姜淼[1]2006年在《黄连人参对药改善2型糖尿病胰岛素抵抗机制研究》文中认为本课题基于中医药治疗2型糖尿病胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的临床实践经验,将《内经》“壮火食气”病机理论应用于2型糖尿病IR治疗实践和实验研究,提出治疗2型糖尿病IR存在火热伤正病机,可采用“热者寒之”的治疗原则,应用泻火补气治法进行治疗。选用临床有效的黄连人参药对作为治疗药物,观察其对2型糖尿病IR和继发的β细胞功能损害的影响。探讨2型糖尿病“壮火食气”病机和泻火解毒与补气扶正治法的治疗作用,为建立中医药治疗的新理论提供基础。1文献研究:全面查阅了近年来国内外2型糖尿病IR、过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)γ研究、实验性2型糖尿病IR动物模型的相关研究文献资料,对目前现代医学和中医学对于2型糖尿病IR的发病机理、治疗用药、研究方法;对于PPARγ的近期研究成果;动物模型的建立及研究方法等概况进行了较为系统的总结和综述,掌握了相关项目科研前沿动态。2理论研究:在中医理论指导下,选取IR作为中医药治疗2型糖尿病的切入点,综述了目前清热泻火补气扶正治法在2型糖尿病IR临床治疗中的应用现状,并对2型糖尿病IR发生发展的中医病机进行了阐述,在以往认识的基础上提出了IR及其相关病证“壮火食气”的病机假说和泻火解毒祛邪与补气扶正相结合的治法,对于阐发2型糖尿病IR的中医病因病机,寻找积极有效的治疗方法具有重要意义,丰富了2型糖尿病IR的中医病机学及治法学内容。3实验研究研究目的:观察黄连人参对药对实验性2型糖尿病IR大鼠的治疗作用及机制。研究方法:以长期高糖高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法复制实验性2型糖尿病IR大鼠动物模型,应用黄连人参对药对其进行干预,以吡格列酮作为阳性对照药,观察药物对实验性2型糖尿病IR大鼠糖代谢、脂代谢、胰岛素敏感性、胰腺病理形态学、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、游离脂肪酸(FFA)水平和PPARγ基因表达等的影响。研究结果:①模型评价:成功复制了实验性2型糖尿病IR大鼠模型,该实验模型动物表现为高血糖、高胰岛素血症、高FFA和高水平TNF-α,其胰岛素作用指数(IAI)明显低于正常动物,不仅表现IR,且有部分胰岛β细胞功能受损,符合2型糖尿病IR临床特点。药物治疗后,其检测结果均有不同程度的改善,用以评价药物疗效结果可信。可操作性强,死亡率低,成功率高,经济成本适宜,为研究2型糖尿病及IR的理想载体。②基础药效研究:在成功建立实验性2型糖尿病IR大鼠模型的基础上,观察黄连人参对药对于实验性2型糖尿病IR大鼠糖、脂代谢以及胰腺病理形态学、主要肝功能指标改变的影响。糖代谢指标血清生化检测结果表明,黄连人参对药能够明显降低模型动物空腹血糖水平,
宋恩峰[2]2004年在《黄芪对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制探讨》文中认为近年来,糖尿病(Diabetes mellitus,DM)发病率在全球范围内逐渐上升,其危害愈来愈引起人们的重视。糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病微血管常见并发症之一。其发病机制涉及多种因子。结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)及血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)与肾脏病的关系已成为国际研究热点。CTGF在糖尿病肾病的发生发展中起重要作用。CTGF是转化生长因子β_1,(Transforming growth factor-β_1,TGF-β1)的下游效应介质,但CTGF不介导TGF-β_1的抗增殖和抗炎作用,而仅介导TGF-β_1的促细胞基质合成作用。VEGF是内皮细胞的特异性有丝分裂源,促进内皮细胞增殖、新生血管形成,增加血管通透性,是导致DN早期微量蛋白尿的主要原因之一,并与其它因素一起参与肾小球硬化。 肾小管是连接肾小球与肾间质的枢纽。肾小管上皮细胞在肾间质纤维化的发生与进展中起何作用,值得进一步研究。 研究显示,中药黄芪有保护肾功能,减轻蛋白尿作用,但其确切机制仍未明了。目前尚未见黄芪对糖尿病大鼠CTGF及VEGF影响的报道,亦未见黄芪对体外培养肾小管上皮细胞转分化影响的研究。故本研究分体内与体外两部分。 目的:在体内,观察黄芪对2型糖尿病大鼠CTGF、VEGF的影响;探讨其机制;在体外,观察黄芪含药血清对肾小管上皮细胞CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)等的影响。 方法:(1)体内试验:采用一侧肾切除+高糖高脂饮食+链脲佐菌素法制备2型糖尿病大鼠模型。实验分为4组:①糖尿病组:建立DM模型;②黄芪组;③厄贝沙坦组;④假手术组。观察各组血糖、血胰岛素、血脂、肾重/体重、肾小球面积及体积、尿微量白蛋白等,免疫组化法观察VEGF、TGF-β1、CTGF、IV型胶原、纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)表达;RT-PCR法测肾皮质CTGFmRNA表达水平。(2)体外实验:体外培养肾小管上皮细胞(NRK-52E)。分为3组:①10%正常大鼠血清组;②10%正常大鼠血清+TGF-β1组;③10%含黄芪大鼠血清+TGF-β_1组。作用48h后,观察NRK-52E形态变化,RT-PCR法观察CTGF mRNA基因表达;Western blot法观察CTGF及α-SMA蛋白表达,流式细胞仪检测α-SMA表达。 结果:(1)体内试验:糖尿病组大鼠血糖、血胰岛素、TC、TG、Ccr、尿微
王世东[3]2007年在《清热益气中药配伍治疗2型糖尿病机制研究》文中研究表明随着社会经济发展,人们饮食热量摄入增多,体力活动相对不足,2型糖尿病的发病率和患病率也呈进行性增长趋势,其众多的患病人数和严重的并发症为社会带来沉重的医疗负担。胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是引起胰岛β细胞损伤并进一步导致2型糖尿病的重要原因,中医药改善胰岛素抵抗、保护胰岛β细胞功能是中医药治疗2型糖尿病很有希望取得突破的研究热点。目的本课题基于中医药治疗2型糖尿病的临床实践经验,在导师赵进喜教授的指导下,将《内经》“壮火食气”病机理论应用于2型糖尿病胰岛素抵抗导致胰岛β细胞损伤的中医药治疗理论研究和实验研究,提出2型糖尿病存在火热耗伤正气的病机,可采用“热者寒之”的治疗原则,应用清热益气治法进行治疗。选用临床有效的清热、益气中药配伍作为治疗药物,观察其对2型糖尿病IR和继发的β细胞功能损害的影响,探讨2型糖尿病“壮火食气”病机和清热益气治法的治疗作用机制,为建立中医药治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的新病机理论和治疗方法提供依据。方法1.文献综述:全面查阅近年来国内外2型糖尿病、胰岛素抵抗、胰岛β细胞损伤、过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)γ研究、实验性2型糖尿病IR动物模型的相关研究文献资料。对目前现代医学和中医学对于2型糖尿病IR的发病机理、治疗用药、研究方法,对于PPARγ的近期研究进展、动物模型的制作方法等进行了较为系统的综述和总结。2.理论研究:在中医理论指导下,选取胰岛素抵抗导致胰岛β细胞损伤作为中医药治疗2型糖尿病的切入点,综述了目前2型糖尿病中医临床治疗中的现状,并对胰岛素抵抗导致2型糖尿病发生发展的中医病机进行了探讨。由此,在以往研究的基础上提出了胰岛素抵抗进一步导致胰岛β细胞损伤的“壮火食气”病机假说和清热泻火与益气扶正相结合的治疗方法,以探索2型糖尿病发病的中医病因和病机,寻找有效的中医治疗方法。3.实验研究:以高脂高热量饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法制作具有胰岛素抵抗特征的实验性2型糖尿病大鼠动物模型,以PPARγ配体盐酸吡格列酮作为阳性对照药,观察清热、益气中药配伍对实验性2型糖尿病大鼠糖代谢、脂代谢、胰岛素敏感性、胰腺病理形态学、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、游离脂肪酸(FFA)水平和PPARγ基因表达等的影响。结果①建立动物模型:制作实验性2型糖尿病大鼠模型,该实验模型动物表现为高血糖、高胰岛素血症、高FFA和高水平TNF-α等特征,其胰岛素敏感指数(IAI)明显低于正常动物,不仅表现有胰岛素抵抗,且有部分胰岛β细胞功能受损,符合2型糖尿病临床特点。药物治疗后,相关检测指标均有不同程度的改善,用以评价药物疗效结果可信,可操作性强,死亡率低,成功率高,能够较好的模拟人类2型糖尿病病理生理特点。②药物作用研究:在成功建立实验性2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型的基础上,观察清热、益气中药配伍对于模型动物糖、脂代谢以及胰腺病理形态学的影响。糖代谢指标血清生化检测结果表明:清热、益气中药配伍能够明显降低模型动物空腹血糖水平,降低空腹胰岛素水平,改善胰岛素抵抗,其作用效果与对照药盐酸吡格列酮效果相当。脂代谢指标血清生化学检测结果表明:清热、益气中药配伍能够明显降低血清胆固醇、甘油叁酯、低密度脂蛋白-胆固醇含量,升高高密度脂蛋白-胆固醇含量,对脂肪代谢的调节作用与盐酸吡格列酮效果相当。胰腺组织HE染色结果显示:高脂高热量饲料喂养加小剂量STZ腹腔注射诱导的模型动物胰腺内胰岛数目较少,胰岛形态欠规则,细胞排列紊乱,伴有细胞缺失、塌陷,盐酸吡格列酮和中药治疗能减轻胰岛病理形态损害。胰岛β细胞免疫组织化学染色结果,模型动物胰岛β细胞胞浆中胰岛素染色颗粒减少,β细胞浅染,细胞排列松散,分布不规则,部分细胞呈空虚状态,在用药后上述病理变化有不同程度的改善。③作用机制研究:在药效学实验研究基础上,进行药物作用机制探讨。观察清热、益气中药配伍对实验性2型糖尿病IR大鼠血TNF-α水平的影响。结果显示:清热、益气中药配伍可以显着降低模型动物血TNF-α水平,效果与盐酸吡格列酮相似,提示清热、益气中药配伍可能通过降低TNF-α水平,解除由TNF-α导致的对脂肪和肌肉细胞葡萄糖转运子(GLUT)4的表达抑制、胰岛素受体自身磷酸化及第二信使的活化抑制、刺激脂肪分解以及对胰岛β细胞凋亡基因表达的调节等作用,从而改善胰岛素敏感性,减轻胰岛β细胞损伤。观察清热、益气中药配伍对实验性2型糖尿病大鼠血FFA水平的影响,结果显示:清热、益气中药配伍可明显降低模型动物血FFA水平,作用效果与盐酸吡格列酮作用相似,提示清热、益气中药配伍可能通过降低高FFA的脂毒性作用而达到改善胰岛素抵抗及糖、脂代谢的异常。采用Western blot蛋白印记分析方法研究清热、益气中药配伍对实验性2型糖尿病大鼠脂肪组织PPARγ蛋白质表达的影响,结果表明:清热、益气中药配伍可以上调模型大鼠脂肪组织PPARγ蛋白质表达,其作用与盐酸吡格列酮相似,提示清热、益气中药配伍治疗2型糖尿病的作用机制可能是通过激活脂肪组织中的PPARγ,上调其基因表达,降低FFA水平,改善血脂紊乱,抑制TNF-α等炎症因子,增强胰岛素敏感性,降低血糖,减轻由胰岛素抵抗导致的高血糖、血脂紊乱、高FFA、高TNF-α形成的糖脂毒性,减轻胰岛病理改变,保护胰岛β细胞功能。结论本研究从不同途径,多层次、多靶点研究清热、益气中药配伍改善2型糖尿病胰岛素抵抗保护胰岛β细胞功能的作用机制,初步揭示了2型糖尿病由胰岛素抵抗导致胰岛β细胞损伤的中医“壮火食气”病机特点和清热益气治法的作用机制,为中医药治疗2型糖尿病提供新的治疗理念和研究思路。
郭呈林[4]2014年在《苁归益肾胶囊对2型糖尿病肾脏疾病大鼠OPN、TGF-β1的影响及对2型糖尿病早期肾脏疾病患者临床疗效的观察》文中提出目的：观察具有温阳益肾、活血化瘀功效的中药复方（苁归益肾胶囊）对早期2型糖尿病肾脏疾病患者中医证候的改善，对反映血糖和肾功能的实验室指标（血糖、糖化血红蛋白、血清肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白、尿白蛋白比肌酐）及血清骨桥蛋白（OPN）、转化生子因子1（TGF-β1）水平的影响；同时观察中药复方（苁归益肾胶囊）对2型糖尿病肾脏疾病大鼠肾脏损害的治疗作用，及对相关炎症因子OPN、TGF-β1及OPNmRNA表达水平的干预作用。并从中医理论的角度及炎症因子角度初步探讨中药复方（苁归益肾胶囊）防治2型糖尿病肾脏疾病的作用环节和保护机理，为中医药防治2型糖尿病肾脏疾病提供实验研究、临床资料与理论依据。方法：1.临床研究研究病例均来自于安徽中医药大学第一附属医院内分泌科门诊及病房收住的2型糖尿病早期肾脏疾病患者，将确诊的60例2型糖尿病肾脏疾病早期病变患者随机分为对照组和治疗组。两组均采用以洛汀新（10mg口服，一日一次）为基础治疗方案，治疗组在此基础上加用苁归益肾胶囊（一次五粒，一天叁次）。治疗前后分别记录患者的中医证候积分、空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、肾功能（BUN、SCr、mALB、ACR）等指标，并检测血清OPN及TGF-β1水平的变化，并比较治疗后两组疗效的差异。2.实验研究将70只雄性SD大鼠随机挑选10只作为假手术组，喂食普通饲料，除假手术组外，剩余大鼠均以高脂饲料喂养。喂养8周后，假手术组大鼠沿皮肤、肌层切开后再行缝合。剩余60只大鼠行单侧肾脏结扎手术后STZ腹腔注射，诱发出2型糖尿病肾脏疾病大鼠模型。对造模成功的大鼠进行随机分组，分为叁组，分别为：模型对照组、中药低剂量组和中药高剂量组。假手术组和模型对照组予以蒸馏水灌胃，中药高、低剂量组给予不同剂量苁归益肾胶囊灌胃。灌胃12周后观察糖尿病肾脏疾病大鼠一般情况及血糖、糖化血红蛋白、血清肌酐、尿素氮、24h尿量、24h尿蛋白量，检测血清OPN、TGF-β1水平，取肾脏组织，采用RT-PCR方法检测OPN-mRNA的表达水平。结果：1.临床试验结果临床观察表明，治疗后治疗组中医证候积分与对照组相比，优于对照组（P＜0.05），与同组治疗前相比有明显改善（P＜0.01）。治疗组总有效率为76.9%，对照组总有效率为53.6%；治疗后，治疗组的空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白明显降低（P＜0.01），且治疗组改善优于对照组（P＜0.05）；治疗后，两组血清肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白、尿白蛋白比肌酐较治疗前均有所降低（P＜0.05或P＜0.01），且治疗组改善优于对照组（P＜0.05）；治疗组和对照组血清OPN、TGF-β1水平较治疗前均明显降低（P＜0.01），且治疗组改善优于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。2.动物实验结果动物实验结果表明：造模后，与假手术组相比，大鼠在血糖、糖化血红蛋白、24h尿量、肌酐、尿素氮、24h尿蛋白量均具有显着差异性（P＜0.01），大鼠造模后体重明显升高（P＜0.01）。治疗后中药高、低剂量组与模型对照组比较，血糖、糖化血红蛋白水平明显降低（P＜0.01）。治疗后中药高、低剂量组大鼠24h尿量、肌酐、尿素氮、24h尿蛋白量与模型对照组比较均明显下降（P＜0.01），中药高、低剂量组大鼠血清TGF-β1水平低于模型对照组（P＜0.01），中药高、低剂量组大鼠肾脏OPNmRNA表达水平低于模型对照组组（P＜0.01）。结论：1.苁归益肾胶囊可改善2型糖尿病肾脏疾病患者中医证候积分，降低患者空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、血清肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白及尿白蛋白比肌酐。2.苁归益肾胶囊可降低2型糖尿病肾脏疾病患者血清OPN和TGF-β1的水平，减轻炎症反应，保护肾脏功能。3.苁归益肾胶囊能有效降低2型糖尿病肾脏疾病大鼠血糖、血清肌酐、尿素氮及24小时尿蛋白量，并改善STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏病变，具有防治2型糖尿病肾脏疾病的作用。4.2型糖尿病肾脏疾病模型大鼠血清OPN、TGF-β1以及肾脏OPNmRNA表达水平明显高于假手术组大鼠，表明模型组大鼠处于慢性炎症状态，提示OPN及TGF-β1可能参与糖尿病肾脏病变的发病过程，同时也提示炎症因素在糖尿病的发病机制中起重要媒介作用。5.苁归益肾胶囊防治2型糖尿病肾脏疾病的机制可能是通过降低血糖、减少尿蛋白排泄以及抑制炎症因子释放，下调OPN、TGF-β1水平及肾脏OPNmRNA的表达水平而实现的。
刘洪凤[5]2007年在《黄芪多糖对2-DM大鼠胰岛素抵抗的早期干预作用》文中认为目的:研究黄芪多糖(Astragaluspolysaccharides,APS)对2型糖尿病(2-Diabetes; 2-DM)胰岛素抵抗大鼠葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和抵抗素(resistin)基因mRNA以及蛋白质表达的影响;APS对IR相关指数的影响,从而探讨APS对2-DM大鼠胰岛素抵抗的早期干预作用。方法:Wistar大鼠喂以高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)建立2型糖尿病早期胰岛素抵抗大鼠模型。将Wistar大鼠随机分为正常对照组、2-DM胰岛素抵抗模型对照组、黄芪多糖大剂量(800mg/kg/d)治疗组、黄芪多糖中剂量(400mg/kg/d)治疗组、黄芪多糖小剂量(200mg/kg/d)治疗组。用半定量RT-PCR方法检测GLUT4及resistin基因mRNA的表达水平,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测GLUT4及Resistin的蛋白质表达水平。检测了大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(fasting plasma insulin,FINS)、甘油叁酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、胆固醇(CH)、的含量和胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛素分泌指数(IS)、胰岛素抵抗指数(IRI)、β细胞功能指数(HβCI)等相关指标的变化。结果:1、黄芪多糖能够显着降低2-DM大鼠胰岛素抵抗。2、黄芪多糖治疗组大鼠较2-DM胰岛素抵抗模型组大鼠GLUT4基因mRNA表达显着增高(P<0.01)、同时蛋白质的表达也显着增高。3、黄芪多糖治疗组大鼠较2-DM胰岛素抵抗模型组大鼠resistin基因mRNA表达显着降低(P<0.01)、同时其蛋白质的表达也显着降低。4、黄芪多糖能够显着降低2-DM胰岛素抵抗大鼠的血糖。5、黄芪多糖能显着降低2-DM胰岛素抵抗大鼠血清TG、CH、LDL含量,同时显着升高血清HDL含量。结论:黄芪多糖通过增加2-DM胰岛素抵抗大鼠GLUT4基因mRNA及其蛋白质的表达,降低2-DM大鼠resistin基因mRNA及其蛋白质的表达从而降低胰岛素抵抗。黄芪多糖可以降低2型糖尿病大鼠血糖和改善体内脂代谢紊乱。
宋恩峰, 刘晶晶, 贾汝汉, 高苹, 丁国华[6]2008年在《黄芪对2型糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子的影响》文中提出目的:探讨黄芪对2型糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法:将SD大鼠分为假手术组、糖尿病肾病组、黄芪治疗组(予黄芪注射液5ml/kg灌胃)。于实验12周末观察血糖、血胰岛素、血脂、肾重/体重、免疫组化观察肾脏CTGF和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:糖尿病肾病组大鼠血糖、Ccr、肾重/体重、肾脏CTGF和TGF-β1表达明显高于假手术组[(18.6±3.2)vs(4.2±0.3),(1.82±0.03)vs(0.67±0.02),(0.95±0.05)vs(0.37±0.01),(0.52±0.03)vs(0.28±0.02),(0.65±0.04)vs(0.27±0.02)],肾组织CTGF的表达与TGF-β1表达呈正相关(r=0.793,r=0.823)。黄芪治疗组可显着降低以上指标[(15.1±2.1),(1.43±0.11),(0.62±0.04),(0.38±0.03),(0.41±0.03)]。结论:2型糖尿病肾组织CTGF表达升高,黄芪注射液可抑制其表达,从而起到保护肾脏的作用。
马丹, 谢晓娜, 邹敬韬, 刘玉佳, 孙中华[7]2014年在《黄芪注射液对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制》文中提出目的:观察黄芪注射液对大鼠血脂代谢、自由基氧化损伤和肾功能等方面的影响,探讨其对2型糖尿病大鼠肾脏的保护机制。方法:将80只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、卡托普利组和黄芪注射液组,每组20只。除对照组外,其他各组大鼠每天给予高糖高脂饮食,8周后腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)1次建立2型糖尿病模型。黄芪注射液组大鼠于造模成功后第17周开始每天腹腔注射黄芪注射液2mL·kg-1,4周后检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血清总胆固醇(TC)、甘油叁酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、尿微量白蛋白(Ualb)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平、尿蛋白排泄率(UAER)和肌酐清除率(CCr),检测肾脏组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:与对照组比较,模型组大鼠FBG、TC、TG、LDL-c、MDA、UAlb、BUN、SCr和UAER升高(P<0.05或P<0.01),HDL-c水平、SOD和GSH-Px活性、CCr降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,黄芪注射液组大鼠血清TC、TG和LDL-c水平,肾组织MDA水平,UAER和血清UAlb、BUN、SCr水平均显着降低(P<0.05或P<0.01),SOD和GSH-Px活性及CCr显着升高(P<0.05或P<0.01),HDL-c水平无明显变化。结论:黄芪注射液能纠正2型糖尿病大鼠的脂质代谢紊乱,抵抗自由基介导的脂质过氧化,对糖尿病大鼠的肾脏有保护作用。
怕尔木加布[8]2018年在《蒙药新药沙芪胶囊对2型糖尿病胰岛素抵抗性大鼠的降糖作用的药效学研究及急性毒理学研究》文中研究表明目的通过对蒙药新药沙芪胶囊的进行急性毒性实验以及该药对2型糖尿病胰岛素抵抗型的大鼠的降糖功效的观察,对蒙药新药沙芪胶囊安全性与降低血糖作用机理进行探讨。方法(1)选取20只正常昆明小鼠,体重20±2g,雌性10只,禁食24小时后经口灌胃给沙黄胶囊(20mL/kg),服药后按常规喂养,观察并记录给药后7天内的小鼠情况。以此测定该药的最大耐药量(总剂量为60g/kg,人临床临床药量380倍)。(2)Wistar大鼠120只高脂饲料喂养32天后腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)制造2型糖尿病胰岛素抵抗型糖尿病大鼠模型;造模成功后,将大鼠分为正常组、模型组、阳性组、沉淀给药组、全药给药组、上清给药组六组(阳性给予二甲双胍,剂量为0.045g/kg、沙芪胶囊给药剂量为10.8g/kg、连续用药4周)。4周后,经腹主动脉取血,检测空腹血糖、血清中胰岛素(INS)含量、糖化血红蛋白(HbAlc)、糖化血清蛋白(GSP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胆固醇(CHO)、甘油叁酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)等指标。并取适量肾组织做病理切片并对其进行观察。(3)统计学分析。结果(1)沙芪胶囊小鼠灌胃给药测不到半数致死量LD_(50)。(2)沙芪胶囊的上清组、沉淀组、全药组都可以不同程度的降低2型糖尿病胰岛素抵抗型大鼠的血糖浓度,其中上清液组降低更为显着(p<0.05),有统计学意义;与正常相比模型组大鼠的体重明显减轻(p<0.05),有统计学意义,与模型组全药组比体重减轻有改善(p<0.05),其他组无明显变化(p>0.05);各组大鼠之间的INS、HbAlc含量并没有显着的差异(p>0.05),无统计学意义;与正常组GSP含量相比模型组明显提高(p<0.01),模型组GSP含量相比上清组大鼠有显着降低(p<0.01),全药组降低(p<0.05),阳性组和沉淀组没有明显区别(P>0.05);沙芪胶囊上清组、沉淀组、全药组均能增加2型糖尿病胰岛素抵抗型大鼠的肝脏中的SOD的水平(p<0.01),降低MDA的水平(p<0.01),均有统计学意义;沙芪胶囊上清组、沉淀组、全药组对血脂含量中对TG的含量有有明显的降低作用,其中全药组最为显着,对CHO、HDL-C、LDL-C、的含量没有明显的作用。结论(1)沙芪胶囊安全可靠。(2)蒙药新药沙芪胶囊具有改善T2DM抵抗型大鼠的空腹血糖水平、体重减轻程度,其机制可能与抗氧化作用有关,也可抑制甘油叁酯活性。
王春怡[9]2009年在《黄芪散干预2型糖尿病胰岛素抵抗机制及制剂基础研究》文中认为胰岛素抵抗是2型糖尿病(T2DM)发生的重要因素和显着特征。因此针对胰岛素抵抗(IR)的治疗是防治糖尿病(DM)及代谢综合征的重中之重。中药防治疾病时主要采用复方的形式,体现了整体调节,综合治疗的特点。中药复方发挥其疗效的物质基础来自于其化学成分或活性部位,然而仅仅的几个单体化合物无法代表全方,应更重视化学成分群体或有效部位的作用。将复方有效部位进行配伍应用,则有可能使全方药效呈现增效协同的作用,同时降低不良反应的程度。因此,以中药有效部位进行组方,研制创新药物,创建在中医药理论指导下具有示范效应的创新中药的研究模式,提高中药产业的整体素质和竞争力。黄芪散古方源自《圣济总录》,组方为:葛根、黄芪、桑白皮。叁药相伍,益气健脾,益气清热,生津止渴,叁消并治,共奏标本兼顾之效。大量研究表明叁药对T2DM或IR具有良好的疗效,其药效物质基础及作用机制各有所不同,因此认为该方可能通过多途径、多靶点的综合效应来改善T2DM-IR。目前基于黄芪散整方的研究未见有报道,这使得该方的临床应用及开发具有一定的局限性。本研究首先立足于整方,试图阐明黄芪散干预T2DM-IR的作用及作用机制,并采用一系列现代中药制剂技术,富集各药有效部位,为黄芪散的进一步制剂开发奠定基础。第一部分文献研究文献研究方面全面查阅了近年来国内外T2DM-IR的现代医学研究进展,包括IR的流行病学研究、病因研究以及发病机制等相关文献资料,同时对DM的中医认识、黄芪散各药的化学成分和药理学研究进展进行文献研究。对目前现代医学和中医学对于T2DM-IR的发病机理、治疗用药,T2DM-IR分子机制的近期研究成果,以及动物模型的建立及研究方法等概况进行了较为系统的总结和综述,掌握了相关项目科研的前沿动态。第二部分实验研究1.黄芪散干预实验性2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制研究通过建立STZ所致DM小鼠模型、氢化可的松琥珀酸钠(HCSS)诱导的IR小鼠模型初步评价黄芪散对DM及IR的干预作用。结果表明黄芪散降低DM小鼠的空腹血糖(FBG),增加糖耐量,同时提高糖耐量异常而尚未形成DM的小鼠对胰岛素的敏感性,改善胰岛素抵抗。采用STZ及高脂饮食建立T2DM-IR大鼠模型。通过对模型大鼠FBG、空腹胰岛素水平(FINS)、糖耐量、胰岛素耐量、胰岛素敏感指数(ISI)和抵抗指数(HOMA-IR)、血清和肝脏的脂质代谢及游离脂肪酸(FFA)水平测定、胰腺HE染色病理形态学检查,探讨黄芪散对T2DM-IR的糖脂代谢和IR的影响。结果表明黄芪散显着降低T2DM-IR大鼠的FBG,改善糖耐量,降低IR所形成的高FINS水平,提高胰岛素耐量,增加ISI指数和降低HOMA-IR指数,对胰腺组织结构的病变具有保护作用;同时黄芪散可调节血脂、肝脂、下调血清及肝脏中FFA的水平。提示黄芪散可改善糖脂代谢、提高胰岛素的敏感性发挥其治疗IR的作用。在建立T2DM-IR模型大鼠的基础上,通过采用放免法测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、瘦素(leptin)水平,RT-PCR和免疫组化法测定肝脏、骨骼肌和脂肪组织中GLUT-4、IRS-1的mRNA和蛋白的表达,RT-PCR法测定脂肪组织中PPAR-γmRNA,探讨黄芪散改善IR的机制。结果表明黄芪散改善IR的机制表现在:①上调T2DM-IR大鼠骨骼肌和脂肪组织中GLUT-4的mRNA和蛋白的表达,提高肝脏、骨骼肌和脂肪组织中IRS-1的mRNA和蛋白的表达,从而调节胰岛素信号转导通路,促进葡萄糖的转运,增加外周组织对胰岛素的敏感性;②显着下调TNF-α,leptin的水平,改善胰岛素信号通路转导,减少脂肪分解,纠正脂肪-胰岛内分泌轴的反馈机制,改善机体对瘦素的敏感性,从而改善机体对胰岛素的敏感性;③促进脂肪组织中调控胰岛素敏感性的重要受体PPAR-γmRNA的表达,间接发挥其改善IR的作用。2.黄芪散的制剂基础研究对不同产地葛根、黄芪药材进行质量考察,筛选质量中等的药材进行工艺考察。对葛根总黄酮的提取纯化工艺进行了研究,考察不同乙醇浓度,溶媒倍量,提取时间、提取次数和提取温度对总黄酮转移率和纯度的影响,建立了四因素叁水平的正交试验,最终确立了最佳的提取工艺为:10倍量70%乙醇加热回流提取2次,每次2小时。采用大孔吸附树脂对总黄酮粗提物进行了纯化处理,筛选了不同型号的树脂,考察树脂的静态、动态吸附性能,并对上样液浓度和流速,洗脱溶剂浓度和体积等相关因素进行优化,确立了最佳的纯化工艺为:AB-8型大孔吸附树脂,药材与干树脂重量比2:1,上样液浓度为0.10g生药/ml,依次用10BV蒸馏水、10BV50%乙醇以1～3ml/min的洗脱速度洗脱,收集50%乙醇部分,减压回收乙醇,冷冻干燥,得到的总黄酮纯度在62.0%以上。对10个批次的葛根药材进行总黄酮提取物的制备,建立薄层鉴别方法;确定提取物干燥失重限度;建立紫外—可见分光光度法以及高效液相色谱法对提取物中总黄酮和葛根素的含量测定方法,初步建立葛根总黄酮提取物的质量标准。对黄芪总皂苷的提取纯化工艺进行了研究,考察不同乙醇浓度,溶媒倍量,提取时间、提取次数和提取温度对总皂苷转移率和纯度的影响,建立了四因素叁水平的正交试验,最终确立最佳提取工艺为:8倍量70%乙醇加热回流提取3次,每次1.5小时。采用大孔吸附树脂对总皂苷粗提物进行了纯化处理,筛选了不同型号的树脂,考察了树脂的静态、动态吸附性能,并对上样液浓度和流速,洗脱溶剂浓度和体积等相关因素进行了优化,确立了最佳的纯化工艺为:药材与干树脂重量比3:1,上样液浓度为0.075g生药/ml,依次用10BV蒸馏水、10BV0.5%NaOH、10BV10%乙醇、10BV70%乙醇以1～3ml/min的洗脱速度洗脱,收集70%乙醇部分,减压回收乙醇,冷冻干燥,得到的总皂苷纯度在68.0%以上。对10个批次的黄芪药材进行总皂苷提取物的制备,建立薄层鉴别方法;确定提取物干燥失重限度;建立紫外—可见分光光度法以及高效液相色谱法对提取物中总皂苷和黄芪甲苷的含量测定方法,初步建立黄芪总皂苷提取物的质量标准。
刘志霞[10]2011年在《双益降糖方对2型糖尿病大鼠的作用及其机制初探》文中认为目的通过双益降糖方对2型糖尿病大鼠糖耐量、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂和空腹胰岛素水平的影响,明确该方的治疗效果,探讨其可能的作用机制。通过双益降糖方及所含单体成分对胰岛素抵抗(IR)细胞的影响,探讨该方改善IR的作用机制。方法第一部分:SPF级雄性wistar大鼠60只,随机抽取10只作为正常对照组(NC),普通饲料喂养,其余大鼠采用高脂饲料喂养4周后,两次腹腔注射小剂量的链脲佐菌素(STZ)。一周后测定大鼠糖耐量。以空腹血糖(FBG)≧11.1mmol/L为成模标准。选取FBG在11.1-25.0mmol/L之间的大鼠40只,随机分为4组:模型对照组(DM)、罗格列酮阳性对照组(RM)、双益降糖方高剂量组(SG)、双益降糖方低剂量组(SD),每组10只。SG组和SD组分别按生药量23.43g/kg、5.86g/kg灌胃,RM组按0.29mg/kg灌胃,NC组和DM组灌同体积的纯净水。实验结束前一天检测糖耐量。实验结束日取尾静脉血检测空腹HbA1c,然后腹主动脉取血,离心,留取血清检测血脂、空腹血清胰岛素,最后处死留取胰腺固定后,做HE染色。第二部分:用1640培养基,在370C, 5%CO2条件下培养HepG2细胞,待细胞长满瓶底后,用胰酶和EDTA消化,细胞脱落后加FBS终止反应,细胞悬液离心后,弃上清,加完全培养基,将细胞吹打成细胞悬液,计数至10~5个/ml。将细胞接种于96孔板中,每孔体积200μl,继续培养,细胞贴壁占瓶底的80%以上时,弃上清,加含不同浓度胰岛素的培养基,每孔200μl,同时设正常对照组,分别测定加胰岛素后16h、24h、36h和48h各组细胞上清葡萄糖含量,同期在显微镜下观察细胞的形态学变化,并通过MTT法对细胞活性进行评价,确定最佳IR细胞模型。同上述实验过程,建立最佳IR细胞模型,同时设正常对照组。模型组建立后分为双益降糖复方不同剂量组和空白模型组。各组弃上清,加入含不同浓度中药的完全培养基;正常组和空白模型组加入完全培养基。药物干预到24h后测定各组细胞上清糖含量,移出上清液,Hank’s液洗1次,加入MTT液,再加入FBS,继续培养4h,弃上清,加入二甲基亚砜(DMSO),振荡10min,用酶标仪测定吸光度(OD)值。双益降糖方中的有效成分:齐墩果酸、药根碱、阿魏酸、大黄酸、马钱苷、葛根素、大豆苷、黄芪甲苷8种药物,每种药物6个浓度,同法作上述实验。结果糖代谢生化指标结果显示:SD组、RM组空腹血糖和餐后0.5h血糖和HbA1c值较DM组明显降低,但SD组和RM组间无差异;SG组餐后0.5h血糖和HbA1c较DM组明显降低,且与RM组无差异。脂代谢生化指标结果显示: SD组、RM组的甘油叁酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)明显低于DM模型组,但SD组和RM组间无差异。空腹血清胰岛素结果显示: SG组、SD组和RM组胰岛素均明显高于DM组,但SG组、SD组和RM组间无差异。胰腺HE染色结果显示: DM组与NC组比较:胰岛数量减少,结构破坏,边界不整齐,分布稀疏,细胞核减少;SD组及RM组较DM组稍改善。细胞实验结果显示:①本次实验的最佳IR细胞模型是浓度为10~(-6)mol/l的胰岛素孵育24h。②浓度为0.03125 mg/ml的双益降糖复方溶液干预IR细胞模型后,可改善IR状态。③双益降糖方有效成分实验结果表明:除黄芪甲苷外的7种药物均有改善IR的作用,并且在2×10~(-6)-2×10~(-1)mg/ml范围内,齐墩果酸、药根碱、大黄酸和葛根素随浓度的增加,其葡萄糖的消耗量也逐渐增加;而阿魏酸、马钱苷随浓度的增加,其葡萄糖的消耗量逐渐降低;大豆苷与其浓度无明显量效关系。黄芪甲苷无明显改善IR的作用。各组MTT值无差异。结论双益降糖方通过改善糖脂代谢,改善IR,可在一定程度上促进受损胰岛β细胞修复,促进胰岛素分泌而起到降糖作用。
参考文献：
[1]. 黄连人参对药改善2型糖尿病胰岛素抵抗机制研究[D]. 姜淼. 北京中医药大学. 2006
[2]. 黄芪对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制探讨[D]. 宋恩峰. 武汉大学. 2004
[3]. 清热益气中药配伍治疗2型糖尿病机制研究[D]. 王世东. 北京中医药大学. 2007
[4]. 苁归益肾胶囊对2型糖尿病肾脏疾病大鼠OPN、TGF-β1的影响及对2型糖尿病早期肾脏疾病患者临床疗效的观察[D]. 郭呈林. 安徽中医药大学. 2014
[5]. 黄芪多糖对2-DM大鼠胰岛素抵抗的早期干预作用[D]. 刘洪凤. 佳木斯大学. 2007
[6]. 黄芪对2型糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子的影响[J]. 宋恩峰, 刘晶晶, 贾汝汉, 高苹, 丁国华. 中国中西医结合肾病杂志. 2008
[7]. 黄芪注射液对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制[J]. 马丹, 谢晓娜, 邹敬韬, 刘玉佳, 孙中华. 吉林大学学报(医学版). 2014
[8]. 蒙药新药沙芪胶囊对2型糖尿病胰岛素抵抗性大鼠的降糖作用的药效学研究及急性毒理学研究[D]. 怕尔木加布. 内蒙古民族大学. 2018
[9]. 黄芪散干预2型糖尿病胰岛素抵抗机制及制剂基础研究[D]. 王春怡. 广州中医药大学. 2009
[10]. 双益降糖方对2型糖尿病大鼠的作用及其机制初探[D]. 刘志霞. 河北联合大学. 2011
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