论文摘要
利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体。通过诱导时间、温度和浓度优化两种表达载体的蛋白表达条件,比较分析两种表达载体的LadR蛋白可溶性表达水平,利用Western-Blot进行LadR蛋白表达验证。本研究成功构建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表达载体,在大肠杆菌BL21中分别表达出His-LadR和GST-LadR融合蛋白。通过凝血酶切除GST标签,纯化后得到LadR蛋白。在最佳表达条件IPTG为0.5 mmol/L,22℃诱导过夜下,pGEX-4T-ladR表达载体中LadR的表达量比pET-28a-ladR（IPTG为1.0 mmol/L,22℃诱导过夜）中His-LadR蛋白的表达量高4.48倍。本研究结果表明,GST标签有利于ladR基因的可溶性表达,为后续的LadR蛋白的功能分析和转录调控机理研究奠定了良好基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 陈月桃,陈谋通,吴清平,张菊梅,程健恒,孙奇凡,王涓
关键词: 单增李斯特菌,蛋白,原核表达,蛋白纯化
来源: 现代食品科技 2019年10期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学
专业: 生物学
单位: 广东省微生物研究所广东省科学院华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室,华南农业大学食品学院
基金: 广东省基础与应用基础研究项目(2017A030313173),国家自然科学基金资助项目(31701718),广州市珠江科技新星专项资助项目(201710010018),广东省科学院创新驱动发展能力专项项目(2017GDASCX-0201)
分类号: Q78
DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.10.010
页码: 58-65
总页数: 8
文件大小: 2968K
下载量: 210
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