脑室注射亚甲兰染料，15分钟后断头取脑，观察大脑蓝色分布区域。1.2验证LY294002对PI3K/Akt通路的阻断作用雄性SD大鼠9只随机分为3组：Sham组，缺血再灌注组（Con）和PI3K/Akt抑制剂LY294002组（LY294002）。Sham组不做任何处理；Con组：同第一部分；LY294002组：侧脑室注射LY294002，终浓度10mM，共10μ l；1h后行MCAO模型制备。再灌注后2h，断头取脑。应用Western blot方法检测缺血半暗带皮层pAkt(Ser473)表达，观察PI3K/Akt是否被阻断。1.3PI3K/Akt通路抑制剂对电针预处理的脑保护作用的影响雄性SD大鼠40只，随机分为5组（n=8）：Sham组、Con组、EA组、LY294002组和Vehicle组。Sham组：不做任何处理；Con组：同第一部分；EA组：同第一部分。LY294002组和Vehicle组重复电针刺激百会穴5天，在MCAO模型前1h，经侧脑室注射LY294002或Vehicle，于MCAO后24h行神经行为学评分和脑梗死容积百分比检测。2结果2.1LY294002可有效阻断PI3K/Akt通路Western blot显示，LY294002组大鼠大脑皮层中Akt磷酸化水平明显低于Con组(P<0.05)，证实LY294002（浓度为10mM）有效阻断PI3K/Akt信号通路激活。2.2PI3K/Akt通路抑制剂对电针预处理的脑保护作用的影响再灌注后24h，EA组与Con组比较，神经行为学评分升高（P＜0.05），脑梗死容积百分比明显下降(P＜0.05)。侧脑室注射PI3K/Akt通路抑制剂LY294002组较EA组的神经行为学评分降低(P<0.05)，脑梗死容积百分比升高（P<0.05）；而Vehicle组神经行为学评分及脑梗死容积百分比与EA组均无统计学差异。第叁部分阻断Notch通路对PI3K/Akt通路在电针预处理中活性的影响1方法1.1验证DAPT对Notch通路的阻断效果成年雄性SD大鼠12只，随机分为4组：空白对照组（Sham组），电针预处理组（EA组），溶剂对照组（EVM组）和DAPT抑制剂组（EDM组）。Sham组不做任何处理；EA组处理同第一部分；EVM组：电针前3h或者行MCAO术前3h，均侧脑室注射与EDM组相同浓度、相同剂量的DMSO，其余处理同EA组；EDM组侧脑室注射DAPT，其余同EVM组。再灌注后24h，断头取脑。Western blot方法检测缺血半暗带皮层中Notch1-NICD的蛋白表达水平变化。1.2阻断Notch通路在电针预处理中的激活，观察PI3K/Akt通路的变化采用1.1中所提取蛋白，Western blot方法检测缺血半暗带皮层中pAkt（Ser473）的蛋白表达水平有无变化。2结果2.1DAPT可有效阻断Notch通路激活Western blot显示，EDM组皮层中Notch1-NICD含量明显低于其他组(P<0.05)，证实DAPT（浓度为50mM）有效阻断Notch信号通路激活。2.2Notch通路在电针预处理中被阻断后，Akt磷酸化水平部分下降Western blot显示，EDM组pAkt（Ser473）蛋白表达水平较EVM组和EA组明显下降(P<0.05)，但仍高于Sham组(P<0.05)。3结论3.1电针可激活大鼠皮层内的PI3K/Akt信号通路；缺血再灌注可激活大鼠皮层内的PI3K/Akt信号通路；电针预处理可上调PI3K/Akt信号通路缺血再灌注后的活化程度。3.2电针预处理可诱导脑缺血耐受；阻断PI3K/Akt信号通路，电针预处理的脑保护作用减弱；PI3K/Akt信号通路可能介导了电针预处理诱导的脑缺血耐受的产生。3.3在电针预处理诱导脑缺血耐受产生的过程中，Notch通路与PI3K/Akt具有较好的伴随关系；而阻断Notch通路，PI3K/Akt的激活受到明显抑制；在电针预处理过程中，PI3K/Akt可能为Notch的下游通路。Notch/PI3K/Akt通路可能是电针预处理诱导脑缺血耐受产生的主要途径之一。
苗晓茹[9]2006年在《瑞芬太尼预处理的脑保护作用及机制研究》文中认为自1990年Kitagawa等在沙土鼠的前脑缺血模型中发现脑缺血预处理现象以来，除研究缺血预处理机制外，人们一直尝试用非缺血预处理的方法，尤其是药物干预的方法来诱导脑缺血耐受，希望最终将其应用于临床。本实验室长期以来一直致力于脑保护的研究，一方面通过筛选具有脑保护的药物，另一方面通过研究非缺血性预处理诱导脑缺血耐受及其机制，希望找到临床切实可行的脑保护措施。瑞芬太尼是一种新型的超短效μ型阿片受体激动药，由于其独特的优点，在临床麻醉中已开始广泛应用。动物实验研究表明，瑞芬太尼预处理可模拟缺血预处理效果，诱导心肌缺血耐受的产生，其诱导的心肌保护作用不同于缺血预处理，它是通过心脏的κ、δ阿片受体及心脏外的μ阿片受体共同起作用。但瑞芬太尼预处理是否具有脑保护作用，尚未见文献报道。本实验将研究瑞芬太尼预处理的脑保护作用以及κ、δ和μ阿片受体在瑞芬太尼预处理诱导的脑缺血耐受中的作用。
曾甜[10]2009年在《不同预处理联合应用诱导大鼠脑缺血耐受效应的研究》文中认为脑中风是引起人类死亡的第叁大病因,也是导致患者长期功能障碍的首要疾病,目前临床缺乏有效的治疗措施。t-PA(人体组织型纤溶酶原激活物)和Edaravone(依达拉奉)被认为是目前中风治疗中较有效的两种药物,但由于治疗时间窗和副作用的限制,对于大多数患者并不适用。因此,寻找有效预防和治疗中风的药物及措施以减轻中风后中枢神经系统的损伤成为临床医学亟待解决的关键问题。预处理概念的提出是器官保护研究的一个重要里程碑。大量预处理方式(如吸入麻醉剂,高压氧,电针,远程缺血预处理等)在动物实验中均可诱导脑缺血耐受,减轻脑缺血再灌注损伤。对于临床可预知的脑缺血(如神经外科手术和心脏外科手术),我们应当如何选择合适的预处理方式?临床常用的吸入麻醉剂ISO和SEVO,它们诱导脑缺血耐受的效果孰优孰劣?目前所知的预处理方式能否安全应用于临床患者?何种预处理方式既可以减轻预处理本身可能带给机体的损伤,又不影响其发挥神经保护作用?本研究采用大鼠大脑中动脉阻闭(Middle CerebralArtery Occlusion,MCAO)模型,首先探讨ISO和SEVO预处理能否诱导大鼠快速脑缺血耐受,并比较两者预处理的保护效应有无差异;其次探讨不同预处理方法联合应用能否协同诱导大鼠脑缺血耐受,以减少某一预处理方法单纯应用时所需的剂量和时间,从而减轻预处理本身对机体造成的不良反应及副作用,为进一步将预处理合理安全地应用于临床患者提供实验依据。实验一异氟醚与七氟醚预处理诱导大鼠快速脑缺血耐受效应的对比目的:探讨1MAC的ISO和SEVO预处理是否能够诱导大鼠快速脑缺血耐受,并比较两者预处理的保护效应有无差异。方法:42只雄性SD大鼠随机分为3组(每组14只):对照组,ISO组,SEVO组。分别接受97%O2,1MAC的ISO(1.5%ISO+97%O2),1MAC的SEVO(2.4%SEVO+97%O2预处理1h。从各组中随机抽取4只大鼠在预处理前后监测平均动脉压(MAP)和血气。其余大鼠在预处理1h后行局灶性脑缺血,2h后恢复灌注至72h。分别在再灌注24,48,72h应用Garcia法进行神经行为学评分(NBS),72h评分后取脑染色计算脑梗死容积百分比。结果:ISO组和SEVO组的NBS在3个时间点都明显优于对照组(P<0.05),ISO组和SEVO组的脑梗死容积百分比分别为(31.88±3.66)%和(38.47±2.31)%,明显小于对照组[(48.55±2.18)%,P=0.001,P=0.032]。ISO组和SEVO组的NBS和梗死容积百分比均无统计学意义。结论:1MAC的ISO和SEVO预处理可以诱导大鼠快速脑缺血耐受,减轻局灶性脑缺血再灌注损伤,且两者的保护效应相似。实验二异氟醚与远程缺血预处理联合诱导脑缺血耐受效应的研究目的:探讨异氟醚(ISO)预处理与肢体远程缺血预处理(RIPC)联合是否能够诱导脑缺血耐受协同效应,以减少ISO的吸入和肢体RIPC的时间。方法:70只雄性SD大鼠随机分为7组(A-G,每组10只):A组:对照组(CON),动物接受2h的局灶性脑缺血再灌注72h;B组和C组:均为肢体RIPC组,分别接受1cycle和3cycles15min的单侧股动脉缺血预处理后即刻行MCAO 2h再灌注72h;D组和E组:均为ISO组,分别在MCAO前24h接受0.75%和1.5%的ISO预处理1h,处理方法同实验一;F组和G组:均为ISO预处理与RIPC的联合,F组为B组与D组的联合,G组为C组与E组的联合,均在RIPC后行MCAO。分别在再灌注24,48,72h应用Garcia法进行神经行为学评分(NBS),72h评分后取脑染色计算脑梗死容积百分比。结果:再灌注72h后,C组(3cyclesRIPC)和E组(1.5%ISO)的脑梗死容积百分比分别为35.61%±5%和37.04%±3%,明显小于对照组48.56%±2%(P=0.025,P=0.048)。B组(1cycleRIPC)和D组(0.75%ISO)的脑梗死容积百分比分别为49.83%±4%和40.49%±3%,与对照组无明显差异(P=0.819,P=0.154)。F组(0.75%ISO+1cycleRIPC)与G组(1.5%ISO+3cyclesRIPC)的脑梗死容积也明显小于对照组(34.54%±4%,P=0.015;36.97%±3%,P=0.039)。再灌注24h,48h,72h各组NBS结果同梗死容积百分比相一致。C组、E组、F组、G组在各时间点的评分都明显高于A组(P<0.05)。B组和D组的神经功能评分与A组无明显差异。结论:低剂量ISO预处理和单次肢体RIPC单独应用均不能诱导脑缺血耐受,但是联合应用时则可以诱导脑缺血耐受,减少脑梗死容积,改善神经功能,表明异氟醚与远程缺血预处理联合应用具有协同作用。实验叁不同预处理方式联合RIPC诱导神经保护效应的对比研究目的:研究高压氧(HBO),电针(EA)等预处理方式能否也像ISO与RIPC联合,发挥协同的神经保护作用,以及不同的联合方式的保护作用是否存在差异。方法:70只雄性SD大鼠随机分为7组(A-G,每组10只):A组:对照组(CON),动物接受MCAO2h后再灌注72h;B组:3cycles 15min RIPC后即刻行MCAO 2h再灌注72h;C组:ISO与RIPC联合组,动物于MCAO前24h接受0.75%ISO预处理1h,单次15min RIPC于MCAO前即刻给予;D:HBO与RIPC联合组,MCAO前24h行HBO预处理1h,单次15min RIPC于MCAO前即刻给予;E:单纯HBO预处理组,处理方法同D组。F组:EA与RIPC联合组,MCAO前24h行EA预处理0.5h,单次15minRIPC于MCAO前即刻给予;G组:单纯EA预处理组,处理方法同F组。分别在再灌注24,48,72h应用Garcia法进行神经行为学评分(NBS),72h评分后取脑染色计算脑梗死容积百分比。结果:再灌注72h后,B组(3cycles15min RIPC)和C组(0.75%ISO+15min RIPC)梗死容积百分比分别为22.13%±3%和22.75%±4%,明显小于A组(CON)50.72%±2%(P=0.001),此结果与第一部分结果一致。E组(HBO)与A组(CON)无明显差异。D组(HBO+15min RIPC),F组(EA+15min RIPC)和G组(EA)的脑梗死容积百分比分别为34.42%±3%,33.21%±3%和35.60%±4%,均明显小于A组(CON)(P=0.005,P=0.004,P=0.033)。F组和G组梗死容积百分比无明显差异。C组与B组比较无显着差异(P=0.679),D组、F组、G组分别与B组相比较均有显着差异(P=0.016,P=0.038, P=0.019)。再灌注24h,48h,72h各组NBS结果同梗死容积百分比相一致。B组、C组、D组、F组和G组在各时间点评分都明显高于A组。E组NBS与A组无明显差异。D组、F组、G组的48h、72h评分分别与B组相比较均有显着差异(P<0.05)。结论:单次HBO预处理不能诱导脑缺血耐受,但与单次RIPC联合可以减少脑梗死容积,改善神经功能。单次EA预处理即可以诱导延迟相的脑缺血耐受,与单次RIPC联合也可以减轻神经组织缺血再灌注损伤;但是联合的保护效应没有表现出明显的协同增强。结论1. 1MAC的ISO和SEVO预处理可诱导等效应的即时相脑缺血耐受。2.低剂量ISO、单次HBO及单次RIPC均不能诱导脑缺血耐受,但ISO、HBO预处理分别与RIPC联合则可以产生协同的预处理效应,保护脑组织。3.高剂量ISO与重复RIPC联合组并未表现出比低剂量联合组更强的保护作用,说明协同的预处理效应只在一定剂量范围内存在,具有封顶效应。4.在本实验“联合剂量”条件下ISO与RIPC联合的保护效应较好。
参考文献：
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[2]. 脑和脊髓保护新措施的实验研究[D]. 熊利泽. 第四军医大学. 2006
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[4]. 单次电针预处理诱导大鼠局灶性脑缺血耐受的时程[J]. 张民, 刘剑波, 张宏亮, 王伯云, 王强. 中华麻醉学杂志. 2003
[5]. 中医疗法对脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究[D]. 路志红. 第四军医大学. 2002
[6]. Peroxiredoxin6参与电针预处理脑保护作用及其机制研究[D]. 高杨. 第四军医大学. 2014
[7]. 电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受效应及其机制研究[D]. 杨静. 第四军医大学. 2004
[8]. PI3K/Akt信号通路在电针预处理诱导脑缺血耐受中的作用研究[D]. 何二涛. 第四军医大学. 2012
[9]. 瑞芬太尼预处理的脑保护作用及机制研究[D]. 苗晓茹. 第四军医大学. 2006
[10]. 不同预处理联合应用诱导大鼠脑缺血耐受效应的研究[D]. 曾甜. 第四军医大学. 2009